생쥐 강아지의 신경 형태학 이미징을 위한 이광자 현미경

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신경과학

0 조회수 • 2:52 분 • May 29th, 2025

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2광자 현미경의 여기 조명을 설정하는 것부터 시작하십시오.

원형 유리 이미징 창과 두개골에 이식된 헤드 플레이트가 있는 마취된 형질전환 쥐 강아지를 예로 들어 보겠습니다.

뉴런은 이미징을 용이하게 하기 위해 적색 형광 단백질을 발현합니다.

유리 이미징 창을 청소하고 강아지를 2광자 이미징 스테이지에 고정합니다.

강아지의 머리를 조정하여 이미징 창을 현미경 대물렌즈에 맞춥니다.

강아지의 체온을 유지하기 위해 가열 패드를 사용하십시오.

마취제 유속을 조정하십시오.

커버슬립에 물 한 방울을 바르고 현미경의 대물 렌즈를 내립니다.

2광자 현미경은 두 개의 빛 광자를 사용하여 형광 단백질을 활성화하여 배경 소음과 광표백을 최소화하면서 상세한 신경 이미징을 가능하게 합니다.

다양한 깊이에서 뉴런의 이미지를 캡처하여 구조를 시각화합니다

.

마지막으로, 이미지를 쌓아 뉴런의 3차원 표현을 생성하여 뉴런 돌출부를 포함하여 뉴런의 3차원 표현을 생성하여 성장 관련 형태학적 변화를 연구합니다.

이미징을 시작하려면 먼저 2광자 레이저 파장을 설정합니다. RFP 여기의 경우 1,000나노미터의 파장을 사용합니다. 커버 슬립의 표면을 70% 에탄올로 닦습니다. 마취된 강아지를 티타늄 바를 사용하여 이미징 스테이지의 티타늄 플레이트에 부착합니다. 고니오미터 스테이지를 사용하여 커버 슬립이 대물 렌즈와 평행이 되도록 헤드를 조정합니다.

섭씨 37도로 설정된 가열 패드를 사용하여 이미징 중에 강아지의 체온을 유지하고 이소플루란 농도를 0.7%에서 1%로 낮춥니다. 이미징 스테이지를 2광자 현미경의 20X 대물 렌즈 아래에 놓습니다. 커버 슬립에 물 한 방울을 바릅니다.

1.4미크론 간격으로 z-스택 이미지를 수집하도록 소프트웨어를 설정합니다. 레이어 4 뉴런 이미징의 경우 z 너비를 150에서 300미크론 사이로 설정하여 전체 수지상 형태를 이미지화합니다. 느린 스캐닝과 평균을 사용하여 뉴런 형태를 보여주는 선명한 이미지를 얻으십시오.

전체 수지상 형태를 획득하는 데 일반적으로 20분 이상이 걸립니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026