Printed Glycan Array를 사용한 순환 항글라이칸 항체 검출

어레이 블록으로 구성된 인쇄된 글리칸 하위 어레이를 특징으로 하는 기능화된 글리코칩으로 시작합니다.

하위 배열의 각 지점은 단당류 구성, 사슬 길이 및 분기 패턴이 변하는 탄수화물 기반 폴리머인 뚜렷한 글리칸을 나타냅니다.

글리코칩을 차단 완충액으로 처리하여 비특이적 상호 작용 부위를 차단합니다.

글리코칩을 옮기고 시면활성제가 보충된 완충액에 희석된 마우스 혈청을 도입하여 항체 응집을 최소화합니다. 교반하면서 배양합니다.

교반은 균일한 혈청 분포를 촉진하여 뚜렷한 분자 특성을 기반으로 항글리칸 항체가 특정 글리칸에 선택적으로 결합하는 것을 촉진합니다.

비특이적 결합을 방해하기 위해 계면활성제 함유 완충액의 농도를 낮추고 세척하고 헹굽니다.

글리코칩에 항마우스 비오틴 접합 2차 항체를 오버레이하고 사전 결합된 항글리칸 항체와 상호 작용하고 세척합니다.

형광단 표지 스트렙타비딘을 도입하여 비오티닐화된 2차 항체에 결합합니다. 여분의 용액을 씻고 제거하십시오.

글리코칩을 스캔하고 혈청에서 글리칸 특이적 순환 항체를 암시하는 다양한 위치에서 뚜렷한 형광 반점을 관찰합니다.

텍스트 프로토콜에 설명된 대로 버퍼 #1을 버퍼 #4까지 준비합니다. 글리코칩과 샘플을 준비하려면 슬라이드가 있는 보관 상자를 실온에 도달할 때까지 테이블 위에 놓습니다. 상자를 열고 글리코칩을 배양실로 옮기고, 배양실은 챔버 내부의 습도를 일정하게 유지하기 위해 이미 젖은 여과지로 컨디셔닝되어야 합니다.

한편, 1.5밀리리터 튜브에 완충액 1로 마우스 혈청을 희석합니다. 와류 혼합기로 혈청 용액을 5초 동안 균질화합니다. 균질화 후, 면역글로불린 응집을 피하기 위해 희석된 혈청을 섭씨 37도에서 수조에서 10분 동안 배양합니다. 그런 다음 튜브를 10,000배 g 및 섭씨 25도에서 3분 동안 원심분리합니다.

상층액을 수집하고 침전된 물질을 버립니다. 글리코칩을 배양 챔버에 조심스럽게 넣습니다. 1밀리리터의 완충액 #3과 함께 배양하여 글리코칩 표면의 잔류 물질을 제거합니다. 섭씨 25도에서 15분 동안 글리코칩을 수직 위치에 놓고 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 완충액 #3 몇 방울로 다시 세척합니다.

그런 다음 여과지를 사용하여 글리코칩 표면에서 완충액을 조심스럽게 제거합니다. 글리코칩을 배양 챔버에 다시 넣습니다. 마이크로피펫을 사용하여 희석된 혈청 샘플을 글리코칩 표면에 펴 바릅니다. 피펫 팁을 사용하여 글리코칩 표면의 모든 건조 영역이