면역글로불린 G 검출을 위한 종이 기반 면역 분석

아민 기능화된 여과지 디스크로 시작하여 가교 시약인 글루타르알데히드에 담급니다.

글루타르알데히드는 아민-알데히드 반응을 통해 아민기와 반응합니다.

디스크를 튜브에 넣습니다. 물을 넣고 흔들어 흡인하여 잔류 글루타르알데히드를 제거합니다.

건조 후, 면역글로불린-G-Fc 단편 특이적 포획 항체를 도입합니다. 이러한 항체의 아민기는 종이 디스크의 알데히드 그룹과 상호 작용하여 공유 결합을 촉진합니다.

세척하여 결합되지 않은 항체를 제거하고 비특이적 결합을 방지하기 위해 차단 완충액을 도입합니다.

다음으로, 면역글로불린 G 분자를 포함하는 테스트 샘플을 종이 디스크에 추가합니다. 면역글로불린 G 분자는 포획 항체와 상호 작용합니다.

사전 결합된 면역글로불린 G와 상호 작용하는 양 고추냉이 과산화효소 접합 IgG-Fc 단편 특이적 검출 항체와 오버레이합니다.

결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 세척하고 발색 기질과 과산화수소의 혼합물을 첨가합니다.

과산화수소가 있는 상태에서 양 고추냉이 과산화효소는 발색 기질의 산화를 촉매하여 디스크에 파란색을 생성하여 면역글로불린 G의 존재를 나타냅니다.

20밀리리터 유리병에 0.05% 글루타르알데히드 용액 5밀리리터를 첨가합니다. 이 용액에 아민 기능화 중유량 여과지 디스크 15개를 담그고 실온에서 흔들면서 1시간 동안 보관합니다. 동시에 이 단계를 반복하여 알데히드 기능화된 빠른 흐름 여과지 디스크 15개를 추가로 준비합니다.

종이 디스크에서 반응하지 않은 글루타르알데히드를 제거하려면 먼저 중간 유량 여과지 디스크와 고속 유량 여과지 디스크를 별도의 15밀리리터 원심분리기 튜브에 넣습니다. 그런 다음 각 튜브에 탈이온수 5밀리리터를 넣고 튜브를 10초 동안 흔듭니다. 피펫으로 흡인하여 물을 제거합니다. 두 번 반복하여 반응되지 않은 글루타르알데히드를 제거합니다.

그런 다음 섭씨 37도 오븐에서 종이 디스크를 건조시킵니다. 건조되면 밀리리터당 0.025밀리그램의 5마이크로리터 마우스 IgG-Fc 단편 항체를 중간 유량 여과지 디스크에 추가하고 8마이크로리터를 고속 유량 여과지 디스크에 추가합니다.

20분 동안 배양한 후, 항체를 제거하지 않고 각 종이 디스크에 10마이크로리터의 50밀리몰 PBS pH 7.4를 첨가합니다. 아민-알데히드 반응을 위해 40분 동안 배양합니다. 종이 타월 위에 0.2밀리리터의 세척 완충액으로 종이 디스크를 세척합니다. 세탁을 세 번 반복합니다.

종이 디스