Aβ 펩타이드 특이적 항체 및 Aβ 올리고머를 쥐 해마에 제어 주입

해

마에 양측에 이식된 두 개의 가이드 캐뉼라가 있는 깨어 있는 쥐를 가져 가십시오.

캐뉼라는 각각 아밀로이드-베타 또는 Aβ 특이적 항체 및 대조군 항체를 포함하는 피하 이식된 삼투압 펌프에 연결됩니다.

펌프 내의 높은 항체 농도는 외부 반투막을 통해 주변 조직에서 물 확산을 유도하여 삼투압층을 확장합니다.

이러한 확장은 항체 저장소를 압축하여 제어된 항체 방출을 촉진합니다.

주입 펌프에 연결된 멸균 물로 채워진 카테터에 두 개의 내부 캐뉼라를 부착합니다.

캐뉼라에 물을 채우십시오.

다음으로 소량의 공기를 흡입하여 거품을 만듭니다.

이제 캐뉼라를 Aβ 펩타이드의 가용성 응집체인 신경독성 Aβ 올리고머로 채웁니다.

내부 캐뉼라를 가이드 캐뉼라에 삽입합니다. 기포를 사용하여 올리고머의 제어된 전달을 위해 펌프를 시작하여 역류를 방지하고 주입 속도를 추적합니다.

필요한 기간 동안 반복적인 올리고머 주사를 투여합니다.

이 모델은 Aβ 올리고머-항체 상호작용을 연구할 준비가 되었습니다.

설치 하루 전에 제조업체의 지침에 따라 삼투압 펌프에 6E10 항체 또는 대조군 IgG1 항체를 채우십시오. 펌프를 멸균 증류수에 넣고 밤새 섭씨 37도를 유지하여 펌프를 활성화합니다.

쥐를 3% 이소플루란으로 마취하고 견갑골 사이를 면도한 후 2% 클로르헥시딘 글루코네이트와 2% 이소프로필 알코올 용액으로 피부를 소독합니다. 견갑골 사이에 메스로 2cm 절개한 후 가이드 캐뉼라에 연결된 PE-50 카테터를 찾습니다.

다음으로 치과용 시멘트가 들어 있는 PE-50 카테터의 끝을 메스로 자릅니다. 삼투압 펌프를 PE-50 카테터에 연결하고 펌프와 카테터 접합부에 치과용 시멘트를 추가하여 연결을 고정합니다. 마지막으로 4/0 봉합사로 피부를 단단히 꿰매십시오. 동물을 따뜻한 열 패드 위에 있는 케이지에 다시 넣고 이소플루란 마취에서 깨어날 때 모니터링합니다.

이전에 보고된 바와 같이 아밀로이드-베타 올리고머 용액을 준비한 후, 주입 전에 실온에서 1시간 동안 용액이 동적이고 자발적으로 응집되도록 합니다. 그런 다음 각 주사기에 5마이크로리터의 멸균 증류수를 채웁니다.

다음으로 PE-50 카테터 2개를 메스로 길이 약 60cm로 자릅니다. 21게이지 바늘이 장착된 두 개의 1밀리리터 주사기를 사용하여 두 카테터에 멸균 증류수를 채웁니다. 1밀리리터 주사기가 제자리에 있는 동안 각 카테터의 한쪽 끝에서 자유 끝을 해밀턴 주사기에 연결합니다. 1