Name: 의 DNA 지문 Mycobacterium 레인스 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: 학습하세요 Mycobacterium leprae의 DNA 지문 작성 방법을 VNTR 타이핑과 다중 PCR을 사용하여. 이 기술은 한센병 균주 추적 및 감염 전파 경로 분석에 활용되어 공중보건 개입에 필수적인 유전학적 도구를 제공합니다.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

나병 환자의 피부 샘플 컬렉션 피부 진료소에서 일하는 숙련된 임상 또는 기술자가 필요합니다. 이 샘플을 처리 실험실 종사자 실험실 외투, 장갑 및 보호 눈 착용을 착용하고 인간이나 아르마 딜로 조직의 감염 샘플을 처리하는 바이오 안전 캐비넷에서 작업에 큰주의를해야합니다. 표면 및 도구의 소독도 중요합니다. 깨끗하고 살균 바이오 안전 캐비넷에서 작업하는 것은 DNA 샘플의 오염을 피하는 것이 중요합니다. DNA 추출은 Qiagen 같은 회사에서 추출 키트의 발전에 상대적으로 쉽게 덕분되고 있습니다. 약도는 신중하게 따라야합니다. 사용하지 않을 때는 모든 샘플은 추운 보관해야합니다. 샘플에 대한 반복, 극단적인 온도 변화를 피하십시오. 이 작품에 사용되는 DNA의 primers는이 문서의 끝부분에 문학 참조 목록에서 인용되었습니다 여러 업체에서 주문하실 수 있습니다. 케어는 오염을 방지하기 위해 DNA 무료 환경에서 primers 작업로 이동해야합니다. Primers가 건조 분말로 와서 TE와 혼합 및 100μM 농도로 희석해야 다음 작은 양이 (그림 2A)로 구분됩니다. primers의 작업 솔루션은 더욱 10μM 농도로 희석하고 있습니다. 다시 말하지만, 영역 / primers를 사용하고 준비 후즈에서 DNA 샘플을 사용하지 마십시오. PCR 제품도 사용하지 않을 때 감기에 보관해야합니다. 3 % 아가로 오스 겔 준비 더 DNA 밴드 분리를 제공하지만, 실행하는 데 오래 걸립니다. 순수하게 정성을 위해, 2 %는 일반적으로 충분합니다. 아가로 오스 젤에서 DNA를 얼룩에 사용 Ethidium의 브로마이드 솔루션은 피부를 통해 흡수되어 매우 활성화 genotoxin입니다. 이 솔루션과 아주 잘 사용하고 항상 장갑을 착용해야되는 스테인드 젤을 처리합니다. 모든 DNA 샘플이나 ethidium 브로마이드 자료를 처리 후에는 깨끗이 손을 씻으십시오. ethidium의 브로마이드 얼룩 솔루션의 폐기, 기관 지침에 따라 세척 및 젤류. 젤이 정기적으로 필요하지 않습니다, FLA 방법이 설립되면이 단계는 제거하실 수 있습니다. 그것은 시간과 시약이 소요됩니다. FLA에 대한 샘플을 준비에 사용되는 포름 아미드 솔루션은 또한 매우 유독 신경을 써서 처리한다. 의 사용 후 손을 씻으십시오. 기관 지침에 따라 그것의 처분. 피크 스캐너 소프트웨어를 사용하여 FLA의 결과를 읽는 것은 도전하실 수 있습니다. allele 전화 (탠덤 반복의 수)의 기본적인 세트 CSU (표 4-7)에서 개발되었습니다. (M. 다른 변종이 leprae 연구 있으므로 그것은 4-7 테이블 모두 포함되지 않을 수 있다고 지적한다. 나열된 범위 밖 복사 번호 대립 유전자를 찾을 수 있습니다.) 하나 특정 과제는 &#39;말을 더듬&#39;봉우리를 포함합니다. 이들은 특히 그러한 10 (TA)로 2-3 기본 쌍 반복을 포함 STRs의 봉우리의 가족입니다. 때때로 읽고 올바른 최고를 선택하는 것은 어렵습니다 (그림 7). 이 그림에서, 190 BP의 긍정적인 통제 정상가 주봉이다. 2아르 높이 낮은 봉우리, 4, 또는 6 기본 쌍 큰 또는 주봉보다 작은 &#39;못들었의 봉우리.라고합니다 A - 미행도 혼란을 일으킬 수 있습니다. A - 미행은 텍스트와 그림 8의 앞부분에서 설명한 것입니다. 마지막으로, PCR 제품 샘플에 매우 풍부하는 경우, 봉우리는 이중 스파이크와 함께 나타날 수 있습니다. 이 경우, 정상 형태의 센터를 참조하십시오. (그림 6, 환자 6 참조). 데이터 관리 작업이 유형에 대한 강력한 작업이 될 수 있습니다. 작업 또는 절차의 날짜, 운영자, 스트립 / 플레이트지도, FLA 주문, PCR 조건과 요리법, 젤류 및 사진의 날짜, 저장 온도, DNA 템플릿 dilutions, FLA 모든 관련 등의 모든 실험에 대한 정보를 기록하는 것이 중요하다 전자 파일의 저장 위치 등 좋은 조직 및 데이터 관리는 미래의 정보의 특정 부분을 찾는 동안 시간의 시간을 절약할 수 있습니다. 