투명화된 마우스 해마 조직에서 성상세포와 흥분성 뉴런의 이광자 현미경 검사

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신경과학

0 조회수 • 2:19 분 • May 29th, 2025

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지질을 제거하여 광학적으로 투명하게 만든 제거된 마우스 해마 조직으로 시작합니다. 조직은 생체 분자를 안정화하고 세포 구조를 보존하기 위해 하이드로겔 메쉬에 내장됩니다.

조직에는 적색 형광 단백질을 발현하는 성상세포와 녹색 핵 단백질을 발현하는 흥분성 뉴런이 포함되어 있어 뚜렷한 시각화가 가능합니다.

티슈를 슬라이드 위에 놓고 뜨거운 접착제를 사용하여 챔버를 만들어 작은 틈을 남깁니다.

굴절률 일치 용액을 적용하여 조직에 수분을 공급하고 기포를 방지한 다음 커버슬립으로 밀봉합니다.

굴

절률 일치 용액으로 챔버를 채워 빛 산란을 줄이고 간격을 좁힙니다.

2광자 현미경을 사용하여 조직을 시각화합니다.

근적외선은 초점면에서 적색 및 녹색 형광 단백질을 여기시켜 광손상을 최소화하면서 고해상도 이미징을 가능하게 합니다. 형광 방출은 별도로 감지되어 성상세포와 흥분성 뉴런의 핵 사이의 공간적 근접성을 명확하게 보여줍니다.

먼저 샘플을 슬라이드 중앙에 놓습니다. 뜨거운 접착제를 사용하여 슬라이드 가장자리에 거의 조직만큼 높이의 벽을 만듭니다. 모서리 중 하나에 작은 간격을 두십시오. 핫 글루 층이 뇌 슬라이스의 높이에 가까워지면 굴절률 일치 용액을 샘플에 1-2방울 떨어뜨려 윗면을 적시고 기포 형성을 방지합니다.

뜨거운 접착제가 아직 액체일 때 커버슬립으로 상단을 밀봉하여 가능한 한 고르게 놓습니다. 그런 다음 굴절률 일치 용액으로 챔버를 채웁니다. 뜨거운 접착제로 간격을 좁히십시오. 핫 글루 벽이 슬라이드의 경계를 넘어 확장되면 확장 가장자리를 자릅니다. 이미징에 오일 침지 대물렌즈를 사용하는 경우 침지 용액을 유지하기 위해 커버슬립 위의 벽에 2-3mm의 접착제를 더 추가합니다. 이 프로토콜 후에 뇌 조직이 제거됩니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026