Obtaining a Mixed Glial Cell Culture from a Neonatal Mouse Brain(신생아 마우스 뇌에서 혼합 신경교세포 배양 얻기)

신생아 마우스 뇌로 시작하여 단백질 분해 효소 용액이 들어 있는 튜브로 옮깁니다.

효소는 조직의 세포외 기질을 분해하고 세포 해리를 시작합니다.

효소를 제거하기 위해 성장 배지로 소화된 조직을 반복적으로 세척합니다.

더 큰 직경의 피펫을 사용하여 피펫을 통해 조직을 반복적으로 움직여 더 작은 조각으로 해리시킵니다.

그런 다음 더 작은 직경의 피펫을 사용하여 조각을 계속 해리시켜 세포 현탁액을 만듭니다.

이 현탁액을 여과하여 세포 덩어리를 제거하고 1차 뉴런과 미세아교세포 및 성상세포를 포함한 신경교세포의 혼합 집단을 포함하는 단일 세포 현탁액을 얻습니다.

성장 배지가 들어 있는 배양 플라스크에 세포를 시드하고 배양하여 접착력을 촉진합니다.

시간이 지남에 따라 배지에 뉴런 성장 인자가 없으면 뉴런 사멸이 발생합니다.

사용한 미디어를 새 미디어로 교체합니다. 신경교세포는 영양분을 활용하고 증식하여 성상세포와 미세아교세포의 혼합 신경교세포 배양을 생성합니다.

뇌를 2밀리리터의 0.25% 트립신-EDTA가 들어 있는 50밀리리터 튜브로 옮기고 섭씨 37도 수조에서 15분 동안 배양합니다. 배지를 추가하고 제거하여 신선한 성장 배지로 뇌를 씻습니다. 세척이 완료된 후 뇌당 2밀리리터의 성장 배지를 첨가하고 뇌를 분쇄하여 균질화합니다.

뇌 조직이 작아지지 않으면 구멍이 더 작은 피펫으로 전환하십시오. 적정이 끝나면 현탁액이 눈에 보이는 덩어리 없이 투명해지면 현탁액을 70미크론 세포 여과기에 통과시켜 단일 세포 배양을 만듭니다.

그런 다음 8-9mm의 성장 배지를 T75 플라스크(뇌당 2개의 플라스크)에 피펫팅하고 각 플라스크에 1밀리리터의 뇌 균질염을 첨가합니다. 16일째에 분리될 때까지 세포를 성장시킵니다.