자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

이 절차는 인형 소금에 민감한 쥐와 소금에 내성이 있는 쥐를 사용하여 페닐에프린 장력 하에서 장간막 저항 동맥의 반응성을 세포 외 칼슘과 비교합니다. 이것은 먼저 장간막 아케이드를 동물로부터 분리하고 저항 동맥 가지를 해부함으로써 수행됩니다. 다음. 두 개의 스테인리스강 와이어 중 첫 번째는 절개된 동맥의 짧은 부분을 통해 나사산을 끼우고 혈관을 그래프 챔버에 장착합니다.

그런 다음 두 번째 스테인리스 스틸 와이어는 첫 번째 와이어와 평행한 용기 루멘을 통해 나사산이 됩니다. 다음으로, 장착된 선박은 정규화된 내부 둘레로 늘어납니다. 절차의 마지막 단계는 페닐에프린을 반복적으로 투여하고 칼슘을 누적하여 이완시켜 혈관을 재활성화하는 것입니다.

궁극적으로 결과는 용기의 장력 변화를 보여주며, 이는 칼슘 반응 곡선으로 변환되어 EC 50 값을 결정하는 데 사용될 수 있습니다. 비교를 위해. 우리는 쥐 석공 배터리의 nev 네트워크가 gpro 구리 칼슘 감지 수용체를 발현한다는 것을 발견했을 때 이 방법을 사용해야겠다는 아이디어를 처음 떠올렸습니다.

그것은 작용제에 의해 활성화되는 쓴 AIC 수용체와 같은 방식으로 연구될 수 있습니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 내피와 평활근층이 작기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다. 선박은 쉽게 손상됩니다.

이 경우 이러한 용기의 기계적 특성이 손상될 수 있습니다. 시작하려면 작업 영역과 수술 기구를 준비하십시오. 마취된 동물을 등에 눕히고 알코올로 복부를 닦는다.

정중선 개복술을 시행한 후 가위를 사용하여 상장간막동맥을 포함한 약 85cm의 장을 제거합니다. 근위부 끝은 파일로리에 가깝게 자르고 원위부 끝은 회장 접합부 근처에서 자릅니다. 절제된 부분을 실온에서 생리학적 소금 용액 또는 PSS가 들어 있는 코팅된 페트리 접시에 넣습니다.

장의 근위부 끝을 오른쪽으로 고정한 다음 장의 나머지 부분을 시계 반대 방향으로 고정합니다. 다음으로, 2번과 3번 지점을 포함하는 장간막 동맥의 한 부분과 근위 끝에서 장의 한 부분을 절개합니다. 장간막 동맥의 V자형 분지 지점을 확인하고 정맥에서 멀리 해부합니다.

동맥에 직접 닿지 않도록 겸자를 사용하여 지방 조직과 결합 조직을 부드럽게 잡아당깁니다. 혈관 장착을 시작하려면 약 2mm 길이의 동맥 절편 2개를 절단합니다. 4cm 40 마이크로 미터 텅스텐 프리 스테인레스 스틸 와이어의 끝은 동맥의 내강을 여는 데 사용할 수 있습니다.

그런 다음 가는 집게를 사용하여 각 동맥의 내강에 와이어를 삽입합니다. 내피가 손상되지 않도록 주의하면서 섭씨 37도에서 PSS로 근 이식실을 채웁니다. 집게를 사용하여 나사산 용기 세그먼트를 챔버로 옮깁니다.

다음으로, 절제된 근위 혈관 분절을 근 그래프 챔버로 옮기고 와이어를 따라 끝을 당겨 혈관에 공급합니다. 혈관을 늘리지 마십시오. 마이크로미터에 연결된 오른쪽 턱의 가까운 고정 나사 아래에 와이어의 가까운 끝을 시계 반대 방향으로 고정합니다.

