Name: 안구 질환 모델 구축을위한 Intravitreous 사출 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T12:45:27.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: 배우세요 안구 질환 연구를 위한 유리체내 주사 기법으로, 45도 각도로 렌즈 손상과 출혈을 방지하는 방법을 익힙니다. 이 프로토콜은 동물 모델 구축에 필수적인 시각 과학 기술을 상세히 설명합니다.

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이 실험실에서 녹내장의 연구는 미국의 건강 보조 재단 국립 녹내장 연구에 의해 지원됩니다.

<ol><li> pipettes의 풀러를 사용하여 유리 pipettes 준비, 1ml 주사기에 연결하고 parafilm와 연결을 밀봉. pipettes 끝에 솔루션 2 ML을 철회하고 사출을위한 준비. </li><li> 케타민 (80mg/kg)과 xylazine (8mg/kg) (2시 1분에서 볼륨 비율)의 내부 복막 주사로 쥐 마취시키다. </li><li> intravitreous 주입하기 전에 국소 anesthetics으로 쥐 눈 0.5 % alcaine 한방울을 적용합니다. </li><li> 쥐 위치와 안구의 우수한 비강 지역을 쉽게받을 수 있습니다. </li><li> 파 플라나의 수준에 찔린 우수한 비강 공막엔를 30 게이지 바늘을 사용합니다. 안구 근육과 혈관을 만지는 것을 피하십시오. </li><li> 뒷부분 챔버에서 바늘 구멍을 통해 유리의 작은 금액을 없애 눈에 볼 가벼운 압력을주세요. </li><li> 유리체 몸으로 공막엔을 통해 45 ° 각도로 바늘 구멍을 통해 유리 피펫의 팁을 넣습니다. 후부 챔버로 솔루션 2 ML을 주사하고 몇 초 약 장소에 보관 후, 부드럽게 바늘을 제거합니다. 렌즈 intraocular 선박을 만지는 것을 피하십시오. </li><li> intravitreous 주입 후 감염을 방지하기 위해 쥐의 안구에 안과 Tobrex의 연고를 적용합니다. </li></ol>

<ol><li>Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calpain+and+N-methyl-d-aspartate+%28NMDA%29-induced+excitotoxicity+in+rat+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas.</a> Brain Research. 1046, 207-215 (2005).</li>
<li>Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cataractogenic+lens+injury+prevents+traumatic+ganglion+cell+death+and+promotes+axonal+regeneration+both+in+vivo+and+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).</li>
<li>Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNTF+promotes+survival+of+retinal+ganglion+cells+after+induction+of+ocular+hypertension+in+rats%3A+the+possible+involvement+of+STAT3+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway.</a> European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).</li>
<li>Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Methyl-D-Aspartate+%28NMDA%29-Induced+Apoptosis+in+Rat+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).</li>
</ol>

동물에 대한 비전과 안과 제표 연구에 대한 홍콩의 대학과 협회의 교육 및 연구에 살아있는 동물의 사용 (CULATR)의위원회에 의해 승인된 연구에 동물의 사용을 위해 프로토콜에 따라 처리되었습니다 안과 및 비전 연구에 동물 사용합니다.

좋은 intravitreous 사출 직접 intraocular 치료뿐만 아니라, 동물 모델을 수립하는 데 유용합니다. 첫째, 주사 사이트는 망막 구조를 중단해서는 안됩니다. 둘째, 출혈은 감염의 위험을 줄이기 위해 피해야한다. 셋째, 렌즈 외상성 백내장을 피하기로 온전히해야합니다. 가장 중요한 것은 정상적인 안구 구조의 중단을 줄일 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>수술용 현미경</td><td>Olympus Corporation</td><td>OME</td><td></td></tr><tr><td>유리 피펫</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>피펫 풀러</td><td>David Kopf Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1ml 주사기</td><td></td><td></td><td>일회용</td></tr><tr><td>30G 바늘</td><td></td><td></td><td>일회용</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Aldasan</td><td></td><td>마취제</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Aldasan</td><td></td><td>마취제</td></tr><tr><td>Alcaine</td><td>Alcon</td><td></td><td>0.5% proparacaine hydrochloride</td></tr><tr><td>Tobrex</td><td>Alcon</td><td></td><td>연고, 3% tobramyxin.</td></tr></tbody></table>

