0 조회수 • 2:24 분 • June 17th, 2025
이동식 케이지 시스템에 고정된 마취된 마우스로 시작합니다.
마우스는 뉴런이 칼슘에 민감한 형광 단백질을 발현하는 뇌의 편도체를 표적으로 하는 사전 이식된 기울기 굴절률 수정체를 가지고 있습니다.
렌즈 표면은 보호를 위해 덮여 있습니다.
마우스가 깨어나도록 한 다음 마찰 없는 케이지 회전을 위해 공기 흐름을 적용합니다.
렌즈 커버를 제거하고 뇌 위에 소형 현미경을 놓습니다.
현미경의 LED를 켭니다. 그런 다음 렌즈가 시야 중앙에 오도록 현미경을 정렬합니다.
렌즈 이미지를 캡처하고 현미경 위치를 조정합니다.
케이지가 회전함에 따라 쥐의 다리 움직임은 두려움을 유발하여 편도체 뉴런을 자극합니다.
이것은 형광 지시약에 결합하는 칼슘 이온의 유입을 유발합니다.
LED 조명은 이러한 칼슘 결합 지표를 자극하여 형광을 발하게 합니다.
그라디언트 굴절률 렌즈는 이 형광을 효율적으로 포착하여 현미경으로 전송합니다.
이를 통해 편도체 신경 활동의 실시간 칼슘 이미징이 가능합니다.
GRIN 렌즈 이식의 품질을 평가하려면 이동식 홈 케이지 시스템의 헤드 바에 마취된 마우스 아래에 카본 케이지를 놓고 공기 흐름을 켜서 케이지가 마찰 없이 자유롭게 움직이도록 합니다. 현미경 그리퍼와 정위 조작기를 사용하여 소형화된 현미경을 프레임에 수직으로 정렬한 후 이식된 GRIN 렌즈의 표면이 소프트웨어 내의 이미지 시야에 나타날 때까지 현미경을 내립니다. 이식된 GRIN 렌즈의 중심을 시야의 중심에 맞추고 이식된 GRIN 렌즈 표면의 이미지를 캡처합니다. 그런 다음 GCaMP 발현 세포의 모양을 관찰하면서 현미경의 대물 렌즈를 천천히 들어 올립니다.