여기에 설명된 실험실 작업은 콜로라도 주립 대학에서 그리고 전세계 다른 지역에서 몇 년 동안 계속되어왔다. 수집된 데이터의 모든 수단과 방법은 나중에 사용할 수있을 어떤의 대형 사진이 등장하기 시작합니다. 수치 10A와 10B는 이러한 DNA 지문이 다른 M.을 구분하는 데 사용할 수있는 방법을 보여줍니다 국가 (10A) 또는도 간의 가족 (10B) 사이 leprae 변종. 가족 및 지역 사회 연계 케이스 M. 휴대 표시되었습니다 leprae 유사하거나 동일한 VNTR 스트레인 종류의. 희망은 전송 네트워크의 조기 발견 시스템이 사람 MOS 위해 개발된 수 있도록 나병 전송 모드 (S)에 대한 통찰력을 얻을 수있을 수있다영구적인 신경 손상과 피부과이 완료되기 전에 위험하고 치료 약물 치료에 t가 시작할 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 </th></tr><tr><td> DNeasy 혈액 및 조직 키트 </td><td> Qiagen </td><td> 69,504 </td><td></td></tr><tr><td> 멀티 플렉스 PCR 키트 </td><td> Qiagen </td><td> 206143 </td><td></td></tr><tr><td> DNA Primers </td><td> 여러 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 아가로 오스 겔 </td><td> 여러 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 5 배 또는 배의 젤 로딩 버퍼 </td><td> 뉴 잉글랜드 Biolabs </td><td> B7021S </td><td> 자신의 *를 사용할 수 요리법 </td></tr><tr><td> Ethidium의 브로마이드 솔루션 </td><td> 여러 </td><td></td><td> 죄수의 희석. </td></tr><tr><td> 안녕하세요 - 디 포름 아미드 솔루션 </td><td> 응용 BioSystems </td><td> 4,311,320 </td><td></td></tr><tr><td> 진 스캔 -500 리즈 </td><td> 응용 BioSystems </td><td> 4,322,682 </td><td></td></tr></tbody></table> <a href="http://biowww.net/buffer-reagent/6X-Gel-loading-buffer-bromophenol-blue-sucrose.html">* http://biowww.net/buffer-reagent/6X-Gel-loading-buffer-bromophenol-blue-sucrose.html</a> <table border="1"><tbody><tr><th> 장비 </th><th> 댓글 </th></tr><tr><td> 2 냉장고 </td><td> 4 ° C : DNA 샘플 1, 1 primers 및 멀티 플렉스 시약에 대한 </td></tr><tr><td> 1 전자 레인지 </td><td> 아가로 오스와 물이 젤를 만들기 위해 가열 또는 적절한 방법 </td></tr><tr><td> 1 압력솥 </td><td> 자료를 살균 또는 압력 밥솥 </td></tr><tr><td> PCR 기계 </td><td> Thermocycler </td></tr><tr><td> pipettes 2 세트 </td><td> 0.5-10 μl, 10-100 μl, 20-200 μl, primers 1000 μl 1 세트, DNA 1 세트 </td></tr><tr><td> 잠수함 겔 전기 영동 상자 </td><td> 준비 젤류에 대한 양식과 빗과 함께. </td></tr><tr><td> 전기 전원 공급 장치 </td><td> 겔 상자에 연결하기위한 케이블 </td></tr><tr><td> 열 블록 </td><td> Eppendorf 튜브에 대한 </td></tr><tr><td> 원심 분리기 </td><td> Eppendorf 튜브 / 스트립의 경우 </td></tr><tr><td> 모세관 전기 영동 시스템 (유전자 분석기) </td><td> 또는 분석을 수행할 수 있습니다 기관에 대한 액세스 권한 </td></tr><tr><td> 플라스틱 </td><td> 일회용 에어로졸 피펫 팁, Eppendorf 튜브, 8 - 잘 스트립, 96 - 웰 플레이트, 광학 품질의 일부 </td></tr><tr><td> 인터넷 연결과 컴퓨터 </td><td></td></tr></tbody></table>

