말초 혈액 유래 세포와 분화된 신경 세포의 면역형광 현미경 검사

신경 전구 세포, 성상세포 및 뉴런을 포함하여 고정 및 투과화된 말초 혈액 유래 신경 세포를 포함하는 단백질 코팅 커버슬립이 있는 다중 챔버 슬라이드를 가져갑니다.

비특이적 결합 부위를 차단하는 차단 솔루션을 추가합니다.

특정 세포 단백질에 결합하는 형광 염료 접합 항체와 함께 배양하여 신경 세포 유형을 식별할 수 있습니다.

결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 완충액으로 세척합니다.

형광 핵 염료와 함께 배양하여 핵을 염색합니다.

커버슬립을 마운팅 미디어가 있는 슬라이드로 옮깁니다. 그런 다음 준비된 슬라이드를 적절한 필터가 장착된 형광 현미경 아래에 놓습니다.

특정 파장의 빛을 사용하여 형광 염료를 여기시켜 더 긴 파장의 빛을 방출합니다.

방출된 형광 신호는 표지된 세포 단백질에 해당하여 다양한 신경 세포 유형을 명확하게 강조하고 재프로그래밍된 혈액 세포의 분화를 확인합니다.

PBS와 5% BSA의 차단 용액을 추가합니다. 로커 플레이트에서 실온에서 1시간 동안 세포를 차단합니다. 1% BSA PBS에서 항체의 적절한 희석액을 준비하고 로커 플레이트에서 항체와 함께 세포를 실온에서 1.5시간 동안 배양합니다. 세척당 5분 동안 PBS로 세포를 세 번 세척합니다. 세포를 DAPI와 함께 배양하고 현미경에서 시각화하기 위해 마운팅 매체와 함께 커버슬립을 장착합니다.