Name: 자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: 배우세요 자동 와이어 마이오그래피를 사용하여 쥐의 장간막 동맥 수축과 휴식을 측정하는 방법을. 이 기술은 혈관 반응성 연구에 일관된 등장력 측정을 제공합니다.

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설명이 프로젝트는 보너스 번호 R01 HL064761, R25 HL059868, 1SC1 HL099139과 건강의 P20 MD000175 형태 국​​립 연구소에 의해 지원되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 국립 보건원의 공식 견해를 대변하지 않습니다.

1. 쥐 mesenteric 작은 동맥의 분리 <ol><li> 닫힌 실내에서 isoflurane과 동물을 마취하고 알코올로 복부를 닦아냅니다. </li><li> mesenteric 침대를 폭로하기 위해 중간 라인 개복술을 수행합니다. </li><li> 가위를 사용하여 뛰어난 mesenteric 동맥과 vasculature 먹이와 소장의 약 85 cm를 제거합니다. 가까운 pylorus에 창자 섹션 ileo - coecal 교차점 근처 말초 엔드의 근위 끝을 잘라. 대장의 세그먼트 오픈 흉부 심장 관통하여 isoflurane과 euthanized와 깊이 anesthetized 아르 쥐에서 격리됩니다. </li><li> PSS를 포함하는 코팅 배양 접시에있는 excised 섹션을 배치하고 실온에서 mesenteric 동맥의 해부를 수행하십시오. </li><li> 오른쪽에있는 소장의 근위 끝을 아래로 핀과 intestineina 시계 반대 방향으로 방향의 나머지 부분 (대장의 반대편 왼쪽 먹이 vasculature에 ieproximal 끝)을 핀. </li><li> 근위 세그먼트의 일부와 함께 지점 II 및 III 세그먼트를 해부하다. </li><li> 정맥을 절개하다하고 동맥을 분리 (V - 모양의 분기점)와 지방과 결합 조직을 제거하여 청소. 포셉로 부드럽게 당기 및 결합 조직의 세포막을 통해 절단하여 동맥과 직접 접촉을 피하십시오. </li></ol> 2. 용기의 장착 <ol><li> 좋은 포셉와 40 μm의 텅스텐 무료 스테인레스 스틸 와이어의 두 짧은 세그먼트 (≈ 4cm) 절단하고, 내피를 손상하지 않도록 돌보는 각 동맥의 루멘에 하나를 넣습니다. 필요한 경우 루멘를 엽니다 와이어 끝부분을 사용합니다. 선박 밖으로 스트리밍 혈액 좋은 징조 루멘 열입니다. </li><li> 115 NaCl, 4.7 KCl, 1.4 MgSO 4 0.7 H 2 O 5, NaHCO 3, 1.2 K 2 HPO 4, 1.1 나 2 HPO 4, 1.0 CaCl 2, 20 HEPES과 : MM, 생리 식염수 (PSS로 myograph 챔버를 입력합니다 37 아스코르비 산 (100 μm의) 5 포도당, 산도 7.4) ° C와 집게를 사용하는 것은 신중하게 상온에서 챔버에 페트리 접시에서 스레드 선박 세그먼트를 전송하고 myograph 챔버에 excised 근위 선박 세그먼트를 전송하고 당겨 선박에 식량을 공급하는 전선을 따라 끝. 배 스트레칭하지 마십시오. </li><li> 와이어 마이크로 미터에 연결된 오른쪽 턱에 가까운 고정 나사에 따라 시계 반대 방향의 거의 끝부분을 고정합니다. 포셉와 와이어의 끝에 자유를 잡으하고 오른쪽 턱에까지 고정 나사에 따라 시계 방향으로 안전. 와이어 따라 선박 세그먼트는 턱 자체와의 접촉을하지 않고 문턱 사이의 간격에 위치하고 있는지 확인하십시오. </li><li> 분리 턱을 나사, 그리고 선박과 함께 두 번째 와이어 병렬 정렬과 루멘의 맨 끝에 삽입. 부드럽게 가이드로 이미 탑재 와이어를 사용하여 한 동작에서 선박 세그먼트의 루멘을 통해 전선을 공급. 책략 동안 그것을 스트레칭 피하기 위해 선박에서 1cm에 대한 전선을 보유하고, 내피를 감동하지 마십시오. </li><li> 함께 턱을 비할 첫 번째 아래에 두 번째 설치 와이어 이동은 오른쪽 턱에 안전하게 있는지 확인합니다. </li><li> 변환기에 연결된 왼쪽 턱의 근처에 고정 나사 아래 시계 방향으로 두 번째 와이어의 거의 끝부분을 고정합니다. </li><li> 왼쪽 턱에있는 고정 나사에서 와이어의 맨 끝부분을 확보하고 전선을 스트레칭 조입니다. </li><li> 일단 설치가 완료되면 "마운트 메뉴"의 모터를 재설정하고 선박의 정상화를 시작합니다. </li></ol> 3. 