의 dna 지문<emleprae> mycobacterium</em단편 길이 분석 (fla) - 가변 번호 탄뎀 반복 (vntr)를 사용하기> 레인스

DNA Fingerprinting of Mycobacterium leprae Strains Using Variable Number Tandem Repeat (VNTR) - Fragment Length Analysis (FLA)

나병의 전송의 연구는 원인이되는 대리인 이후, Mycobacterium leprae은, 실험실에서 배양해 수 없습니다 특히 어렵습니다. 박테리아의 유일한 소스는 나병 환자, 그리고 실험적으로 감염된 딜 및 누드 마우스입니다. 따라서 현대적인 역학에서 사용되는 방법 많은 나병 연구에 대해 사용할 수 없습니다. WHO 1 구현된 나병에 대한 광범위한 글로벌 약물 치료 프로그램에도 불구하고, 나병 약 250,000 새로운 가지 경우 매년 많은 국가에서 발병 남아 있습니다. 2 전체 M.가 leprae (마이크로 및 minisatellites라고도 함) 게놈은 3,4를 매핑되어 많은 loci는 2 개 이상의 기본 쌍 세그먼트를 반복 것으로 확인되었습니다. M. 5 임상 계통 leprae 이러한 loci의 많은에 탠덤 반복 세그먼트의 개수 (짧은 탠덤 반복, STR)에 따라 다를 수 있습니다. 5,6,7 가변 번호 탠덤 반복 (VNTR) 5 분석 나병 bacilli의 다른 변종을 구별하기 위해 사용되었습니다. loci 중 일부는 다른 사람이 같은 환자에서 때로는 더 빠르게 변경하는 것 동안 반복 숫자가 적은 변화를 보여주는, 다른 사람보다 더 안정적인 것 같습니다. 특정 VNTRs의 다양성은 스트레인 입력 7, 8, 9에 대한 그들의 적합성에 관한 질문을 가져왔습니다 반면, 신흥 데이터들의 안정성에 다양한 여러 loci을 분석, 가치 역학 도구로 사용할 수있는 것이 좋습니다. 여러 로커스 VNTR 분석 (MLVA) 10 중국 11,12, 말라위 8, 필리핀 10,13, 브라질 14 등 여러 국가에서 나병의 진화 및 전송을 연구하는 데 사용되었습니다. MLVA 여러 단계를 포함한다. 첫째, 박테리아 DNA는 임상 biopsies 또는 슬릿 피부 얼룩 (SSS)에서 호스트 조직 DNA와 함께 추출됩니다. 10 원하는 loci는 다음 중합 효소의 연쇄 반응 (PCR)를 통해 추출 DNA에서 증폭됩니다. 4-5 다른 loci에 대한 찬란 - 표시 primers 그 다음 10 PCR 제품을 원하는 DNA 세그먼트의 존재를 확인하기 위해 아가로 오스 겔 전기를 받게 될 수도 있습니다. 18 loci 네개가 반응의 총 증폭되는, 반응 당 사용, 그리고 모세관 전기 영동을 사용하여 형광 조각 길이 분석 (FLA)에 제출. 아르마 딜로의 DNA는 긍정적인 컨트롤로 사용되는 각 로커스에 대한 반복 복사 알려진 번호 박테리아를 passaged. FLA의 chromatograms 그러면 피크 스캐너 소프트웨어와 조각의 길이가 VNTR 사본 (allele)의 숫자로 변환을 사용하여 검사하고 있습니다. 마지막으로, VNTR의 haplotypes는 패턴 분석하고 있으며, 환자 임상 데이터와 결합하면이 변형 유형의 분포를 추적하는 데 사용할 수 있습니다.

