종양에 대한 이중특이성 항체 유도 T 세포 이동을 추적하는 In Vivo 기술

종양 관련 항원 또는 TAA를 과발현하는 피하 종양 이종이식편을 가진 마취된 면역 저하 마우스를 가져 가십시오.

루시페라아제 효소를 발현하는 이펙터 T 세포를 안와후로 주입합니다.

이펙터 T 세포 생존을 지원하는 사이토카인인 인터루킨 2를 피하 투여합니다.

T 및 종양 세포에 대한 결합 부위를 포함하도록 조작된 이중특이성 항체를 안와후로 주입합니다. 마우스가 복구되도록 합니다.

항체와 T 세포는 순환을 통해 종양에 도달합니다.

항체는 T 세포의 CD3와 종양 세포의 TAA에 결합하여 이펙터 T 세포가 종양 세포에서 세포사멸을 시작하는 독소를 방출하고 더 많은 T 세포를 종양에 모집하는 케모카인을 방출하도록 유도합니다.

마우스를 마취하고 루시페라제 기질을 안와후로 주입한 후 생체 내 이미징을 진행합니다.

T 세포 내부의 루시페라제는 기질을 산화시켜 생물발광을 방출합니다.

시간 경과에 따른 생물 발광을 관찰하십시오. 신호의 크기는 종양 내 T 세포 침윤 정도와 상관관계가 있습니다.

26게이지 바늘을 사용하여 마우스를 마취한 후, 100마이크로리터의 배지에 2천만 개의 T 세포를 안와후로 주입합니다. 생체 내 T 세포 생존을 지원하기 위해 1,000단위의 재조합 IL-2를 피하 투여합니다. 그런 다음 이중특이성 항체를 안와후로 또는 복강내로 투여합니다.

생체 내 이미징의 경우, 마취된 마우스에 26게이지 바늘을 사용하여 3mg의 D-루시페린 100마이크로리터를 안와 후 주사하여 투여합니다. 이미지를 캡처하려면 이종이식편이 있는 측면이 카메라를 향하도록 이미저의 차광 챔버에 마우스를 놓습니다. 획득 제어판을 사용하여 발광, 사진 및 오버레이를 선택합니다. 노출 시간을 자동으로, 비닝을 중간으로, F-스톱을 1로 설정하고 이미지를 획득합니다.

첫 번째 이미지 이후, 첫 번째 이미지에 대해 자동으로 계산된 노출 시간과 일치하도록 노출 시간을 설정하여 후속 이미지를 직접 비교할 수 있습니다. 마우스를 바로 누운 상태에서 또 다른 이미지 세트를 촬영하여 폐의 T 세포 존재를 평가합니다.