0 조회수 • 2:39 분 • May 29th, 2025
형광 표지된 신경비만 세포 또는 INMC를 포함하는 제브라피쉬 유충으로 커버슬립에 장착하고 공초점 현미경 아래에 배치합니다.
INMC는 이전에 레이저 절제를 받은 재생 능력을 가진 전구 세포입니다.
먼저 형광 모드에서 손상된 부위를 관찰합니다. 형광이 없으면 성공적인 레이저 절제가 확인됩니다.
다음으로, 투과광 이미징 모드를 사용하여 세포가 입상으로 보이고 불규칙한 핵으로 부풀어 오른 손상된 부위를 검사하여 세포 사멸을 확인합니다.
부위에 대식세포가 모집되면 손상에 대한 활발한 세포 반응이 나타납니다.
이제 형광 모드로 다시 전환하고 정기적으로 타임랩스 이미지를 캡처하여 회복을 모니터링합니다.
회복 단계에서 INMC는 틈으로 돌출을 확장하여 폐쇄를 촉진하고 세포 복구를 촉진합니다.
분석을 위해 이러한 시계열 이미지를 저장하십시오. 절제된 영역에서 뚜렷한 형광이 다시 나타나면 성공적인 세포 회복이 확인됩니다.
절제 후 세포체를 이미징하려면 채널 메뉴에서 DAPI 트랙을 클릭 취소하여 절제 레이저를 비활성화하고 획득 모드 메뉴를 엽니다. 확대/축소를 클릭하고 확대/축소를 0.7로 줄입니다.
세포 절제의 성공 여부를 평가하려면 시야를 빠르게 스캔하십시오. 사전 절제 이미징과 동일한 설정을 사용하여 절제 후 이미지를 캡처하고 저장합니다. 투과광 광전자 증배관 채널 이미지를 검사하여 세포 손상을 추가로 확인합니다. 손상된 세포는 과립 모양을 나타내며 핵은 자주 부풀어 오르거나 모양이 불규칙하게 나타납니다.
절제 후 세포체 회복을 평가하려면 타임랩스 이미지 캡처를 위한 스테이지 위치와 시간 옵션을 모두 활성화하고 시간 매개변수를 적절한 실험 시점과 15분 간격으로 설정합니다. 그런 다음 실험을 시작하여 이미지를 획득하고 완료되면 결과 파일을 저장합니다.