에 의한 나병,<emleprae&gt; Mycobacterium</em&gt; 많은 장소에서 아직도 발병합니다. 나병의 전염의 확산과 모드에 대한 자세한 내용을 보려면 위해서는, 결정하는 것이 중요합니다 어떤 변형의<em&gt; M. leprae</em&gt;은 환자를 감염하고 있습니다. 탠덤 반복의 변수 숫자 (VNTR) 입력은 하나의 방법입니다.

의 DNA 지문<emleprae> Mycobacterium</em단편 길이 분석 (FLA) - 가변 번호 탄뎀 반복 (VNTR)를 사용하기> 레인스

원인균인 *Mycobacterium leprae*를 실험실에서 배양할 수 없기 때문에 나병의 전파 연구는 특히 어렵습니다. ...

본 절차의 전반적인 목표는 나병을 유발하는 배양 불가능한 박테리아인 mycobacterium leprae의 구별 가능한 DNA 지문을 임상 검체로부터 직접 개발하는 것입니다. 환자 생검 조직에서 추출한 M. leprae 박테리아 DNA를 가변수 탠덤 반복(variable number tandem repeat) 또는 VNTR 유전자 좌위(loci)에 특이적인 형광 프라이머를 사용하는 멀티플렉스 PCR로 증폭합니다. DNA가 증폭되면, 단편 길이 분석을 위해 모세관 전기영동을 수행합니다.각 유전자좌(locus)에 존재하는 짧은 반복 서열(short tandem repeat) DNA 분절의 수를 결정하기 위해 데이터를 분석합니다. EPRI의 서로 다른 균주들은 각 유전자좌에서 서로 다른 수의 반복 서열을 나타내기 때문입니다. 여러 유전자좌의 데이터를 통해 고유한 DNA 지문을 생성할 수 있으며, 이 기술을 사용하여 환자의 균주 유형에 대한 데이터베이스를 구축할 수 있습니다.특정 지역사회 및 전 세계 환자들 사이의 나병 집단 구조, 진화 및 전파 특성을 규명함으로써, 궁극적으로 나병 퇴치를 위한 유전적 도구와 증거를 제공할 수 있습니다. 이 방법은 나병의 확산을 추적하고, 최근 감염 클러스터와 고위험군 개체를 식별하며, 관리 프로그램의 효능을 측정하는 데 사용될 수 있습니다. 실험 절차는 본 연구실의 연구원인 Lee와 Ron Jensen, 그리고 기기 코어 시설의 Jason Rivers가 시연할 것입니다. 표준 KaiGen DNA 추출 키트를 사용하여 임상 생검 조직에서 DNA를 추출하십시오.DNA를 확보한 후, 깨끗한 PCR 캐비닛 내부에 새로운 작업 공간을 설정합니다. DNA 오염을 방지하기 위해 캐비닛과 피펫 세트를 70% ethanol로 닦아내고, 캐비닛과 피펫에 15분 동안 UV light를 조사합니다. 캐비닛이 세척되면 멀티플렉스 PCR을 설정할 수 있으며, 각 멀티플렉스 PCR에는 한 쌍당 하나의 프라이머가 형광 표지된 4~5쌍의 프라이머 쌍이 사용됩니다.혼합해야 합니다. TE 버퍼로 준비된 10 µM 프라이머 스톡을 사용하여 프라이머 믹스를 만듭니다. 