표준화 자동 듀얼 와이어 Myograph 시스템 - 510A는 "정규화"메뉴에서 부과하는 자동 정규화 기능을 보유하고 선박은 30 분 평균 이후 제조 업체의 프로토콜에 따라 표준화된 절차에 의해 표준화된 내부 둘레에 늘어 수 있습니다 37 ° C. 지수 곡선은 다음 내부 둘레 압력 데이터에 장착되어 있습니다. 절차는 동맥 100 mmHg 1 transmural 압력 하에서 편안 때 생체내에 있었고이 것이 루멘 직경 (D 100) 정의의 쥐 mesenteric 동맥에 대한 정규화 매개 변수는 다음과 같습니다. <ol><li> 대상 transmural 압력 = 13.3 kPa (100mm HG). </li><li> 시간 = 60 초, 정상화 단계의 각각의 기간. </li><li> IC 1 / IC 100 = 0.9 (IC 1 = 표준 내부 둘레, IC 100 대상 압력에 대응 = 내부 둘레. </li><li> 접안 렌즈 교정 2 * Δ (mm / 안구 부문), 2 델타 프로그래밍 이유입니다. </li></ol> hairlines가 탑재된 선박 segm의 맨 근처에 종료 끝나면 현미경 눈 피스 신호를 사용하여 마운트된 mesenteric 동맥의 길이를 측정엔트. 간단히, 탑재 선박 세그먼트의 길이는 해부 현미경에서 보정 안구 시선을 조각으로 최대 배율로 측정됩니다. 세그먼트의 끝에서 (1) 이상의 헤어 라인과 눈 피스 읽기 및 안구 부문에서 세그먼트의 끝 근처가 (2) 측정 및 기록됩니다. 이 값은, 마이크로 미터 수치로, 이전과 혈관을 스트레칭 후이 기록되며 장착되어 곡선과 100mm HG의 대상 transmural 압력에 해당하는 내부 직경을 계산하는 프로그램의 메뉴에 입력된 우리의 연구에서 동맥은 D 1 루멘 직경으로 설정되었습니다 = 0.9 활성 강제로 개발이 최대한입니다 XD 100. 쥐 mesenteric의 동맥에 ≥ 10 MN의 활성 강제로 개발은 진행하는 실험 최적 간주됩니다. 낮은 활성 강제로 조직이 삭제되었습니다. 4. 응답 측정 정규화 후 혈관의 기계적 및 기능적 특성 재현할 수축을 얻는 5 μm의의 phenylephrine (PE)의 반복 응용 프로그램 (일반적으로 2 또는 3)에 도전 혈관을 포함하는 "표준 시작"을 수행하여 다시 활성화됩니다. 저희 연구실에 전형적인 "표준 시작"다음과 같이 stimulations과 실패야 기간의 시리즈로 구​​성되어 있습니다 : <ol><li> myograph 챔버는 95 %의 공기와 5% CO 2 표지 및 폭기를 시작 바꿉니다. </li><li> 신선한 PSS (100 μm의 제품 아스코르비 산을 포함하는)와 챔버를 채우기 </li><li> 계약 5 분 5 μm의 PE와 혈관과 PSS 버퍼와 4 번 씻는다. </li><li> 후 마지막으로 세척, PSS와 리필 챔버 및 단계 (2)를 반복하기 전에 3 분 기다려 그리고 (iii). </li></ol> 표준 시작 후 동맥은 실험을 위해 준비가되었습니다. 계약 선박의 Relaxations는 CaCl 2의 농도 증가 (- 4 MM 0.5)의 누적 또한에 의해 평가됩니다. 억제제를 사용하는 선박은 assays시 20 분 및 현재에 대한 myograph 챔버에있는 화합물 사전 incubated입니다. 5. 데이터 분석 선박과 힘 tracings 직접 텍스트 데이터로 변환에 대한 "정규화"데이터는 SigmaPlot 11.0 그래프 프로그램 (Systat 소프트웨어, 포인트 리치몬드, CA)로 분석하여 그림 1에 표시된 꾸몄다되었습니다. tracings부터 계산 농도 - 반응 데이터, 프로그램의 약리학 메뉴에서 4 매개 변수 물류 기능에 장착되어 실험 데이터 EC 50 값을 결정하여 분석했다. 그룹 사이에 그룹 내의 비교는 편도 분산 분석 (ANOVA) 및 P &lt;0.05 중요한 것으로 간주됩니다과 차이에 의해 수행되었다. 6. 