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신경과학
0 조회수 • 2:31 분 • May 29th, 2025
세포 기능을 유지하기 위해 완충액에 잠긴 고정된 초파리 뇌 외식편이 포함된 이미징 챔버로 시작합니다.
뇌의 뉴런은 칼슘 이온에 결합하여 형광을 발현하는 세포질 형광 칼슘 지표를 발현합니다.
이미징 챔버를 수침 렌즈가 장착된 형광 현미경 아래에 놓습니다.
렌즈를 내리고 명시야 조명 아래에서 뇌에 초점을 맞춥니다.
형광 모드로 전환하고 이미지를 캡처합니다.
다음으로, 신경펩타이드를 버퍼에 도입하고 타임랩스 기록을 시작합니다.
신경펩티드는 뉴런의 수용체에 결합하여 세포내 신호 전달을 유발합니다. 이것은 칼슘 채널을 열고 칼슘 이온 유입을 허용합니다.
이 칼슘 이온은 지시약에 결합하여 형광 강도를 증가시킵니다.
신경펩티드 자극 후 이미지를 다시 캡처합니다.
신경펩티드 자극 전후의 이미지를 비교합니다.
신경펩티드 자극 후 형광 강도의 증가는 신경펩티드 신호 전달에 대한 초파리 뇌의 반응을 반영합니다.
칼슘 형광 이미지를 얻으려면 뇌 외식편이 포함된 이미징 챔버를 현미경 아래에 놓습니다. PBS에 닿을 때까지 대물 렌즈를 내립니다. 그리고 명시야 조명 아래에서 뇌를 배치하고 초점을 맞춥니다.
형광등으로 전환하고 GCaMP6 표지 세포에 초점을 조정합니다. 수냉식 모드에서 512 x 512 픽셀의 해상도에서 프레임당 250밀리초로 수집을 시작합니다. 그런 다음 노출 시간을 조정하여 CCD 카메라 다이내믹 레인지 내에서 형광 값을 얻되 1,000비트 이미지에서 16 임의 단위 이상을 얻습니다.
이미징 매개변수가 결정되면 펩타이드 투여 전 1분 동안 이미지를 촬영하여 기준선 신호 강도를 감지합니다. 그 후, 준비된 펩타이드 용액 100마이크로리터를 유충 욕조에 피펫팅하여 테스트 펩타이드를 직접 도포합니다. 몇 분 동안 GCaMP6 방출을 기록합니다.
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