모든 정방향 또는 상단 프라이머를 하나의 튜브에 동일한 양으로 혼합하여 최종 농도가 2 µM이 되도록 합니다. 각 프라이머에 대해 필요한 경우 TE 버퍼를 추가하십시오.다른 튜브에 모든 역방향 또는 하단 프라이머를 동일한 방식으로 혼합합니다. 프라이머 혼합물이 준비되면 PCR MES 믹스를 조제합니다. 샘플당 모든 샘플과 대조군이 표시된 플레이트 맵을 작성합니다.마스터 믹스는 12 µL의 KaiGen multiplex PCR mix, 각 프라이머 풀 2 µL, 그리고 Q solution 2 µL를 포함해야 합니다. 대조군을 포함하고 피펫팅 손실분까지 고려하여 충분한 양의 마스터 믹스를 조제하십시오. 마스터 믹스를 짧게 원심 분리합니다.다음으로 PCR 플레이트의 각 웰에 마스터 믹스 18 µL씩을 분주합니다. DNA 샘플의 오염을 방지하기 위해 장갑을 교체하고, 별도의 생물안전작업대(biosafety cabinet)를 닦아 소독합니다. 이전과 마찬가지로 후드의 오염 제거가 완료되면 플레이트를 해당 후드로 옮깁니다.그런 다음 마스터 믹스가 포함된 각 웰에 2 µL의 DNA 샘플을 첨가합니다. 교차 오염을 방지하기 위해 반드시 에어로졸 방지 피펫 팁을 사용하십시오. PCR 플레이트를 조심스럽게 밀봉하고 짧게 원심 분리하여 내용물을 혼합합니다.그런 다음 반응 플레이트를 써모사이클러에 넣고 시료 제출을 위한 PCR 프로그램을 시작합니다. FLA의 경우, 깨끗한 에펜도르프 튜브에 폼아미드 사이즈, 마스터 믹스를 준비하고 희석된 PCR 산물을 첨가하여, 테스트할 시료당 high dfor amide 용액 12 µL와 gene scan, 500 lid sizing standard 0.3 µL를 혼합합니다. 이 용액 12.3 µL를 96웰 광학 품질 반응 플레이트의 각 웰에 분주합니다.PCR이 완료되면 플레이트를 원심분리합니다. 각 샘플의 위치가 플레이트 맵에 기록되었는지 확인하십시오. 그런 다음 별도의 96웰 플레이트의 각 웰에 nuclease free water 59 µL씩 분주하고, 각 PCR 반응액 1 µL를 추가하여 증폭된 DNA를 1:60으로 희석합니다.DNA 희석이 완료되면, 멀티 채널 피펫을 사용하여 희석된 각 PCR 샘플 1 µL를 formamide 루즈 용액이 들어 있는 플레이트의 해당 웰에 옮깁니다. 프로그램이 완료되면, 표준 아가로스 겔 전기영동으로 샘플을 테스트하여 예상 크기의 DNA 단편이 증폭되었는지 확인할 수 있습니다. 샘플은 FLA 유전자 분석기를 이용한 형광 모세관 전기영동 분석을 위해 준비됩니다. 분석 전, 플레이트에 셉텀을 씌우고 짧게 원심분리하여 기포를 제거하고 샘플이 웰 바닥에 밀착되도록 합니다.IDE는 가닥을 화학적으로 변성시키므로 열 변성 과정이 필요하지 않습니다. 플레이트를 로딩 트레이에 놓으십시오. ABBI'S genetic analyzer 31 30 xl와 같은 모세관 전기영동 장치를 사용하여 표지된 PCR 산물을 분석하십시오.