대표 결과 : <table border="1"><tbody><tr><th> 매개 변수 </th><th> Wistar </th><th> 달 소금 민감한 </th><th> 달 소금 방지 </th></tr><tr><td> L 100 (μm의) </td><td> 83.26 ± 2.33 </td><td> 91.52 ± 4.67 </td><td> 117.45 ± 8.43 * </td></tr><tr><td> X 1 </td><td> 604.21 ± 41.97 </td><td> 752.24 ± 85.25 </td><td> 745.84 ± 110.09 </td></tr><tr><td> R 2 </td><td> 0.99 ± 0.003 </td><td> 0.97 ± 0.008 </td><td> 0.97 ± 0.007 </td></tr></tbody></table> * Wistar과 DR을위한 L 100 값 차이는 통계적으로 의미입니다. 샤피 - Wilk의 정상 테스트 (P = 0.588에게) 전달, 균등 분산 테스트 (P = 0.237가) 전달. L 100 대상 transmural 압력에 해당하는 마운트 세그먼트의 = 내부 직경. X 1 = 자사의 정규화된 내부 둘레 (실험이 수행되었다되는 마이크로 미터 읽기 즉, 값)에 탑재된 선박을 스트레칭하는 데 필요한 마이크로 포지셔너 설정. R이 지수 곡선에의 적합 = 회귀 계수 (X I, Y I). 주의 사항 : 자세한 절차는 510A Myograph 시스템 6 매뉴얼에 설명되어 있습니다. 표 1. 샘플 읽기 아웃 "정규화 메뉴"에 표시되는 기본 프로그램에서 Wistar, DS와 DR의 mesenteric 동맥 세그먼트에 대한 정규화 매개 변수. 값 5 동물의 (± SEM)를 의미하고 있습니다. Wistar과 DS에 대한 L 100 값 사이의 차이는 * (P는 &lt;0.05) 통계적으로 의미입니다. <table border="1"><tbody><tr><th> Wistar </th><th> DS </th><th> DR </th></tr><tr><td> 14.2 ± 0.6 </td><td><td> 20.9 ± 1.3 * </td></td></tr></tbody></table> 각 선박 5 μm의 PE의 응용 프로그램을 다음과 Wistar, DS 및 DR의 쥐으로부터 격리 mesenteric 동맥에서 표 2. 개발 긴장 (MN). 보고된 값은 6-8 동물의 (± SEM)를 의미하고 있습니다. Wistar 컨트롤에서 * 중요한 것은 다른 (P는 &lt;0.05). <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 칼슘 2 Wistar 쥐에서 PE - 계약 mesenteric 동맥의 + 전자 유도 휴식 1 ㎜ 칼슘 2 +를 포함하는 생리 식염수에 와이어 myograph에 마운트. 동맥, 37 30 분 equilibrated되었습니다 ° C 일정한 통기 및 CA 2 반응과 + E 결정. PE는 칼슘 2 누적 첨가 다음 5 μm의의 추가에 대한 추적 대표위원회는 + 표시됩니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 칼슘 2 DS의 쥐에서 PE - 계약 mesenteric 동맥의 + 전자 유도 휴식 1 ㎜ 칼슘 2 +를 포함하는 생리 식염수에 와이어 myograph에 마운트. 동맥, 37 30 분 equilibrated되었습니다 ° C 일정한 통기 및 CA 2 반응과 + E 결정. PE는 칼슘 2 누적 첨가 다음 5 μm의의 추가에 대한 추적 대표위원회는 + 표시됩니다. CA 2 + 휴식이 심각 Wistar과 DR 쥐에서 그에 비해이 조직에 손상되었습니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 칼슘 2 DR의 쥐에서 PE - 계약 mesenteric 동맥의 + 전자 유도 휴식 1 ㎜ 칼슘 2 +를 포함하는 생리 식염수에 와이어 myograph에 마운트. 동맥, 37 30 분 equilibrated되었습니다 ° C 일정한 통기 및 CA 2 반응과 + PE가 카 2 누적 첨가 다음 5 μm의의 추가에 대한 추적 전자 determined.A 대표 힘을 +가 표시됩니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4. A. [칼슘 2 +] E - 반응 곡선. DR 및 DS 쥐으로부터 격리 mesenteric 오락실에서는 4 매개 변수 물류 curve.C.CaR 표현에 데이터를 피팅에 의해 결정 휴식 EC 50 값을 보여주는 B. 바 차트.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