안구 질환 모델 구축을위한 intravitreous 사출

Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model

Intravitreous 주사는 시각 과학 연구에 널리 사용되는 기법입니다. 이것은 안구 질환이나 현지 치료의 직접적인 응용 프로그램으로 동물 모델을 확립하는 데 사용할 수 있습니다. 이 동영상은 intravitreous 사출 절차를 완료하기 위해 간단하고 저렴한 도구를 사용하는 방법을 소개합니다. 대신 hemilton의 주사기의 1 ML 주사기의 사용이 사용됩니다. 적절한 사출 완벽한 팁을 유리 pipettes를 사용하는 바늘, 얼마나 쉽게 단단하게 함께 유리 피펫과 주사기 바늘을 연결을하는 방법에 대한 실용 팁이 제공됩니다. 한 주사 사이트는 망막 구조를 방해해서는 안) 2) 출혈은 감염의 위험을 줄이기 위해 피해야한다, 3) 렌즈는 외상 백내장을 피하기 위해 온전히되어야합니다 좋은 intravitreous 주사를 실시하기 위해 관찰하는 세 가지 측면이 있습니다. 간단히, 가장 중요한 포인트는 일반적인 안구 구조의 중단을 줄일 수 있습니다. 망막의 중단을 방지하려면, 쥐 눈 우수한 비강 지역은 선정되었습니다. 또한, 바늘의 바늘 포인트는 쥐 눈 limbal 지역에서 약 1.5 mm 있었던 파 평면에서했다. 유리체의 소량을 부드럽게 주입하기 전에 intraocular 압력을 줄이기 위해 바늘 구멍을 통해 밖으로 밀고있다. 45 ° 분사 각도로, 따라서 렌즈형 요인의 관련 합병증 및 영향을 피하기 위해, 쥐의 안구에서 외상성 백내장을 일으킬 가능성이 적습니다. 이 작업에서는 결막과 안구 근육에 대한 절단, 아니 출혈이 없었습니다. 신속하고 가벼운 부상으로 성공적인 intravitreous 분사는 분 안에 수행할 수 있습니다. 사출이 특정 프로토콜에 설명된 설정하면 intravitreous 주사에만 적용됩니다. 그러나, 여기에 제시된 방법과 자료는 또한 뇌, 척수 또는 작은 포유류의 다른 장기에 약물 전달의 다른 주입 절차에 사용할 수 있습니다.

Intravitreous 주사는 안구 질환 또는 현지 치료의 직접적인 응용 프로그램으로 시각 과학 연구에 널리 사용되는 기법입니다. 이 동영상은 유리 피펫과 1ml 주사기를 사용하여 intravitreous 사출을위한 프로토콜을 보여주었다. 과다 출혈 및 렌즈 손상을 피하에 대한 유용한 팁은 주어집니다.

안구 질환 모델 구축을위한 Intravitreous 사출

초자체 내 주사는 시각 과학 연구에서 널리 사용되는 기술입니다. 이는 안구 질환 동물 모델을 구축하거나 ... 로 사용될 수 있습니다.

안녕하세요, Guso Lab의 TU입니다. 오늘은 동물 모델을 제작하거나 안과 질환의 진행을 막기 위해 수행하는 유리체 내 주사 방법을 소개해 드리겠습니다. 여기 모식도가 있습니다.충혈된 안구 내 주사 바늘의 위치를 보여줍니다. 바늘은 각막 표면에 대해 45도 각도로 후방으로 삽입됩니다. 이 45도 각도를 이용하면 수정체 손상을 방지할 수 있습니다.초자체내 주사 시, 수술 현미경을 사용하여 안구 내 주사를 시행합니다. 쥐는 케타민과 자일라진 칵테일로 마취합니다. 국소 마취제와 항생제 연고 또한 사용됩니다.주입을 위해 유리 피펫을 사용합니다. 유리 피펫을 제작하기 위해 준비된 풀러(puller)를 사용합니다. 그 다음, 유리 피펫의 매우 날카로운 끝부분을 제거해야 합니다.1 million 시린지로 연결할 수 있습니다. 연결 부위는 퍼퓸으로 밀봉합니다. 그다음 이 유리 파이프를 사용하여 주입액 2 µL를 천천히 조심스럽게 뽑아낸 후, 붉은색 부분을 현미경 아래에 놓습니다.표면에 국소 마취제 한 방울을 도포한 다음, 과도한 액체를 닦아냅니다. 30 G 바늘을 사용하여 scarra를 천자합니다. 바늘은 scarra 표면에 수직이 되어야 하며, 바늘 끝부분만 삽입합니다.천자 구멍을 통해 일부 액체가 흘러나오는 것을 확인할 수 있습니다. 더 많은 액체를 제거하여 공간을 더 확보하기 위해 부드럽게 밀어주십시오. 적색안의 후방 챔버 내, 흉터 표면과 45도 각도가 되도록 유리 피펫 팁을 액체 부위에 삽입하십시오.렌즈가 손상되지 않도록 주의하십시오. 천천히 주입하십시오. Es 내부에 공기 방울이 주입되지 않도록 하십시오. 몇 초간 유지한 후, 바늘을 제거하십시오.그 다음 눈에 항생제 연고를 도포합니다. 유리체 내 주사의 주요 과제는 눈에 가해지는 조작을 최소화하는 것입니다. 안구 내 출혈, 수정체 손상 및 망막 박리를 방지해야 합니다.

intravitreous-injection-for-establishing-ocular-diseases-model

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 감염 후 포도막염을 연구하기 위해 프라임된 마이코세균성 포도막염(PMU)의 마우스 모델을 생성하는 방법을 보여줍니다. 이전에 동일한 면역원으로 면역된 마우스에서 열에 의해 사멸된 결핵균의 유리체강내 주사에 의한 PMU를 유도한 후, 이미징 및 조직병리학적 검사를 사용하여 눈의 만성 염증의 진행을...

