Caenorhabditis elegans 뉴런에서 PolyQ 단백질 응집의 형광 수명 이미징

마취되고 연령이 일치하는 대조군 및 샤페론 결핍 Caenorhabditis elegans 벌레로 시작합니다.

두 그룹 모두 잘못 접히기 쉬운 뉴런에서 형광단 태그가 지정된 polyQ 단백질을 발현합니다.

대조군 벌레에서 샤페론 단백질은 잘못 접힌 polyQ 응집을 제한하는 반면, 샤페론 결핍 벌레에서는 잘못 접힌 polyQ가 쉽게 응집체를 형성합니다.

FLIM(Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy)을 위한 공초점 현미경 스테이지에 컨트롤 슬라이드를 놓습니다.

펄스 레이저를 사용하여 웜을 비춥니다.

레이저는 형광단을 여기시키고, 형광단은 바닥 상태로 돌아갈 때 광자를 방출합니다.

FLIM은 형광단이 여기된 상태로 유지되는 시간인 형광단 수명을 측정합니다.

샤페론 결핍 웜에서 polyQ 응집체는 형광단을 클러스터링하여 광자 방출 대신 인접한 형광단 간의 에너지 전달을 촉진하여 형광 수명을 단축합니다.

FLIM 소프트웨어는 이러한 수명을 처리하여 색상으로 구분된 맵을 생성하여 집계 시각화를 가능하게 합니다.

대조군에 비해 샤페론 결핍 웜의 형광 수명 감소는 polyQ 응집이 증가했음을 나타냅니다.

선충이 완전히 움직이지 않는지 확인하십시오. FLIM 수집 소프트웨어를 엽니다. Tab 버튼을 찾아 출력 활성화를 누릅니다. C. elegans가 장착된 슬라이드를 스테이지에 놓고 투과 모드에서 10배 배율 렌즈를 사용하여 슬라이드에서 선충류의 위치를 파악합니다. 슬라이드를 제거하고 대물렌즈를 63배 배율 렌즈로 전환한 다음 필요한 침지 매체를 적용합니다.

슬라이드를 무대에 놓고 선충의 위치를 파악합니다. 샘플 스캔을 시작합니다. 관심 영역을 선택하고 최대 투영 평면에 초점을 맞춥니다. FLIM 소프트웨어의 인터페이스에서 감지된 광자 수를 미리 봅니다. ADC 값은 네 번째에 1 곱하기 10, 1 곱하기 10 사이여야 합니다. 필요한 경우 초점을 다른 평면으로 이동하거나 레이저 출력을 높여 더 많은 광자를 수집합니다.

- 광자 쌓기를 피하되 충분한 양의 광자를 수집하여 수명 동안 잘 맞고 측정할 수 있도록 하십시오.

- 메뉴 모음에서 탭을 선택하여 획득 매개변수를 설정합니다. 스캔 동기화 인을 선택하여 단일 광자 감지를 허용합니다. 획득을 고정된 시간 또는 고정된 수의 광자로 설정합니다. 시작을 눌러 수집을 시작합니다. 소프트웨어를 열고 파일, FLIM 데이터 로드를 통해 FLIM 데이터 파일을