항체 마이크로어레이 칩을 이용하여 시아노박테리아 균주를 검출하는 기술

0 조회수3:31 • July 8th, 2025

특정 항체로 인쇄된 항체 마이크로어레이 칩으로 시작합니다.

각 반점에는 특정 시아노박테리아 균주에 대한 고유한 항체가 포함되어 있습니다.

비특이적 상호 작용을 최소화하기 위해 차단 버퍼로 칩을 처리합니다.

여러 웰이 있는 하이브리드화 카세트에 칩을 조립합니다.

환경 샘플을 웰에 도입하고 최적화된 조건에서 배양합니다.

샘플에는 인쇄된 칩의 특정 항체와 상호 작용하는 다양한 시아노박테리아 균주를 포함한 다양한 박테리아가 포함되어 있습니다. 칩을 세척하여 결합되지 않은 박테리아를 제거합니다.

각 시아노박테리아 세포에서 특정 항원과 상호 작용하는 형광단 표지된 항-시아노박테리아 균주 항체를 포함하는 항체 혼합물을 추가합니다. 결합되지 않은 항체를 제거합니다.

카세트를 분해하고 칩을 세척하고 건조시킨 다음 스캔합니다.

특정 지점의 형광은 샘플에 특정 시아노박테리아 균주가 존재함을 나타냅니다.

제공자의 지시에 따라 3x8 웰 마이크로어레이 하이브리드화 카세트에 슬라이드를 설정합니다. 또는 항체 프린팅 패턴을 수정한 후 여기에 표시된 것과 같은 맞춤형 카세트를 설정하거나 단순히 커버 슬라이드를 사용하여 설정합니다.

슬라이드 및 카세트 조립 후 각 샘플 추출물을 최대 50마이크로리터까지 피펫팅하거나 추출 배양 완충액으로 희석하여 카세트의 각 웰에 넣습니다. 또는 샘플을 다른 배양 장치에 로드하거나 단순히 커버 슬라이드를 사용합니다.

블랭크 대조군으로서, 50마이크로리터의 TBST-RR 완충액을 카세트의 최소 2개의 개별 웰에 피펫팅합니다. 샘플을 상온에서 1시간 동안 배양하고 15분마다 피펫팅하여 혼합하거나 섭씨 4도에서 12시간 동안 배양합니다.

마이크로어레이를 세척하려면 카세트를 아래로 놓고 깨끗한 흡수지 위에 조심스럽게 두드립니다. 그런 다음 각 웰에 150마이크로리터의 추출 배양 완충액을 추가하여 웰을 세척하고 이전과 같이 흡수지를 두드려 완충액을 제거합니다. 세탁을 세 번 더 반복합니다.

각 웰에 17개의 항-시아노박테리아 균주 항체를 포함하는 형광 항체 혼합물 50마이크로리터를 첨가합니다. 샘플을 주변 온도에서 1시간 동안 또는 섭씨 4도에서 12시간 동안 배양합니다.

마이크로어레이를 세척하려면 카세트를 조심스럽게 아래로 놓고 깨끗한 흡수성 종이에 가볍게 두드려 두드립니다. 그런 다음 종이 타월을 두드려 제거하기 전에 150마이크로리터의 추출 배양 완충액을 추가합니다. 세탁을 세 번 반복합니다. 그런 다음 카세트를 분해하고 슬라이드를 0.1x PBS 용액에 담가 빠르게 헹굽니다. 슬라이드를 건조시키기 위해 이전과 같이 빠르게 원심분리합니다.

형광 스캐너를 사용하여 원적외선 형광 염료의 최대 방출 피크에서 슬라이드를 스캔하여 형광을 확인합니다. 게인 값을 변경하여 서로 다른 스캐닝 매개변수에서 마이크로어레이의 여러 이미지를 촬영합니다.

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마지막 업데이트: 29 8월 2026