Mouse Brain Section에서 Ependymal cell ciliary activity의 라이브 이미징

0 조회수2:56 • May 29th, 2025

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쥐 뇌의 시상 절편을 채취하여 뇌척수액(CSF)으로 채워진 구멍인 심실을 노출시킵니다.

심실을 감싸고 있는 뇌실막 세포는 CSF를 촉진하여 순환을 촉진하는 운동성 섬모를 가지고 있습니다.

섬모 활동을 유지하기 위해 영양이 풍부한 배지가 들어 있는 유리 바닥 접시에 절편을 넣으십시오.

이미징 중 세포 생존력을 유지하기 위해 접시를 미분 간섭 대비(DIC) 현미경의 온도 조절 챔버로 옮깁니다.

DIC 현미경은 프리즘을 사용하여 편광을 분할하여 다양한 경로를 따라 표본을 통과시킵니다.

시편 전체의 굴절률 변화는 빔 사이에 위상차를 도입합니다.

두 번째 프리즘은 빔을 재결합하여 간섭을 생성하여 3차원 효과가 있는 고대비 이미지를 생성하여 미세 구조의 가시성을 향상시킵니다.

박동에 의해 생성된 기포 움직임을 관찰하여 운동성 섬모가 있는 기능적 뇌실막 세포를 찾습니다.

고대비 DIC 이미징을 사용하여 섬모를 기록하여 박동 빈도를 정량화합니다.

절편을 이미지화하려면 1밀리리터의 고포도당 배지가 들어 있는 30mm 유리 바닥 배양 접시에 뇌 절편을 넣고 60배 대물렌즈 오일 침지 렌즈를 사용하여 밀폐된 현미경 챔버 환경을 섭씨 37도 및 이산화탄소 5%로 조정합니다.

다음으로 일반 DIC 투과광이 있는 셀에 초점을 맞춥니다. 그런 다음 DMEM 기포 이동의 방향에 따라 운동성 뇌실막 섬모의 위치에 대한 안내로 DIC 필터를 사용하여 뇌의 측뇌실에 운동성 섬모가 있는 건강한 세포가 포함된 영역을 선택합니다. 뇌실막 섬모를 확인하면 빛을 조정하고 초점을 맞추어 만족스러운 이미지를 얻습니다.

그런 다음 이미징 소프트웨어에서 라이브 이미징 매개변수를 설정합니다. 예를 들어, 여기에서는 카메라 비닝을 1 x 1로 설정하고 60x 대물렌즈와 5-10밀리초의 노출 시간을 결합하여 24비트 이미지를 획득합니다.

현미경 조리개를 최적의 수준으로 열어 노출 시간을 최소화하고 DIC 이미지를 수집합니다. 카메라로 스트리밍되는 라이브 이미지를 관찰하여 지연 없이 빠르고 즉각적인 이미지 획득을 제공합니다. 그런 다음 섬모 박동 속도는 충분한 이미지 대비를 얻기 위한 최소 노출 시간의 요구 사항에 따라 계산할 수 있습니다.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026