마우스 뇌 미세혈관 구조의 생체 내 이미징을 위한 이광자 현미경

0 조회수2:58 • May 29th, 2025

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외과적으로 준비된 얇은 두개골 피질 창 위에 헤드플레이트를 고정한 마취된 마우스로 시작합니다.

마우스를 바로 누운 자세로 눕힙니다. 허벅지 내측 피부를 제거하여 대퇴 정맥을 노출시킵니다.

형광 염료 접합체를 정맥에 주입하여 혈장을 표지하여 혈관 시각화를 가능하게 합니다.

절개 부위를 봉합합니다.

마우스를 뒤집고 헤드플레이트를 하네스에 고정하여 마우스를 안정시킵니다.

설정을 2광자 현미경 스테이지로 옮깁니다.

피질 창 위에 식염수를 추가합니다. 식염수에 닿을 때까지 대물 렌즈를 내립니다.

명시야 조명을 사용하여 이미징 영역을 찾습니다.

2광자 이미징으로 전환합니다.

현미경의 레이저는 저에너지 근적외선을 뇌에 집중시킵니다.

레이저의 초점에서 두 개의 광자가 에너지를 결합하여 염료를 여기시켜 혈관에 형광을 발하게 합니다.

모세혈관층(동맥과 정맥을 연결하는 작은 혈관 네트워크)을 식별하고 확대합니다.

뇌의 미세혈관 구조를 분석하기 위해 이미지를 획득합니다.

이 절차에서는 마우스의 왼쪽 허벅지 내측 피부를 제거합니다. 다음으로 대퇴 정맥을 찾습니다. 1밀리리터 주사기와 30게이지 바늘을 사용하여 130마이크로리터의 형광 염료 용액을 끌어옵니다. 100마이크로리터의 염료를 대퇴 정맥에 천천히 주입합니다.

바늘을 제거한 후 주사 부위에 꾸준하고 부드러운 압력을 가하여 출혈을 멈추고 염료가 5분 동안 순환하도록 합니다. 그런 다음 봉합사로 수술 부위를 봉합합니다. 마우스를 조심스럽게 뒤집어 엎드려 마우스 헤드 플레이트 하네스에 넣습니다. 생체 내 2광자 이미징의 경우 수술 장치를 2광자 현미경으로 옮기고 동물의 마취 수준을 유지해야 합니다.

그런 다음 소량의 0.9% 식염수를 헤드 플레이트 저장소에 넣고 현미경 대물렌즈를 낮추어 식염수와 접촉합니다. 그런 다음 명시야 보기 대물렌즈를 사용하여 관심 영역을 찾습니다. 그런 다음 2광자 이미징을 시작합니다. 뷰 화면에서 모세관층을 찾고 광학 줌 2를 사용하여 이 영역을 확대합니다. 2광자 이미징 소프트웨어를 사용하여 모세혈관의 이미지를 획득합니다.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026