고혈압, 심혈관 및 신장 뇌성 병적 상태 / 사망률의 주요 원인이다. 고혈압의 발생은 인구의 높은 소금에 민감한 고혈압은 고령화에 특히 높은, 그리고 백인보다 흑인에서 더 유행이다. 이것은 자신의 신장 9 나트륨을 유지하는 흑인의 경향에 의한 것으로 생각됩니다. 소금 감도는 신장 질환의 주요 기여 요인이며 내피 기능 장애와 관련된 있지만 메커니즘은 완전히 이해되지 않습니다. 저희 연구실의 최근 연구는 높은 소금 다이어트는 칼슘 2 + 농도 ([칼슘 2 +] IF) 중간 액을 감소하고, 소금에 민감한 쥐 10,11에서 수축기 혈압을 증가하는 것으로 나타났습있다. 이러한 효과는 새로운 치료법의 개발을위한 목표를 제공할 수 mesenteric 동맥과 소금에 민감한 신경성 환자의 자동차 수준에서 유사한 감소를 kidneys.Finding의 자동차의 감소 표현으로 표시될 수 있습니다. 우리는 차가 vasculature에서 신호의 메커니즘을...

<table border="1"><tbody><tr><th> 장비 / 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 (옵션) </th></tr><tr><td> 자동 듀얼 와이어 Myograph 시스템 - 510A DMT - 미국, 주식 </td><td> 아틀란타, GA. </td><td> 100151 </td><td></td></tr><tr><td> PowerLab/4SP 데이터 수집 시스템 </td><td> ADInstruments, 콜로라도 스프링스, (주) </td><td> ML750 </td><td> 4-16 입력 채널과 새로운 모델을 사용할 수 있습니다. </td></tr><tr><td> 델 디멘션 XPS 세대 4 컴퓨터 </td><td> 작은 골짜기 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stemi SV II (APO) 안구와 해부 현미경 </td><td> 칼 자이스 혈구 국제. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Wistar, 달 소금에 민감한, 달 소금 방지 쥐 </td><td> IN 할렌 스프 Dawley, 인디애나. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 설치류 초 </td><td> Harland Tekland, 매디슨, WI. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Phenylephrine </td><td> 시그마 - 올드 리치, 세인트 루이스, MO. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 기타 화학 제품 </td><td></td><td></td><td> 사용된 모든 화학 물질 상업적으로 사용할 수있는 순수한 성적했다. </td></tr></tbody></table>

