바이러스 유래 펩타이드 변형 항체 접합체의 세포 내 분포 평가

0 조회수 • 4:59 분 • July 8th, 2025

부착된 인간 적혈구 세포로 시작합니다.

바이러스 유래, 펩타이드 변형 항체 접합체를 도입합니다. 이러한 접합체에는 바이러스의 핵 국소화 서열(NLS)과 콜산 잔기가 포함되어 있습니다.

배양하는 동안 항체 접합체는 세포 표면 수용체와 상호 작용하고 엔도좀 내에서 내재화됩니다.

접합체의 콜산은 엔도좀 구획을 탈출하는 데 도움을 주어 세포내 축적을 가능하게 하는 반면, 수송 단백질과 NLS는 핵 국소화를 촉진합니다.

트립신과 EDTA 함유 완충액을 도입하여 세포를 분리하고 표면 결합 접합체를 제거합니다.

트립신 활성을 억제하기 위해 혈청이 풍부한 배지를 첨가하십시오.

원심분리하여 세포를 수집합니다. 고정하고 투과시킵니다.

원적외선 형광단 표지 2차 항체를 도입하여 국소 접합체에 결합하고 세척합니다.

핵 염색 염료로 처리하십시오.

공초점 현미경으로 관찰하고 다양한 평면 깊이에서 이미지를 캡처합니다.

이미지 처리 후 세포는 세포질과 핵 내부에 작은 녹색 형광 병소를 보여 항체 접합체의 세포내 분포를 확인합니다.

표적 TF-1a 세포를 200나몰 7G3-콜산-항체 접합체로 처리합니다. 변형된 대조군 단클론 항체로 처리된 세포를 포함합니다. 5 x 106 항원 양성 세포를 접합체와 함께 섭씨 37도에서 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 상청액을 제거하고 얼음처럼 차가운 PBS 1밀리리터를 사용하여 세포를 세 번 세척합니다.

신선한 배지를 추가하고 세포를 섭씨 37도에서 추가로 한 시간 동안 배양합니다. 다음으로, 0.25% 트립신과 EDTA를 함유한 PBS 0.5밀리리터를 첨가하고, 세포를 섭씨 37도에서 최대 30분 동안 배양한다. 그런 다음 10% FBS가 함유된 RPMI-1640 배지 1.5밀리리터를 사용하여 트립신을 중화합니다.

세포를 500배 g에서 5분 동안 원심분리합니다. 상청액을 제거하고 얼음처럼 차가운 PBS 0.5밀리리터를 사용하여 세포를 다시 세 번 세척합니다. PBS에 1% PFA 및 1% 자당 0.5밀리리터를 세포에 넣고 얼음 위에 30분 동안 놓아 고정시킵니다.

그런 다음 얼음처럼 차가운 PBS 0.5밀리리터를 사용하여 세포를 3회 세척하고 샘플을 250배 g에서 5분 동안 원심분리합니다. 다음으로, PBS에 0.15% Triton X-100을 세포에 첨가하고 얼음 위에서 5분 동안 투과화합니다. 그런 다음 얼음처럼 차가운 PBS로 세포를 세척하고 원심분리를 반복합니다.

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