형광 현미경을 사용한 경막의 감각 뉴런의 기원 조사

두개골이 노출되어 있고 커튼으로 덮인 마취된 쥐를 예로 들어 보겠습니다.

삼차신경절과 경추 후근 신경절에서 유래한 통증에 민감한 감각 뉴런이 신경파하는 뇌의 가장 바깥층인 경막을 노출시키기 위해 구멍을 뚫습니다.

누출을 방지하기 위해 장벽을 구축하고 역행 추적자를 도입하고 구멍을 밀봉합니다.

상처를 봉합하고 쥐가 회복될 수 있도록 하십시오.

추적자는 감각 신경 축삭으로 들어가 신경절로 역행하여 신경 세포체로 들어갑니다.

쥐를 안락사시키고 신경절을 해부합니다.

신경절의 섹션을 준비하고 슬라이드에 장착합니다.

세포막을 투과화하고 비특이적 결합 부위를 마스킹하는 용액을 첨가합니다.

추적자 및 감각 뉴런 특이적 신경펩타이드를 표적으로 하는 1차 항체와 함께 배양합니다.

1차 항체에 특이적인 형광 표지 2차 항체를 추가합니다.

형광 현미경을 사용하여 세포체 내 신경펩타이드와 추적자의 공국소화를 관찰하여 감각 뉴런의 신경절 기원을 확인합니다.

전기 면도기로 쥐의 머리를 면도하십시오. 그런 다음 쥐에게 무딘 이어바를 끼고 정위 고정 장치 위에 놓습니다. 마우스 홀더를 위치시키고 눈에 안과 연고를 바릅니다. 75% 에탄올을 사용하여 머리 피부의 수술 부위를 청소하고 두피의 정중선을 따라 절개합니다.

멸

균 면 팁 어플리케이터를 사용하여 두개골에서 골막과 근육 조직을 부드럽게 제거합니다. 중간 수막 동맥 위의 왼쪽 두정엽과 측두골에 둥근 팁 비트가 있는 버 드릴을 사용하여 작은 구멍을 뚫습니다. 치과용 규산염 시멘트로 구멍 주위에 은행을 만들고 10마이크로리터 마이크로 주사기로 중간 수막 동맥 주변의 구멍에 2마이크로리터의 플루오로 금을 추가합니다.

작은 지혈 스폰지로 구멍을 덮습니다. 구멍에 파라핀 필름 조각을 놓고 가장자리를 뼈 왁스로 밀봉하십시오. 멸균 실로 상처를 봉합하십시오. 쥐가 완전히 회복될 때까지 따뜻한 곳에 보관한 다음 쥐를 다시 우리로 돌려보냅니다.

생존 7일 후, 이 쥐에게 0.9% 생리 식염수를 관류한 다음 0.1몰 인산염 완충액에 4% 파라포름알데히드를 관류합니다. TG와 자궁경부 1 내지 4 DRG를 해부한 다음 극저온 조절기 마이크로톰 시스템에서 시상 방향으로 30마이크로미터 두께로 절단합니다. 실란 코팅 유리 슬라이드에 섹션을 장착합니다.

조직화학적 펜으로 절편에 동그라미를 치고 차단 용액에서 30분 동안 배양합니다. 샘플을 토끼 항플루오로골드 및 마우스 항-CGRP 항체 용액으로 옮기고 섭씨 4도에서 밤새 배양합니다.

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