자동 와이어 myography를 사용 mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

같은 mesenteric 동맥으로 근위 저항 선박, 주변 저항에 크게 기여하고 있습니다. 주로 신체의 전반적인 요구 사항에 따라 여러 기관에 혈액 흐름을 감독의 직경 기능에 100-400 μm의 사이의 이러한 작은 선박. 쥐 mesenteric 동맥은 100 μm의보다 큰 직경있다. 첫째 Mulvay 및 Halpern 1 설명한 myography 기술은, Bevan 및 Osher이 제안한 방법을 기반으로했다. 기술은 근육 준비 상당한 단축을 방지합니다 사시 조건에 따라 소형 선박에 대한 정보를 제공합니다. 다른 agonists에 선박의 강제 생산과 감도가 활성 긴장 길이 관계에 의하면, 스트레치의 정도에 따라 있기 때문에, 그것은 장착 전선의 준수를 방지하기 위해 사시 조건 하에서 수축 연구를 수행하는 것이 필수적입니다. 스테인레스 스틸 와이어 때문에 기록된 응답 3 영향을 후자의 산화의 텅스텐 와이어로 선호하고 있습니다. 기법은 혈관 평활근 세포 수용체의 정상적인 기능에 대한 증거를 얻기 위해 탑재된 혈관 작용제 유도된 수축의 비교를위한 수 있습니다. 우리는 phenylyephrine와 계약 격리 mesenteric 동맥은 세포외 칼슘의 누적 농도 (CA 2 + E)를 추가시 휴식 여러 연구에 표시합니다. 결과는 우리가 G 단백질 결합 칼슘 2 + 감지 수용체 (자동차)를 표현하는 것을 perivascular 감각 신경을 빠졌다는 생각이 들어서,이 vasorelaxation 응답을 중재. 자동 와이어 myography 방법을 사용하여, 우리는 Wistar, 달 소금에 민감한 (DS)와 달 소금 방지 (DR)에서 mesenteric 동맥이 쥐이 칼슘 2 + 전자에 다르게 반응 여기에 표시됩니다. Wistar의 쥐에서 조직은 + - 감도 DR 및 DS에서 이들에 비해 높은 칼슘이 보여주었다. DS 쥐에서 mesenteric 동맥의 감소 자동차 표현이 감소 칼슘이 절연, 사전 계약 동맥 + 전자 유도 휴식과 연결합니다. 데이터는, 자동차가 증가 아드레날린 톤 미만 mesenteric 동맥의 이완을 위해 필요하다고 제안하는 등 고혈압의 발생, 그리고 훨씬 더 심각한 DS에 달 동물의 자동차 신호 경로에 내재된 결함을 나타냅니다. 방법 mesenteric 저항 동맥과 다른 agonists 및 / 또는 antagonists 사이에 유사한 작은 혈관과 비교의 혈관 반응의 전의 생체내을 결정하는 데 유용 것은 나란히 6,7,8을 평가 쉽고 지속적으로 수 있습니다.

절연 mesenteric의 동맥에 힘 측정을위한 자동 myography 방법이 설명되어 있습니다. 그것은 phenylephrine 및 세포외 칼슘에 대한 답변을 결정하기 위해 510A Mulvany - Halpern 자동 듀얼 와이어 Myograph을 사용합니다. 300 μm의, 독립적으로 - 방법은 60 직경의 작은 선박에 agonists에 사시 응답 일관성있는 결정 수 있습니다.

자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

장간막 동맥과 같은 근위 저항 혈관은 말초 저항에 상당 부분 기여합니다. ... 사이의 크기를 가진 이러한 소혈관들은...

