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편도체 뉴런에서 AMPA 및 NMDA 수용체에 대해 면역염색된 쥐 뇌 조직 절편이 포함된 유리 슬라이드를 가져 와십시오.
AMPA 수용체는 글루타메이트 유도 나트륨 유입과 빠른 흥분성 시냅스 전달을 매개합니다.
대조적으로, NMDA 수용체는 글루타메이트 및 공동 작용제 유도 나트륨 및 칼슘 유입을 매개하여 느린 흥분성 시냅스 전달을 촉진합니다.
수용체는 1차 항체로 염색되고 근적외선 형광단 태그가 부착된 2차 항체를 사용하여 검출됩니다.
슬라이드 티슈 면이 아래로 향하도록 근적외선 스캐닝 인터페이스에 놓습니다.
이미징 매개변수를 조정하고 이미징을 시작합니다.
레이저 조명 시 AMPA 및 NMDA 수용체의 형광단은 형광을 방출합니다.
근적외선 이미징은 자가형광을 최소화하여 신호 선명도를 향상시킵니다.
고해상도 스캐닝은 형광 신호의 명확한 구별을 보장하여 편도체의 인근 AMPA 및 NMDA 수용체를 정확하게 시각화할 수 있습니다.
이미징 소프트웨어를 사용하여 학습 및 기억의 마커로 특정 관심 영역의 AMPA/NMDA 형광 강도 비율을 계산합니다.
조직이 아래를 향하도록 근적외선 스캐닝 인터페이스에 슬라이드를 놓습니다. 선택 도구를 사용하여 한 번에 여러 슬라이드를 이미지화합니다. 21마이크로미터의 해상도로 최고 품질 설정을 사용하여 슬라이드를 이미지화합니다. 0나노미터의 오프셋에서 이미지를 이미지 분석 소프트웨어로 가져와 반정량적 단백질 분석을 위해 보고 표시합니다.
이미지 분석 소프트웨어를 연 후 이미지를 스캔한 작업 영역을 선택합니다. 그런 다음 이미지 분석 소프트웨어에서 스캔한 이미지를 열어 스캔을 보고 원시 이미지나 총 정량화된 방출을 변경하지 않고 표시되는 파장, 대비, 밝기 및 배율을 조정합니다.
정량화를 위한 주요 영역을 식별한 후 페이지 상단의 분석 탭을 선택한 다음 사각형 그리기를 선택하여 정량화할 영역 위에 직사각형을 그립니다. 사각형 크기를 보려면 화면 왼쪽 하단에 있는 도형을 선택합니다. 그런 다음 오른쪽 하단의 열을 선택합니다. 그런 다음 높이 및 너비 열을 추가하여 모양 크기를 식별합니다. 마지막으로 모양의 이름을 지정하고 반복합니다. 모든 영역이 샘플링되면 열 탭에서 사용할 수 있는 데이터의 결합 및 분석을 진행합니다.
