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신경과학
0 조회수 • 4:33 분 • May 29th, 2025
도립 현미경의 스테이지에 배치된 관류 어셈블리로 시작합니다.
관류 어셈블리에는 커버슬립과 지속적인 식염수 관류가 있는 마이크로 수로 슬라이드 사이에 고정된 해부된 말초 신경이 포함되어 있습니다.
신경의 수초 축삭은 녹색 형광단 태그가 붙은 신경필라멘트를 발현합니다.
명시야 조명을 사용하여 수초 축삭에 초점을 맞춥니다.
공초점 모드로 전환하고 높은 레이저 출력으로 광표백한 다음 낮은 레이저 출력을 사용하여 낮은 자가형광 참조 이미지를 캡처합니다.
축삭을 따라 평행선을 그려 광활성화 창 길이를 정의합니다. 이를 가이드로 사용하여 직사각형 활성화 영역을 만듭니다.
이 영역을 특정 파장으로 비추어 녹색 형광단 태그가 지정된 뉴로필라멘트를 활성화하여 형광을 발하게 합니다. 이미지를 획득합니다.
활성화 후 타임랩스 이미지를 캡처합니다.
시간이 지남에 따라 형광 신경필라멘트는 양방향으로 이동하여 인접한 측면 영역으로 퍼집니다.
활성화 영역에 인접한 측면 영역에서 형광이 나타나면 신경필라멘트 수송이 확인됩니다.
신경의 근위 끝을 잡고 천천히 커버 슬립 위에 놓습니다. 그런 다음 부드러운 장력을 가하여 곧게 펴십시오. 홈이 있는 슬라이드를 아래로 향하게 하여 마이크로 수로 슬라이드를 신경 위에 놓고 흐름 방향을 신경과 평행하게 배치합니다. 커버 슬립과 마이크로 수로 어셈블리를 뒤집어 슬라이드가 외부 개스킷과 반대되도록 관류실 하우징에 놓습니다.
관류실을 고정하려면 금속 하우징에 놓고 잠금 링을 돌립니다. 식염수 주사기 플런저를 천천히 누르고 관류실을 채웁니다. 설치 및 이미징 중에 입구 및 출구 튜브, 출구 플라스크 및 주사기를 항상 챔버 자체 위로 높게 유지하십시오. 관류 어셈블리를 도립 현미경 스테이지로 옮기고 식염수 주사기를 주사기 펌프에 장착합니다. 그런 다음 모터를 시동하고 분당 0.25밀리리터의 유속으로 속도를 조정합니다.
인라인 용액 히터를 연결하고 섭씨 37도로 설정합니다. 대물렌즈 히터를 연결하고 섭씨 37도로 설정합니다. 대물렌즈에 오일을 바르고 관류 챔버를 스테이지 마운트에 삽입합니다. 챔버 히터 패드에 오일을 바르고 관류실에 부착합니다. 그런 다음 연결하고 섭씨 37도로 설정합니다.
관류 챔버를 스테이지 어댑터에 잠그고 대물렌즈 오일을 챔버 아래쪽의 커버 슬립과 접촉시킵니다. 명시야 조명을 사용하여 커버 슬립 표면에 가장 가까운 신경 바닥 표면의 축삭층에 초점을 맞춥니다. 수초화된 축삭은 대비 증강 없이 명시야 투과광 조명 아
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