본 절차에서는 doll 염 민감성 및 염 저항성 쥐를 사용하여 phenylephrine 인장 상태에서 장간막 저항 동맥의 세포 외 칼슘에 대한 반응성을 비교합니다. 이를 위해 먼저 동물로부터 장간막 아케이드(mesenteric arcade)를 분리하고 저항 동맥 분지들을 박리합니다. 다음으로, 두 개의 스테인리스 스틸 와이어 중 첫 번째 와이어를 박리된 동맥의 짧은 분절에 통과시킨 후 혈관을 그래프 챔버(graph chamber)에 장착합니다.그 다음, 첫 번째 와이어와 평행하게 두 번째 스테인리스 스틸 와이어를 혈관 내강에 통과시킵니다. 이어서, 고정된 혈관을 표준 내부 원주 길이까지 늘립니다. 이 절차의 마지막 단계는 phenylephrine을 반복적으로 투여하여 혈관을 수축시키고, calcium을 누적 투여하여 이완시킴으로써 혈관의 반응성을 재활성화하는 것입니다.최종적으로, 결과는 혈관 내 장력의 변화를 나타내며, 이는 칼슘 반응 곡선으로 변환하여 EC 50 값을 결정하는 데 사용할 수 있습니다. 비교를 위해, 우리는 쥐의 mesenteric arteries 신경망이 gpro copper 칼슘 감지 수용체를 발현한다는 것을 발견했을 때 처음으로 이 방법을 사용한다는 아이디어를 얻었습니다.이는 작용제(agonist)에 의해 활성화되는 쓴맛 AIC 수용체와 동일한 방식으로 연구할 수 있습니다. 일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 개인의 경우, 내피 및 평활근 층이 얇기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다. 혈관이 쉽게 손상되기 때문입니다.이러한 현상이 발생하면, 이들 혈관의 기계적 특성이 저하될 수 있습니다. 먼저, 작업 영역과 수술 기구를 준비하십시오. 마취된 동물을 등으로 눕히고 복부를 알코올로 닦아냅니다.정중선 개복술을 시행한 후, 가위로 상장간막동맥을 포함하여 약 85 cm의 장을 절제합니다. 유문 근처의 근위단과 회맹접합부 근처의 원위단을 절단합니다. 절제한 분절을 실온의 생리식염수 또는 PSS가 담긴 코팅된 페트리 접시에 넣습니다.창자의 근위단 끝을 오른쪽에 고정하고, 나머지 창자 부분을 시계 반대 방향으로 고정합니다. 그다음, 2번 및 3번 분지와 창자의 근위단 일부가 포함된 장간막 동맥 분절을 박리합니다. 장간막 동맥의 V자형 분기점을 확인하고 이를 정맥에서 박리합니다.동맥과 직접 접촉하는 것을 방지하기 위해 포셉을 사용하여 지방 및 결합 조직을 조심스럽게 제거합니다. 혈관 장착을 시작하려면 약 2 mm 길이의 동맥 분절 두 개를 절단합니다. 동맥의 내강을 열기 위해 4 cm 길이의 40 µm 텅스텐 프리 스테인리스 스틸 와이어 끝부분을 사용할 수 있습니다.그 다음, 미세 핀셋을 사용하여 각 동맥의 내강에 와이어를 삽입합니다. 내피세포가 손상되지 않도록 주의하며, 마이오 그라프트(myo graft) 챔버를 37 °C의 PSS로 채웁니다. 핀셋을 사용하여 와이어가 삽입된 혈관 분절을 챔버로 옮깁니다.다음으로, 절제된 근위 혈관 분절을 마이오그래프 챔버로 옮기고, 와이어를 따라 끝부분을 당겨 혈관 내부로 삽입합니다. 이때 혈관이 늘어나지 않도록 주의하십시오. 와이어의 가까운 쪽 끝을 마이크로미터와 연결된 우측 조(jaw)의 근접 고정 나사 아래에 시계 반대 방향으로 고정합니다.포셉으로 와이어의 자유단(free end)을 잡고 오른쪽 조(jaw)의 먼 쪽 고정 나사 아래로 시계 방향으로 고정하며, 이때 와이어를 따라 배치된 혈관 분절이 조 자체에 닿지 않고 조 사이의 틈에 위치하도록 합니다. 