분리 매질로 POP-7 폴리머가 채워진 50 centimeter 모세관을 사용하여 샘플을 분석합니다. DNA는 모세관 끝단으로 이동하며, 그곳에서 레이저와 검출기가 형광 표지를 측정합니다. 분석기의 수집 소프트웨어를 엽니다. 샘플을 실행하기 전, 크기 표준물을 포함하여 사용된 모든 염료를 검출할 수 있도록 분석기를 교정해야 합니다. 이 샘플들에 사용된 dset은 ABI의 G5입니다. 샘플은 1.6 kilovolts에서 15초 동안 전기동역학적으로 주입됩니다.15 kilovolts를 1800초 동안 인가하여 단편들을 분리합니다. 각 런의 총 소요 시간은 약 45분입니다. 런이 완료되면 각 샘플에 대한 데이터 파일을 생성합니다.분석기의 수집 소프트웨어가 파일을 미리 지정된 위치의 플레이트 폴더에 저장합니다. 파일은 FSA 형식입니다. FLA 데이터는 Applied Biosystems 웹사이트에서 무료로 제공되는 peak scanner 소프트웨어를 사용하여 분석할 수 있습니다.데이터를 분석하려면 'start new project'를 클릭한 다음 'add files'를 클릭하십시오. 양성 및 음성 대조군을 포함하여 선택한 데이터 파일을 프로그램으로 로드하십시오. 로드된 파일을 선택하여 분석하십시오.결과는 FLA 크로마토그램으로 도식화됩니다. 크기 표준물질은 주황색 피크로 나타나며, 유색 피크는 샘플에서 분석된 각 로커스(locus)에 대한 박테리아 DNA 분석물을 나타냅니다. 피크를 클릭하면 염기쌍 크기를 확인할 수 있습니다. DNA 중합효소의 슬립 스트랜드 합성(slip strand synthesis)으로 인해, 일부 마이크로새틀라이트 로커스에서는 동일한 색상의 피크 군이 검출될 수 있습니다.이러한 경우, 일반적으로 진폭이 가장 큰 피크를 선택합니다. 각 샘플의 단편 크기를 양성 대조군 크기와 비교하여 테스트한 각 대립유전자에 대해 탠덤 반복 세그먼트가 몇 개 존재하는지 결정하고, 추가 분석을 위해 데이터를 Excel 스프레드시트에 기록하십시오. 이 그림에서는 동일한 마을 출신의 서로 다른 세 가족에 속한 환자 7명으로부터 분리한 균주의 DNA 지문이 표시되어 있으며, 분석된 각 다형성 유전자좌의 탠덤 반복 횟수가 나타나 있습니다.이 데이터는 B 가족의 구성원 두 명은 동일한 균주에 감염된 반면, 한 명은 다른 균주에 감염되었음을 시사합니다. C 가족의 구성원들은 동일한 균주에 감염되었을 가능성이 높습니다. A 가족의 구성원들 또한 마찬가지입니다. 이 영상을 시청한 후, 여러분은 클리닉에 내원한 한센병 환자의 V-N-T-R-D-N-A 지문을 얻기 위해 멀티플렉스 PCR 및 단편 길이 분석을 일상적으로 포함하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.이는 나병 질환 관리를 위한 기존의 역학 조사를 보완하는 새로운 분자 도구들입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

