형질주입된 포유류 세포의 배치 과성장 배양에서 항체 생산

세포 응집을 방지하기 위해 비이온성 계면활성제가 보충된 무혈청 배지에 안정적으로 형질감염된 포유류 세포가 들어 있는 플라스크로 시작합니다.

이 세포는 치료용 항체 생산을 위해 통합된 중쇄 및 경쇄 유전자를 포함하는 변형된 게놈을 가지고 있습니다.

세포 대사에 필수적인 펩타이드와 아미노산의 영양이 풍부한 공급원인 트립톤을 소개합니다.

세포는 이러한 아미노산과 펩타이드를 활용하고 증식하여 더 높은 항체 수율을 지원하는 과증식을 초

래합니다.

세포의 유전자 발현은 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 생산을 유도합니다.

소포체에서 이러한 사슬은 사슬 간 이황화 결합을 통해 접히고 이량체화되어 치료용 항체를 형성합니다.

골지체 장치에서 항체는 번역 후 변형을 거칩니다. 그런 다음 소포로 포장되어 배지로 방출됩니다.

항체 생산을 증가시키기 위해 세포를 더 오랜 기간 동안 배양합니다.

세포 생존력이 감소하기 시작하면 상청액을 수확합니다.

치료용 항체가 포함된 상청액을 여과하고 나중에 사용할 수 있도록 더 낮은 온도에서 보관하십시오.

2개의 플라스크에 100밀리리터의 무혈청 배지에 밀리리터당² x 10 5 세포의 세포를 종자합니다. 세포를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%에서 분당 120회전으로 24시간 동안 배양합니다. 영양 보충 배양액에 트립톤을 최종 농도 0.5%까지 첨가합니다. 그런 다음 무혈청 배지를 사용하여 보충되지 않은 배양액의 부피를 균등화합니다. 세포를 추가로 7일 동안 배양합니다.

배양 8일째부터 혈구계를 사용하여 매일 세포 수를 계산하여 세포 생존력을 모니터링합니다. 세포 생존율이 80% 미만에 도달하면 15분 동안 3,000배 g에서 원심분리하여 배양물을 수확합니다. 그런 다음 0.22마이크로미터 필터를 통해 상청액을 여과멸균합니다. 상청액은 단기적으로 섭씨 4도에서 보관하거나 장기적으로 섭씨 4도에서 얼립니다.