조를 서로 벌려 나사를 조입니다. 두 번째 와이어를 혈관과 평행하게 맞춘 후 루멘(lumen)의 먼 쪽 끝으로 삽입합니다.이미 장착된 와이어를 가이드 삼아, 와이어를 혈관 분절의 내강을 통해 한 번의 동작으로 조심스럽게 밀어 넣습니다. 조작 중에 혈관이 늘어나는 것을 방지하고 내피세포를 건드리지 않도록, 혈관에서 약 1cm 떨어진 지점에서 와이어를 잡습니다. 조(jaw)를 조여 고정하고, 두 번째 장착 와이어가 오른쪽에 고정된 첫 번째 와이어 아래로 이동하는지 확인합니다.트랜스듀서에 연결된 왼쪽 조(jaw)의 가까운 쪽 고정 나사 아래에 두 번째 와이어의 가까운 쪽 끝을 시계 방향으로 고정합니다. 와이어의 먼 쪽 끝을 왼쪽 조의 고정 나사 아래에 고정하고, 와이어가 팽팽해지도록 조입니다. 장착이 완료되면 37 °C에서 30분 동안 평형 상태가 되도록 둡니다.평형 도달 후, 장착 메뉴에서 모터를 리셋하고 혈관을 표준 내부 둘레까지 확장하는 표준화 절차를 시작합니다. 먼저 표준화 메뉴를 열고 목표 transmembrane 압력을 13.3 kilopascals로 설정합니다. 다음으로, 각 표준화 단계의 지속 시간을 60 seconds로 설정합니다.IC one 대 IC 100의 비율은 0.9여야 하며, IP 캘리브레이션은 two star delta로 설정해야 합니다. 혈관 세그먼트의 양 끝단에 헤어라인이 위치했을 때 현미경 접안렌즈의 읽기 값을 사용하여 장착된 장간막 동맥의 길이를 측정합니다. 정규화 후, 일련의 자극과 세척 기간으로 구성된 표준 시작 과정을 수행하여 혈관을 재활성화합니다.먼저, 근육 챔버 덮개를 교체하고 95% air와 5% carbon dioxide로 폭기를 시작합니다. 100 micromolar ascorbic acid가 포함된 신선한 PSS로 챔버를 채웁니다. 5 micromolar phenylephrine, rine 또는 PE를 사용하여 혈관을 5분 동안 수축시킨 후, PSS 버퍼로 4회 세척합니다. 마지막 세척 후, 챔버를 PSS로 다시 채우고 3분간 대기한 다음, 다시 PSS로 채우고 PE로 수축시킵니다. 이전에 설명한 바와 같이, 이제 동맥이 실험 준비되었습니다.염화칼슘의 농도를 점진적으로 높여 투여하여 수축된 혈관의 이완 정도를 측정합니다. 이 표는 페닐에프린 투여 후의 기저 장력이 Wistar DS(Doll 염분 민감성) 쥐와 DR(Doll 염분 저항성) 쥐 사이에서 서로 다르게 나타났음을 보여줍니다. Wistar 쥐의 이 추적 그래프는 점진적인 칼슘 투여에 따른 PE 수축 동맥의 이완을 보여주는데, Wistar 쥐나 여기서 보이는 DR 쥐와 비교했을 때 DS 쥐 유래 조직에서는 이완 능력이 심하게 저하되어 있습니다. 칼슘 민감도의 차이는 칼슘 반응 곡선과 EC 50 값 계산 결과에서 확인할 수 있습니다.마지막으로, DS 쥐는 Dr.Rats와 비교하여 동맥 내 칼슘 감지 수용체의 발현이 감소된 것을 보여줍니다. 일단 숙달되면, 이 기술은 제대로 수행할 때 2시간 이내에 완료할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후, 여러분은 등척성 조건에서 외인성 화합물에 대한 소장 장간막 동맥의 혈관 반응성을 비교하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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연구

