0 조회수 • 3:34 분 • May 29th, 2025
납작한 뇌 피질 부분의 미리 고정된 접선 부분부터 시작하십시오. 고정 흔적을 제거하기 위해 세척하십시오.
디아미노벤지딘 또는 DAB 및 황산니켈-암모늄 용액으로 절편을 염색합니다.
DAB는 피질 뉴런으로 확산되고 미토콘드리아의 시토크롬 산화효소와 반응하여 어두운 침전물을 형성합니다. 황산니켈암모늄은 침전물을 어둡게 하여 대비를 향상시킵니다.
파라포름알데히드를 첨가하여 염색 반응을 멈춘 다음 헹굽니다.
절편을 슬라이드에 장착하고 에탄올 세척제로 탈수합니다.
이소프로판올과 자일렌으로 헹구어 절편을 청소하고 광 투과율을 개선합니다.
마운팅 매체를 바르고 그 위에 커버슬립을 놓습니다.
명시야 현미경으로 이미지화하면 피질 뉴런 내에서 침전물이 빛을 흡수하고 산란시켜 어둡게 보입니다.
대조적으로, 얼룩이 없고 깨끗한 영역은 빛을 투과시키고 밝게 보입니다.
이 대조는 피질 모듈을 밝은 배경에 어둡고 고르지 못한 구조로 강조하며, 감각 정보 처리에 관여하는 활성 신경 클러스터를 나타냅니다.
HEPES 완충액에서 절편 조직을 부드럽게 교반하면서 15분 동안 세척합니다. 세척하는 동안 신선한 시토크롬 산화효소 염색 용액을 준비하고 사용하기 직전에 DAB 성분을 첨가하십시오. 이제 갓 만든 염색 용액에 절편을 셰이커로 실온에서 배양합니다. 그리고 계속 지켜봐라. 고정량에 따라 10분 안에 염색을 관찰할 수도 있고 몇 시간이 걸릴 수도 있습니다.
반응이 너무 느리면 온도를 섭씨 37도까지 올리십시오. 반응을 멈추려면 절편을 4% PFA의 수조로 옮기고 부드럽게 교반하면서 15분 동안 배양합니다. 그런 다음 세척당 10분 동안 HEPES 완충액으로 절편을 세 번 세척합니다.
이제 유리 슬라이드에 절편을 장착하고 건조시킨 다음 점진적으로 더 강한 에탄올 수조를 사용하여 탈수합니다. 그런 다음 슬라이드를 이소프로판올로 5분 동안 세척한 다음 자일렌을 5분 동안 세척합니다. 자일렌 수조 후 즉시 빠른 경화 비수성 설치 매체를 추가합니다. 수성 매체는 얼룩을 분해합니다. 커버슬립을 추가한 후 이미지가 나올 때까지 슬라이드를 섭씨 4도에서 보관합니다.