감염 후 포도막염을 연구하기 위한 프라이밍 마이코박테리아 포도막염의 쥐 모델

이 비디오는 감염 후 포도막염의 마우스 모델에서 안구 염증을 감지하고 정량화하기 위한 생체 내 이미징 기술을 보여줍니다. 광간섭 단층촬영(OCT)으로 알려진 이 기술은 질병 진행을 평가하기 위해 눈의 고해상도 단면 이미지를 생성합니다.

마우스 모델에서 포도막염을 평가하기 위한 광간섭 단층촬영 이미징(Optical Coherence Tomography Imaging)

출처: Park, SW, et al. 생쥐 망막 색소 상피에서 유전자 치료를 위한 바이러스 벡터의 윤부 접근법-망막하 주사. J. Vis. 경험. (2015년)이 비디오는 마우스 모델에서 망막 색소 상피(RPE)에 바이러스 벡터를 망막하 주입하는 방법을 설명합니다. 마취 및 눈 준비부터 정확한 렌티바이러스 벡터 전달에 이르기까지 RPE에서 유전자 통합 및 발현을 보장하는 절차를 자세히 설명합니다.

마우스 모델에서 망막 색소 상피에 바이러스 벡터의 망막하 주사

토끼는 안구 주사 약물의 약동학을 연구하는 데 널리 사용됩니다. 토끼 눈을 사용하여 안구 내 약물의 약동학 연구를 수행하는 방법을 설명합니다.

안구 약의 약동학 연구에서 토끼 눈의 사용

여기를 사용 하 여 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (HR-SD-10 월) subretinal 공간으로 유전자 치료 대리인의 납품을 지원, 그 영역 범위를 평가 하 고 포토 리셉터 활력을 특성화 새로운 접근 방식을 설명 합니다.

초고 해상도 마우스 광학 일관성 단층 촬영 망막 유전자 치료 연구에서 안 구내 주사를 돕기 위해

우리는 여기에서 세균성 내과염의 마우스 모형에 있는 intravitreal 주입 및 후속 세균량의 방법을 기술합니다. 이 프로토콜은 숙주 면역 반응 및 세균 및 숙주 유전자 발현을 측정하기 위해 확장될 수 있다.

세균 성 내분염의 마우스 모형에 있는 감염 매개변수의 인트라비탈 주입 및 양

비인간 영장류 (NHP)는 해부학적 및 유전적 유사성으로 인해 인간의 망막 세포 치료법을 연구하기위한 이상적인 모델입니다. 이 원고는 NHP 눈의 망막 색소 상피 세포의 피하 학적 이식 방법과 황반 조작과 관련된 수술 내 합병증을 방지하기위한 전략을 설명합니다.

퇴행성 망막 질병을 위한 비인간 영장류 모형에 있는 망막 안료 상피 이식

이 프로토콜은 마우스에서 프라이밍 된 마이코 박테리아 포도막염 (PMU)을 유도하는 단계를 설명합니다. 이 방법은 마우스 모델 시스템에서 신뢰할 수 있고 강력한 안구 염증을 생성하는 데 도움이 되는 단계를 간략하게 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하여 면역학, 전사 및 단백질체학 분석을 통한 추가 평가를 위해 단일 동물에서 포도막 눈과 염증이 없는 동료 눈을 생성했습니다.

감염 후 포도막염의 모델로서의 프라이밍 된 마이코 박테리아 포도막염 (PMU)

유리체 내 주사는 망막에 바이러스 매개 유전자 요법을 전달하기 위해 양 눈에서 수행되었습니다.

난소 눈의 유리체 내 주사

이 프로토콜은 중앙 각막 절개와 전방으로의 긴 터널을 사용하여 쥐에서 안내 주사 기술을 설명합니다. 이 주입 방법은 부주의한 조직 손상을 유발할 위험을 최소화하여 정밀도와 재현성을 향상시킵니다.

부작용 위험이 낮은 쥐에 대한 카메라내 주사

이 연구는 성체 쥐의 망막과 시신경에 치료제를 전달하는 방법론을 제시합니다. 또한, 성체 쥐의 시신경과 망막을 하향식으로 일괄적으로 수집하기 위해 독특한 조직 회수 방법이 도입되었습니다.

성체 쥐의 안구 치료 전달 및 고급 조직 회수(Ocular Therapeutic Delivery and Advanced Tissue Retrieval in adult rats)

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