컨포칼 현미경을 사용한 마우스 신경 줄기 세포 분열의 타임 랩스 이미징

0 조회수2:43 • June 18th, 2025

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형질전환 마우스 뇌에서 분리된 부착된 신경 줄기 세포 또는 NSC가 포함된 멀티웰 플레이트를 가져 와서 보십시오. 이러한 NSC에는 첫 번째 성장 또는 G1 단계에 특이적인 형광 태그 단백질이 포함되어 있습니다.

NSC가 분열함에 따라 세포 주기의 G1 단계에서 형광을 발하고 다른 단계에서는 형광을 방출하지 않습니다.

플레이트를 공초점 레이저 주사 현미경 이미징 챔버에 넣고 제어된 온도로 유지합니다.

원하는 대물 렌즈를 선택하고 형광 강도를 조정하십시오.

타임랩스 이미징을 위한 매개변수를 구성합니다.

큰 이미지 옵션을 선택하고 원하는 기간 동안 정기적으로 이미지 획득을 예약합니다.

고속 공진 스캐너를 사용하여 광표백을 방지하고 고해상도를 유지하십시오.

명시야 설정을 사용하여 세포 모양을 시각화하고 적절한 형광 필터를 사용하여 형광을 캡처합니다.

NSC의 타임랩스 이미징을 시작하여 다양한 세포 주기 단계를 시각화합니다.

부착된 온도 조절 챔버를 5% 이산화탄소 분위기에서 섭씨 37도로 예열하여 이미징용 공초점 레이저 스캐닝 현미경을 준비합니다. 예열된 현미경 챔버 내부에 96웰 플레이트를 배치하고 첫 번째 웰에 초점을 맞춥니다. 그런 다음 이미징 소프트웨어를 열고 메인 창에서 마우스 오른쪽 버튼을 클릭하여 획득 컨트롤 획득 및 획득 해제를 선택하여 TI 패드를 열고 Apo VC 20x DIC 대물렌즈 플랜을 선택합니다.

그런 다음 획득 컨트롤 획득을 클릭한 다음 타임랩스 옵션을 엽니다. 각 웰의 중심을 스테이지 위치로 설정하고 큰 이미지 옵션을 7 x 7 밀리미터 제곱으로 선택합니다. 각 우물 중앙 주변의 모자이크 이미지를 관찰하십시오. 큰 모자이크 이미지의 겹침을 5%로 설정하고 24시간 동안 20분마다 사진을 찍도록 빈도를 설정합니다.

A1 플러스 설정에서 메뉴 표시줄에 나열된 각 형광에 대한 광전자 증배관 전압 레벨을 선택합니다. 512 x 512 픽셀 형식의 고속 공진 스캐너를 사용하여 이미지를 획득하고 DIC를 사용하여 셀을 시각화하려면 선택합니다. 그런 다음 데이터 파일을 저장할 폴더를 선택합니다. ND 획득 창에서 지금 실행 버튼을 선택하여 획득을 시작합니다.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026