집게로 와이어의 다른 쪽 끝을 잡고 오른쪽 턱의 먼 고정 나사 아래에 시계 방향으로 고정하고 와이어를 따라 있는 용기 세그먼트가 턱 자체에 접촉하지 않고 턱 사이의 틈에 위치하는지 확인합니다. 턱을 나사로 벌립니다. 두 번째 와이어를 용기와 평행하게 정렬하고 내강의 맨 끝에 삽입합니다.

이미 장착된 와이어를 가이드로 사용하여 한 번의 동작으로 용기 세그먼트의 내강을 통해 와이어를 부드럽게 공급합니다. 와이어를 혈관에서 약 1cm 떨어진 곳에 두어 기동 중에 와이어가 늘어나지 않도록 하고 내피를 만지지 않도록 합니다. 턱을 함께 조이고 두 번째 장착 와이어가 오른쪽에 고정된 첫 번째 와이어 아래로 움직이는지 확인합니다.

턱은 변환기에 연결된 왼쪽 턱의 가까운 고정 나사 아래에서 두 번째 와이어의 가까운 끝을 시계 방향으로 고정합니다. 왼쪽 턱의 고정 나사 아래에 와이어의 맨 끝을 고정하고 조여 와이어를 늘립니다. 장착이 완료되면 섭씨 30도에서 평형을 위해 37분 동안 기다립니다.

평형 후 모터는 장착 메뉴에서 재설정되고 용기를 정규화된 내부 둘레로 늘리는 정규화 절차가 시작됩니다. 시작하려면 정규화 메뉴를 열고 목표 경벽 압력을 13.3킬로파스칼로 설정합니다. 다음으로, 각 정규화 단계의 기간을 60초로 설정합니다.

IC 일대: IC 100 비율은 0.9와 같아야 하고 IP 보정은 2개의 스타 델타로 설정해야 합니다. 현미경 접안렌즈를 사용하여 모선이 혈관 분절의 먼 곳과 뉴런 위에 있을 때 장착된 장간막 동맥의 길이를 측정합니다. 정규화 후, 혈관은 일련의 자극과 세척 기간으로 구성된 표준 시작을 수행하여 재활성화됩니다.

먼저 myo 챔버 커버를 교체하고 공기 95%와 이산화탄소 5%로 폭기를 시작합니다. 100마이크로몰의 아스코르브산을 함유한 신선한 PSS로 챔버를 채웁니다. 5분 동안 5마이크로몰 회향, 린(rine) 또는 PE로 혈관을 수축시키고 PSS 완충액으로 4회 세척합니다.마지막 세척 후 챔버를 PSS로 다시 채우고 챔버를 PSS로 다시 채우기 전에 3분을 기다렸다가 앞에서 보여준 PE.As 로 수축하면 동맥이 이제 실험할 준비가 된 것입니다.

증가하는 염화칼슘 농도를 누적적으로 추가하여 수축된 혈관의 이완을 측정합니다. 이 표는 페닐에프린 적용 후 기저 장력이 wistar DS 또는 인형 소금에 민감한 쥐와 DR 또는 인형 소금 저항성 쥐 간에 차이가 있음을 보여줍니다. 위스타 쥐에서 얻은 이 흔적은 위스타 쥐와 비교하여 DS 쥐의 조직에서 심하게 손상된 칼슘 이완의 누적 첨가에 의한 PE 수축 동맥의 이완을 보여주며, 여기에서 볼 수 있듯이 칼슘 민감도의 차이는 칼슘 반응 곡선에서 볼 수 있으며 EC 50 값을 계산할 때 다시 볼 수 있습니다.

마지막으로, DS 쥐는 Dr.Rats에 비해 동맥에서 칼슘 감지 수용체의 발현이 감소한 것으로 나타났습니다. 이 기술은 적절하게 수행하면 2시간 안에 완료할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 등척성 조건에서 small me enteric attri의 혈관 반응성을 외인성 화합물과 비교하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.