0 조회수 • 3:06 분 • December 23rd, 2025
크립토코커스의 진균 현탁액으로 시작하십시오. 크립토코커스 세포를 염색하기 위해 pH에 민감한 형광 염료와 접합된 진균 유래 생체 입자 용액을 첨가합니다.
결합되지 않은 염료를 제거하기 위해 세척하십시오. 염색된 진균 현탁액을 대식세포 또는 식세포 면역 세포가 부착된 멀티웰 플레이트로 옮깁니다.
아스피린이나 이부프로펜과 같은 약물의 최소 억제 농도를 도입하고 약물 흡수를 촉진하기 위해 배양합니다.
약물 분자는 프로스타글란딘 합성 효소인 시클로옥시게나제-2와 상호 작용하여 활성을 억제합니다.
이는 아라키돈산이 프로스타글란딘으로 전환되는 것을 방지하여 세포 내 cAMP 수준을 보존하고 대식세포 식세포 능력을 향상시켜 곰팡이의 내재화를 촉진합니다.
곰팡이를 함유한 식체는 산성 소기관인 리소좀과 융합하여 산성 pH를 가진 식식소좀을 형성하고 염료가 형광을 발하도록 합니다.
약물 처리된 세포는 처리되지 않은 세포보다 더 높은 형광을 나타내며, 이는 대식세포의 식세포 능력을 향상시키는 약물의 효능을 시사합니다.
텍스트 프로토콜에 설명된 대로 완전한 RPMI 1640 배지에서 성장한 쥐 대식세포 세포주의 배양으로 시작합니다.
또한, 텍스트 프로토콜에 언급된 대로 원하는 농도로 PBS에 재현탁된 Cryptococcus neoformans의 배양물을 준비합니다.
식균 염색으로 크립토코쿠스 세포를 염색하려면 999마이크로리터의 세포를 미세 원심분리기 튜브에 분배합니다. 튜브에 1마이크로리터의 얼룩을 추가합니다. 세포를 실온, 어둠 속에서 천천히 교반하면서 1시간 동안 배양합니다.
배양 후, 첫 번째 원심분리로 세포를 세척합니다. 그런 다음 상청액을 버립니다. PBS로 세포를 재현탁하고 세척 단계를 두 번 더 반복합니다.
100마이크로리터의 Cryptococcus neoformans 세포 현탁액을 배양된 대식세포가 포함된 96웰 플레이트의 웰에 분배합니다.
대식세포 식균작용에 대한 시험 약물의 효과를 연구하기 위해 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 원하는 시험 약물 100마이크로리터를 96웰 플레이트의 적절한 웰에 분배합니다.
플레이트를 이산화탄소 인큐베이터에서 2-6시간 동안 배양합니다. 배양이 끝나면 식세포 염색제의 형광을 측정합니다.
본 연구에서는 약물 처리가 Cryptococcus neoformans에 대한 대식세포의 식세포 작용 능력에 미치는 영향을 조사합니다. pH 민감성 형광 염료를 이용하여, 약물 분자가 대식세포의 진균 세포 내포 작용 기능을 어떻게 향상시키는지 입증합니다.
이 방법은 pH 민감성 형광 판독법을 사용하여 면역 조절 화합물이 대식세포의 식세포 작용 기능에 미치는 영향을 정량화함으로써 기전적 위험 제거(de-risking)를 가능하게 합니다. 이는 cyclooxygenase-2 억제와 병원균 제거 능력 향상 사이의 연관성을 입증함으로써 면역학 및 감염성 질환의 표적 검증을 지원합니다. 본 분석법은 항감염 및 숙주 지향 치료제 개발 프로그램의 리드 물질 도출을 위한 예측 신뢰도를 제공합니다.
이 분석법은 면역조절제 스크리닝을 위한 초기 발견 단계에 배치되어, 리드 물질 확인 및 전임상 효능 모델링으로 이어집니다.
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마지막 업데이트: 22 8월 2026