JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 1:56 분 • June 17th, 2025
구 세포 및 신경 세포와 같은 마우스 배아 일차 대뇌 피질 세포를 포함하는 폴리머 코팅 멀티웰 플레이트를 가져 와십시오. 전구 세포는 표지 및 추적을 위해 형광 단백질을 발현하도록 형질감염됩니다.
안정적인 이미징 환경을 위해 플레이트를 도립 형광 현미경의 예열된 배양 챔버로 옮깁니다.
일관된 이미징 위치를 위해 플레이트에서 기준 위치를 찾습니다.
형질감염된 세포를 관찰할 가능성을 최대화하기 위해 더 높은 배율에서 웰당 여러 이미징 필드를 선택합니다.
일정한 간격으로 위상차 이미지를 동시에 캡처하여 세포 형태 및 역학을 밝히고 형광 이미지를 캡처하여 형광 단백질 발현을 모니터링합니다.
타임랩스 위상차 및 형광 이미지를 비교하여 전구 세포 분열 및 신경 계통으로의 분화를 추적합니다.
레트로바이러스 형질도입 세포를 이미지화하려면 조직 배양 플레이트를 온도 및 이산화탄소 컨트롤러에 연결된 이미징 챔버에 넣어 세포를 섭씨 37도 및 이산화탄소 5%의 일정한 조건으로 유지합니다.
XY 축에서 영점 역할을 할 위치를 선택하고 영점을 보정합니다. 웰당 10-15개의 위치를 선택하여 10배 배율로 이미징합니다. 광독성을 줄이기 위해 5분마다 위상차 이미지를 획득하고 3시간마다 형광 이미지를 획득하도록 소프트웨어를 설정합니다. 온도가 평형을 이루는 동안 초점이 변할 수 있으므로 실험 첫 3시간 동안 초점을 확인하고 조정하십시오.