Jejunum cryosections에서 Tuft 세포를 시각화하기 위한 면역형광 기반 방법

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정점 미세융모와 스풀 모양의 체세포가 있는 술 세포를 특징으로 하는 포르말린 고정, 젤라틴으로 채워진 마우스 공장 냉동 절편이 포함된 배양 접시로 시작합니다.

세포막을 투과화하기 위해 세제 함유 완충액으로 세척합니다.

알칼리성 항원 회수 용액을 추가합니다. 배양하여 고정 유도 단백질 가교를 끊고 염색을 위한 단백질을 드러냅니다.

비특이적 항체 결합을 방지하기 위해 차단 용액을 도포합니다.

틴 결합 단백질, 특히 술 세포에서 인산화된 액틴 결합 단백질을 표적으로 하는 1차 항체와 오버레이.

결합되지 않은 항체를 제거합니다. 형광단 접합 2차 항체, DNA 결합 염료 및 팔로이딘-형광 염료 접합체의 혼합물을 도입합니다.

2차 항체는 1차 항체에 결합하고, 팔로이딘-형광 염료 접합체는 액틴을 표지하며, DNA 결합 염료는 세포핵을 표시합니다.

결합되지 않은 성분을 제거하고 세제가 없는 완충액을 추가합니다.

섹션을 접착제로 코팅된 유리 슬라이드로 옮기고 매체와 함께 장착합니다.

공초점 현미경에서 내강 끝에서 강화된 형광과 확장된 빨간색 뿌리 덩어리가 있는 녹색 스풀 모양의 세포는 술 세포의 존재를 나타냅니다.

공장 절편을 준비하려면 먼저 극저온 조절기 챔버 온도와 물체 온도를 섭씨 영하 22도로 설정하십시오. 냉동 조직 블록을 극저온 조절기 챔버의 극저온 몰드에 최소 15분 동안 넣습니다. 15분 후 면도날로 블록을 반으로 잘라 공장의 가로 단면을 노출시킵니다. 블록의 절반을 극저온 조절기 어댑터에 장착합니다. 젤라틴으로 채워진 공장을 30미크론 두께의 절편으로 절편합니다. 냉동 겸자를 사용하여 절편을 35밀리리터의 PBS가 들어 있는 3밀리미터 배양 접시로 부드럽게 옮깁니다.

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밀리리터의 PBS-T로 각각 5분 동안 절편을 3회 세척한 후, 자유롭게 부유하는 절편이 들어 있는 접시에 새로 준비된 항원 회수 용액 3밀리리터를 첨가합니다. 그런 다음 뚜껑을 닫고 접시와 뚜껑 사이의 틈을 비닐 테이프 조각으로 밀봉한 다음 교배 인큐베이터에서 섭씨 50도에서 흔들지 않고 3시간 동안 배양합니다.

면역염색 후, PBS에서 염색된 절편의 접시를 입체 현미경으로 옮깁니다. AMS로 코팅된 흰색 유리 슬라이드 중앙의 물방울에 200마이크로리터의 PBS를 놓습니다. 그런 다음 P200 피펫 팁을 사용하여 접시에서 공장 절편 하나를 물방울로 옮깁니다.

섹션 정렬을 조정한 후 섹션 주변에 남아 있는 모든 PBS를 흡인합니다. 20마이크로리터의 수성 마운팅 매체를 추가하고 배지 위에 커버슬립을 놓습니다. 즉시 자일렌 기반 마운팅 매체로 커버슬립 가장자리를 밀봉하고 공초점 현미경 검사를 시작하기 전에 2-3시간 동안 건조시킵니다.

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Last updated: 18 July 2026