Mouse Hippocampal-Entorhinal Cortex Slices의 국소장전위(Local Field Potential in Mouse Hippocampal-Entorhinal Cortex Slices) 기록

물에 잠긴 기록실에 마우스 해마-내후각 피질 슬라이스를 고정합니다.

조직 생존력을 유지하기 위해 일정한 온도에서 산소가 공급된 ACSF를 지속적으로 흐르게 합니다.

후각 피질로부터 정보를 수신하는 뉴런을 포함하는 해마 CA3 영역의 방사층 내에 전해질 용액으로 채워진 자극 피펫을 배치합니다.

ACSF로 채워진 기록 피펫을 CA1 영역의 피라미드층에 삽입하며, CA3의 축삭 돌출부와 시냅스를 형성하는 뉴런으로 구성됩니다.

자극 피펫을 사용하여 전기 펄스를 가하여 시냅스 전 CA3 뉴런의 활동 전위를 유발합니다.

활동 전위는 시냅스 후 CA1 뉴런의 수용체에 결합하는 신경 전달 물질의 방출을 유도합니다. 결합은 이온 유입을 유도하여 막 전위의 변화를 초래합니다.

국소 필드 전위 또는 LFP라고 하는 여러 시냅스 후 CA1 뉴런의 막 전위의 결합된 변화는 기록 피펫에 의해 세포외로 기록됩니다.

로컬 필드 전위를 기록하려면 400밀리리터 비커에 카보겐 버블 ACSF를 채우고 펌프 튜브의 한쪽 끝을 비커에 넣습니다. 분당 8-10밀리리터의 연동 펌프를 켜서 400밀리리터 비커에서 가열된 저장소로, 저장소에서 섭씨 32도의 기록 챔버로 ACSF를 보냅니다.

그런 다음 튜브를 잠깐 고정하고 펌프를 꺼서 흐름을 일시 중지합니다. 미세한 집게를 사용하여 조직이 놓여 있는 렌즈 종이의 모서리에 있는 뇌 조직 조각을 기록실로 옮기고 아래로 자릅니다. 렌즈 용지를 벗겨내고 슬라이스를 기록실에 담그고 하프를 사용하여 슬라이스를 고정합니다.

수동 미세 조작기를 사용하여 염화나트륨으로 채워진 자극 피펫의 끝을 30도에서 45도 각도로 슬라이스 표면으로 천천히 전진시킵니다. 그런 다음 두 번째 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 ACSF로 채워진 국소 전위 피펫의 팁을 30도에서 45도 각도로 관심 영역으로 천천히 전진시키고 표준 프로토콜에 따라 샘플의 국소 전위를 기록합니다.