형질주입된 1차 마우스 대뇌 피질 세포의 저속 촬영 이미징

전

구 세포 및 신경 세포와 같은 마우스 배아 일차 대뇌 피질 세포를 포함하는 폴리머 코팅 멀티웰 플레이트를 가져 와십시오. 전구 세포는 표지 및 추적을 위해 형광 단백질을 발현하도록 형질감염됩니다.

안정적인 이미징 환경을 위해 플레이트를 도립 형광 현미경의 예열된 배양 챔버로 옮깁니다.

일관된 이미징 위치를 위해 플레이트에서 기준 위치를 찾습니다.

형

질감염된 세포를 관찰할 가능성을 최대화하기 위해 더 높은 배율에서 웰당 여러 이미징 필드를 선택합니다.

일정한 간격으로 위상차 이미지를 동시에 캡처하여 세포 형태 및 역학을 밝히고 형광 이미지를 캡처하여 형광 단백질 발현을 모니터링합니다.

타임랩스 위상차 및 형광 이미지를 비교하여 전구 세포 분열 및 신경 계통으로의 분화를 추적합니다.

레트로바이러스 형질도입 세포를 이미지화하려면 조직 배양 플레이트를 온도 및 이산화탄소 컨트롤러에 연결된 이미징 챔버에 넣어 세포를 섭씨 37도 및 이산화탄소 5%의 일정한 조건으로 유지합니다.

XY 축에서 영점 역할을 할 위치를 선택하고 영점을 보정합니다. 웰당 10-15개의 위치를 선택하여 10배 배율로 이미징합니다. 광독성을 줄이기 위해 5분마다 위상차 이미지를 획득하고 3시간마다 형광 이미지를 획득하도록 소프트웨어를 설정합니다. 온도가 평형을 이루는 동안 초점이 변할 수 있으므로 실험 첫 3시간 동안 초점을 확인하고 조정하십시오.