저희는 미국 피카에 표시 효율적으로 어려운 작은 포유류에서 머리카락 샘플을 수집하는 비침 투 샘플링 방법을 제시한다. 우리는 샘플 머리카락에서 DNA를 추출하여 일반적으로 야생 동물의 생태와 보존 연구에 사용된 분자 마커의 여러 유형을 확장하여이 방법의 유틸리티를 보여줍니다.

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출처: 굴라, S. 외. 다중성 PCR 및 모세관 전기영동을 이용한 어류 병원성 박테리아 Yersinia ruckeri 의 다중 좌위 변수 연합 반복 분석. J. Vis. 경험 (2019).이 영상은 어류 병원성 박테리아에서 유래한 형광 표지된 가변수 탠덤 반복(VNTR) 증폭체를 모세관 전기영동을 이용해 크기별 전기영동 프로파일을 생성하여 박테리아 식별을 위한 과정을 시연합니다.

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우리는 반복적인 염기서열을 관찰하고 정량화하기 위해 예쁜꼬마선충의 생식선과 배아에서 형광 현장 교잡화(FISH)의 간결한 절차를 보고합니다. 우리는 두 가지 다른 반복 서열, 즉 텔로미어 반복과 텔로미어의 대체 연장(TALT) 템플릿을 성공적으로 관찰하고 정량화했습니다.

관측 및 텔로미어의 정량 및 반복 시퀀스 사용하여 형광<em&gt; 현장에서</emPNA 프로브에와&gt; 하이브리드 (FISH)<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em

액체 크로마토 그래피 / 질량 분석법에 의해 복어 종 유전형하는 개선 된 중합 효소 연쇄 반응 - 제한 단편 길이 다형성 방법을 설명한다. 역상 실리카 모노리스 컬럼 절단 증폭 산물의 분리에 이용된다. 이 방법은 기본 구성을 식별하는 데 유용 올리고 뉴클레오티드의 모노 이소 ​​토픽 질량을 규명 할 수 있습니다.

액체 크로마토 그래피 / 질량 분석 유독 복어의 개선 중합 효소 연쇄 반응 - 제한 조각의 길이 다형성 유전자형

이 기사에서는 텔로미어 길이의 신속하고 효율적인 직접 측정을 제공하는 수정 된 터미널 제한 단편 분석을 사용하여 텔로미어 길이를 정량화하기위한 자세한 프로토콜을 논의합니다. 이 기술은 텔로미어 길이를 정량화하기 위해 DNA의 다양한 세포 공급원에 적용될 수 있습니다.

In-gel Hybridization을 이용한 Telomere 길이 정량을위한 수정 된 terminal restriction fragment 분석

여기에 제시된 다중 궤적 가변 수 탠덤 반복 분석(MLVA) 분석은 어류 병원성 박테리아 Yersinia ruckeri의저렴하고 견고하며 휴대용 고해상도 유전자 형질 분석이 가능합니다. 순수 한 배양에서 시작, 분석 은 다운 스트림 응용 프로그램에 대한 10 층 MLVA 프로파일을 생산하기 위해 멀티 플렉스 PCR 및 모세관 전기 영동을 사용합니다.

멀티 록스 PCR 및 모세관 전기 영동에 의한 어류 병원성 박테리아 Yersinia ruckeri의 다중 궤적 가변 수 탠덤 반복 분석

여기서 우리는 상피 세포 DNA에서 VNTR 궤적 D1S80을 증폭하여 DNA 지문 프로파일을 생성하는 간단한 프로토콜을 설명합니다.

실험실 클래스에서 D1S80 로커스를 사용하여 DNA 지문 응용 프로그램

이 프로토콜은 7 일 이내에 대규모 토양 샘플 세트에서 효모와 곰팡이 Aspergillus fumigatus를 배양하는 효과적이고 신속한 방법입니다. 이 방법은 실험에 필요한 다양한 인큐베이션 배지 및 온도를 수용하도록 쉽게 변형 될 수 있습니다.

곰팡이 개체군 구조를 조사하기 위해 토양에서 배양 가능한 효모와 곰팡이를 분리합니다.

이 연구에서는 물 샘플의 세 가지 주요 clade에서 Leptospira 를 검출하도록 dot-blot 응용 프로그램을 설계했습니다. 이 방법을 사용하면 항-디곡시제닌 항체에 의해 쉽게 검출되는 디곡시제닌 표지 프로브에 의해 특이적으로 표적화된 최소 DNA 양을 식별할 수 있습니다. 이 접근 방식은 스크리닝 목적에 유용하고 만족스러운 도구입니다.

물 샘플에서 Leptospira 검출을 위한 중합효소 연쇄 반응 및 점-블롯 혼성화

학습하세요 Mycobacterium leprae의 DNA 지문 작성 방법을 VNTR 타이핑과 다중 PCR을 사용하여. 이 기술은 한센병 균주 추적 및 감염 전파 경로 분석에 활용되어 공중보건 개입에 필수적인 유전학적 도구를 제공합니다.

의 DNA 지문 Mycobacterium 레인스

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