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의학

압축시키는 것 / 확장시키는 반응 (압력 myography를 사용하여)의 측정 병렬 절연 동맥 근세포 (패치가 el​​ectrophysiological 기술 클램프 사용)에서 Kv7 (KCNQ) 칼륨 채널 활동의 측정은 혈관 평활근의 생리학에 Kv7 채널의 역할에 대한 중요한 정보를 공개 할 수 있습니다 약리학.

패치 클램프 전기 생리학 및 압력 Myography를 사용하여 간선 평활근 Kv7 칼륨 채널 기능을 탐색

압력 myography에서 혈관의 손상 작은 세그먼트는 두 개의 작은 캐 뉼러에 장착하고 적절한 내강 압력으로 가압. 여기, 우리는 마우스 3의 혈관 이완 반응을 측정하는 방법을...

압력 Myography를 사용 쥐과 저항 동맥의 기능을 평가

압력 myography는 가압 할 때 지속적인 수축을 개발하는 작은 동맥의 vasoactivity을 평가하는 데 사용됩니다. 이 원고는 쥐, vasoactivity 혈관 직경에 관내 압력의 영향에서 작은 장간막 동맥의 고립 된 세그먼트에서 평가하기위한 세부 프로토콜을 제공합니다.

압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가

이 원고는 쥐 대뇌 저항 동맥 혈관 기능을 평가 하기 위한 비디오 현미경 검사 법 프로토콜을 체 외에 설명 합니다. 원고는 또한 레이저 도플러 Flowmetry를 사용 하 여 붙일 레이블된 lectin과 조직 관류와 microvessel 밀도 평가 하기 위한 기법을 설명 합니다.

쥐의 고립 된 저항 동맥의 비디오 현미경을 이용 하 여 혈관 제어 메커니즘의 평가

선법 myograph 혈관 부드러운 근육 기능과 화면 새로운 약물을 조사 하는 데 사용 됩니다. 우리 보고 마우스 mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정 및 혈관 평활 근의 새로운 relaxants 심사에 대 한 자세한 프로토콜.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

이 프로토콜은 마우스에서 분리 된 장 간 막 동맥의 경 벽 등각 장력을 평가 하는 와이어 묘 조 그래피의 사용을 설명 하며, 내 피 세포 및 혈관 주위 지방 조직에서 방출 되는 요인에의 한 변조를 특별히 고려 합니다.

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본 프로토콜은 마우스 대동맥 내피 기능의 실험적 생체외 평가에서 다중 챔버 근초음파 시스템을 사용하는 텐소메트릭 근초음파 기술의 개념 및 기술적 적용을 기술한다.

Tensometric Small Volume Chamber Myography 를 이용한 마우스 흉부 대동맥의 내피 의존성 혈관 이완 측정

소장은 자주 혈액 흐름에 부정적인 영향을주고 영양분 흡수에 영향을 미칠 수있는 독소에 노출된다. , 화합물 또는 관심의 독소를 multimyograph 및 장간막 동맥을 사용하고 정맥 분리하는 vasoactivity에 대한 검사를 할 수 있습니다.

생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트

우리는 생쥐의 대퇴 동맥에 와이어 손상을 일으켜 신내막 증식을 유도하는 수술 기법을 설명하며, 이는 재협착 억제를 위한 치료 화합물의 혈관 주위 전달을 위한 모델 테스트 시스템으로 사용됩니다.

혈관 주위 약물 전달 패치의 주입과 대퇴 동맥 와이어 부상의 쥐 모델

재 협착 마우스 대퇴 동맥 와이어 손상 모델 기술적 도전이다. 이 프로토콜에서 우리는 성공적으로 재 협착의 연구에 대한 일관성있는 신생 내막을 유도하는 와이어 부상을 수행하기위한 주요 기술 세부 사항은 필수 보여줍니다.

동맥 재 협착의 쥐 모델 : 대퇴 와이어 부상의 기술적 측면

배우세요 자동 와이어 마이오그래피를 사용하여 쥐의 장간막 동맥 수축과 휴식을 측정하는 방법을. 이 기술은 혈관 반응성 연구에 일관된 등장력 측정을 제공합니다.

자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

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