마우스에서 유도된 기계 Allodynia의 겪었던 신경 상해 (스니) 모델

이 절차의 전반적인 목표는 말초 신경 손상에 따른 신경병성 통증의 마우스 모델을 확립하는 것입니다. 이것은 먼저 쥐를 마취시키고 뒷다리를 적절한 위치에 놓고 좌골 신경을 노출시킴으로써 이루어집니다. 다음으로, 좌골 신경의 두 가지를 봉합하고 세 번째 가지는 그대로 두어 정의된 신경 손상을 도입합니다.

이 비디오에서는 경골 신경과 총회음부 신경을 봉합하고 절단하는 동안 소렐 신경을 보존합니다. 그러나 신경 손상 후에 다른 조합을 적용할 수 있습니다. Misa를 철망 테이블의 실린더 용기에 넣고 Misa를 습관화시킨 다음 유도된 기계적 이질통의 정량적 측정을 허용하는 Von Fray 분석을 사용하여 테스트했습니다.

보정된 Von Fray 필라멘트는 작동된 기공의 측면 영역에 오름차순으로 적용됩니다. 수술한 뒷다리와 평가되지 않은 뒷다리의 기계적 역치를 감지하기 위해, 고통스러운 반응은 필라멘트 자극에 대한 빠른 기공 철수, 움찔거림 및/또는 모공 핥기로 정의됩니다. 궁극적으로, 등급이 지정되지 않은 쪽과 비교하여 수술한 다리의 기계적 이질통의 발달은 시간 경과에 따른 기계적 역치를 표시하여 시각화할 수 있으며, 이를 통해 말초 신경 손상 후 다양한 분자 경로 또는 약물 치료를 조사할 수 있습니다.

이 방법은 신경병성 통증 발달과 관련된 분자 경로와 같은 말초 신경 손상 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 또한, 통증 발달을 방해하거나 통증 증상을 완화하는 것을 목표로 하는 약물도 테스트할 수 있습니다.수술 이틀 전, 조용한 방의 철망 테이블 위에 놓인 빨간색 플라스틱 실린더에 쥐를 넣고, 15분 후에 테스트하기 전에 15분 동안 실린더 안에 쥐를 습관화하고, 쥐가 침착한지 확인한 다음 폰 프레이 필라멘트를 오름차순으로 적용합니다. 0.02g 필라멘트부터 시작합니다. 먼저 총 30초 동안 왼쪽 모공의 측면 영역에 힘을 가하고 각 적용 후 마우스의 반응을 측정하고 다른 마우스의 동일한 필라멘트와 왼쪽 모공으로 반복한 다음 다음 다음 필라멘트로 이동하기 전에 오른쪽 모공으로 다시 시작합니다.

긍정적 인 통증 반응은 필라멘트에 의해 유발 된 갑작스런 모공 수축, 발가락 벌림 및 과도한 모공 핥기로 정의되며 5 회 중 3 번의 반복 자극에 대한 긍정적 인 반응은 통증 역치로 정의됩니다. 케타민과 자일라진의 혼합물을 복강내 주사하여 동물을 마취하고 완전히 마취될 때까지 동물을 조용한 곳에 두십시오. 핀셋으로 꼬리 끝과 멈춤 끝을 꼬집어 반사 신경을 확인하고 진행하기 전에 동물이 반응하지 않는지 확인합니다.

다음으로 전기 면도기를 사용하여 탈수를 방지하고 감염을 예방하기 위해 0.5ml의 등장성 식염수에 항생제를 피하 주입하고 오른손잡이의 경우 무릎 약간 아래에서 엉덩이 부분까지 수술 영역을 면도합니다. 왼쪽 뒷다리로 작업하는 사람이 가장 편리할 수 있습니다. 면봉으로 눈에 연고를 바릅니다.

동물을 오른쪽에 눕히고 왼쪽 뒷다리를 작은 플랫폼에 올려 놓고 다리를 접착 테이프로 고정합니다. 동물이 위치를 잡으면 수술 부위에서 에탄올과 베타딘을 번갈아 가며 수술 부위를 소독하고 건조시킨 다음 왼손 엄지손가락으로 무릎을 찾은 다음 메스를 사용하여 무릎 근위 방향으로 작은 절개를 만듭니다. 가위 끝을 사용하여 둔기로 피부를 엽니다.

다음으로, 마우스를 실체 현미경 아래에 놓고 대퇴골 가까이에서 명확하게 보이는 혈관을 찾습니다. 그런 다음 둔기 절개로 근육층을 분리합니다. 올바르게 수행하면 출혈 없이 근육층이 쉽게 분리되어 근육 바로 아래에 있는 좌골 신경이 드러납니다.

주변 혈관 손상으로 인해 출혈이 발생한 경우 면봉이나 거즈 조각을 사용하여 출혈이 멈출 때까지 눌러 혈액을 흡수합니다. 분리된 근육층을 2번 핀셋으로 조심스럽게 펴십시오. 좌골 신경을 시각화하려면 필요한 경우 견인기를 적용하고 좌골 신경에서 설신경 분기 영역을 식별합니다.

설신경은 왼쪽 다리에서 오른쪽으로 갈라지는 세 가지 중 가장 작은 가지입니다. C 57에서 검은색 6마리의 마우스는 여전히 병렬로 달리고 있는 다른 두 가지 주위에 6개의 0 봉합사를 단단히 적용합니다. 소렐 가지를 건드리지 않도록 각별히 주의합니다.

5번 핀셋으로 봉합사 아래에서 절단할 신경을 잡은 다음 신경이 당겨지지 않도록 작은 가위로 핀셋 위와 아래의 신경을 절단합니다. 신경이 절단되면 가위로 봉합사 끝을 잘라낸 다음 근육층을 부드럽게 닫습니다. 봉합사 링은 일반적으로 필요하지 않습니다.

상처에 리도카인 한 방울을 떨어뜨리고 수술용 매듭으로 봉합합니다. 안연고가 여전히 충분한지 확인한 다음 마우스를 깨끗한 케이지와 종이 타월에 넣습니다. 편안한 자세로 쉽게 접근할 수 있는 물과 차우를 제공하십시오.

방이 추우면. 수술 후 회복 하루 후 케이지의 일부 아래에 열 패드를 놓고 기준선 측정값을 수집하기 위해 설명된 대로 수술된 마우스와 가짜 수술 마우스 모두에서 von fray 측정값을 수집합니다. 여기에서 4-6명의 마우스 그룹에 대한 Von Fre 테스트 결과를 수술 하루 전과 수술 후 2주 동안 매일 보여줍니다. 수술 다음 날, 동물들은 수술된 기공 또는 동측 기공에 상당한 기계적 과민증이 발생했으며, 비수술 또는 반대쪽 기공은 영향을 받지 않았습니다.

반대쪽 측면의 역치는 가짜 수술 마우스에 비해 약간 감소했는데, 이는 조작된 마우스에서 MI 이질통이 경미하게 발생할 수 있음을 나타냅니다. 이 비디오를 시청한 후에는 마취된 마우스에서 S 신경의 가지를 찾고 조작하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 또한 프레이 분석은 부분적인 말초 신경 손상 후 형질전환 동물 또는 약물의 반응을 테스트하기 위한 정량적 기능 판독을 가능하게 합니다.