JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 2:36 분 • May 29th, 2025
희박한 피라미드 뉴런에서 형광 단백질을 발현하는 마취된 형질전환 마우스를 예로 들어 보겠습니다.
마우스는 등쪽 해마에 이미징 캐뉼라를 이식합니다.
가열패드의 2광자 현미경 아래에 마우스를 놓고 캐뉼라의 헤드 플레이트를 홀더에 고정하여 머리를 고정합니다.
각막 건조를 방지하기 위해 연고를 바르십시오.
탈이온수로 캐뉼라를 청소하고 저배율 대물렌즈로 검사하여 잔해물, 손상 또는 형광 문제가 있는지 확인합니다.
정확한 이미징을 위해 이미징 캐뉼라를 현미경의 광축에 맞춥니다.
그런 다음 침수 고해상도 대물렌즈로 전환합니다.
이미지 왜곡을 방지하기 위해 기포가 없도록 캐뉼라에 탈이온수를 채웁니다.
적외선을 사용하여 2광자 종방향 이미징을 수행하여 초점면의 형광단을 선택적으로 여기시켜 심부 조직 이미징을 가능하게 합니다.
이식된 캐뉼라는 시간 경과에 따른 수지상 변화를 추적하기 위해 등쪽 해마에 대한 반복적인 접근을 용이하게 합니다.
가열 카펫 위의 현미경 아래에 마우스를 놓고 헤드 플레이트를 홀더에 고정합니다. 동물의 눈에 눈 연고를 바르십시오. 그런 다음 주사기와 얇은 바늘을 사용하여 탈이온수를 캐뉼라에 떨어뜨린 다음 진공 펌프로 제거하여 이미징 캐뉼라를 청소합니다.
저배율, 장거리 대물렌즈를 사용하여 캐뉼라에 잔류 물, 먼지, 무결성 및 형광 존재 여부를 육안으로 확인합니다. 그런 다음 헤드 홀더 암의 각도를 조정하여 캐뉼라를 광축에 맞춥니다.
1.0 개구개와 4mm 작동 거리를 가진 25x 대물렌즈로 전환하십시오. 그런 다음 캐뉼라에 충분한 탈이온수를 추가하여 캐뉼라를 채우고 캐뉼라 위에 과도한 물을 유지합니다. 마지막으로 두 개의 광자 여기를 사용하여 형광 신호를 이미지화합니다.