Immunolabeling 및 Curcumin 염색을 통한 뇌 조직 절편의 아밀로이드-베타 플라크 이미징

0 조회수3:14 • May 29th, 2025

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신경퇴행성 마우스 모델의 뇌 절편으로 시작합니다.

제가 보충된 차단 용액과 함께 배양하여 조직 투과성을 높이고 비특이적 결합을 차단합니다. 용액을 버리십시오.

아밀로이드-베타 플라크를 표적으로 하는 1차 항체를 도입합니다. 항체가 아밀로이드-베타 플라크와 상호 작용하도록 교반하면서 배양한 다음 세척합니다.

적색 형광단 태그가 부착된 2차 항체를 추가하고 항체가 상호 작용할 수 있도록 어두운 곳에서 배양합니다.

결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 세척한 다음 알코올 세척을 수행합니다.

베타 시트가 풍부한 아밀로이드를 높은 친화력으로 결합하는 커큐민을 첨가한 다음 세척합니다.

다음으로, 알코올 농도를 증가시켜 뇌 절편을 탈수시킵니다. 자일렌을 첨가하여 시약의 흔적을 제거합니다.

슬라이드에 절편을 장착하고 형광 현미경으로 관찰합니다.

590나노미터 파장 레이저를 사용하여 2차 항체의 적색 형광단을 여기시킵니다. 이미지를 캡처합니다.

480나노미터 파장 레이저로 전환하여 커큐민을 여기시켜 녹색 형광을 방출합니다.

이미지를 오버레이합니다. 빨간색 및 녹색 형광 공국소화는 뇌 조직의 아밀로이드-베타 플라크를 확인합니다.

항-A 베타 항체로 극저온 조절기 절편 검체를 라벨링하기 위해, 실온에서 1시간 동안 PBS의 10% 정상 염소 혈청 및 0.5% Triton x-100으로 비특이적 결합을 차단하기 전에 12웰 플레이트의 개별 웰에서 세척당 신선한 PBS로 샘플을 3회 세척합니다.

배양이 끝나면 차단 용액을 버리고 샘플을 A 베타 특이적 항체와 함께 섭씨 4도, 분당 150회 회전으로 밤새 배양합니다. 다음날 아침, 세척당 신선한 PBS에서 10분 동안 3회 세척하여 절편을 세척한 후 빛으로부터 보호된 실온에서 1시간 동안 적색 형광단과 접합된 적절한 2차 항체와 함께 배양합니다.

배양이 끝나면 절편을 PBS로 세 번 세척한 다음 70% 알코올로 한 번 세척합니다. 알코올 세척 후, 절편을 실온에서 10분 동안 10 마이크로몰 커큐민과 함께 배양한 후 1 분 동안 70 % 알코올 세척을 3 회 배양합니다.

마지막 세척 후, 농도당 1분 동안 90% 및 100% 알코올로 절편을 탈수하고, 배양당 신선한 자일렌으로 침지당 5분 동안 절편을 2회 청소합니다. 그런 다음 그림과 같이 섹션을 마운트하고 이미지화합니다.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026