Miniscope를 사용한 쥐 내측 전전두엽 피질의 실시간 칼슘 이미징

뉴런이 유전적으로 암호화된 칼슘 지표를 발현하는 내측 전두엽 피질을 표적으로 하는 구배 굴률 렌즈를 이식한 마취된 형질도입 마우스를 예로 들어 보겠습니다.

렌즈 캡을 제거하고 선명한 빛 투과를 위해 표면을 청소하십시오.

미니스코프를 렌즈 홀더에 고정합니다.

미니스코프 위치를 조정하여 최적의 초점면을 식별합니다. 이러한 조정은 신경 세포체의 명확한 시각화를 보장합니다.

케이블을 분리하고 마우스가 복구되도록 합니다.

케이블을 미니스코프에 연결하고 마우스를 동작 기록 설정이 있는 챔버로 옮깁니다.

이미징 중에 미니스코프는 칼슘 지표를 자극하기 위해 빛을 방출하며, 이는 세포 내 칼슘 유입에 의해 형광을 발합니다.

기울기 굴률 렌즈는 이러한 광학 신호를 심부 뇌 조직에서 미니스코프로 전달하여 빛 산란을 줄이고 신경 활동을 실시간으로 시각화할 수 있습니다.

기록된 칼슘 일시적 활동을 행동 관찰과 함께 처리하여 신경 활동을 특정 행동과 연관시킵니다.

이소플루란으로 마우스를 잠시 마취한 후 보호 캡을 제거하기 전에 작은 드라이버로 베이스의 잠금 나사를 풀고 아세톤에 적신 면봉으로 GRIN 렌즈 표면을 청소합니다. 미니스코프를 케이블에 연결하고 NewView 소프트웨어를 시작하여 뭉툭한 집게를 사용하여 약간 조이거나 풀어 베이스에 대한 미니스코프의 위치를 조정하여 최상의 초점면을 식별하기 시작합니다. 최적의 초점면이 결정되면 케이블을 분리하고 마우스를 홈 케이지에 다시 넣기 전에 잠금 나사를 조입니다.

동작 카메라 소프트웨어를 켜면 라이브 스트림 기능을 통해 마우스 동작 경기장을 볼 수 있습니다. 상단 카메라의 초점을 수동으로 조정합니다. 트리거 스트로브를 선택하고 트리거 활성화/비활성화를 선택한 다음 녹음 버튼을 클릭합니다. 그런 다음 찾아보기를 사용하여 동작 기록이 저장될 위치를 선택합니다. 원하는 이미지 형식을 선택합니다.

마우스를 경기장 가까이 가져가서 미니스코프를 데이터 수집 시스템에 연결된 케이블에 연결합니다. 그런 다음 마우스를 경기장 중앙에 놓습니다. 동작 카메라 소프트웨어에서 녹화 시작을 클릭합니다.

NewView에서 LED1을 선택하고 캡처를 클릭한 다음 버튼을 트리거하여 녹화를 시작합니다. 이를 통해 칼슘 이미징과 마우스 행동을 동시에 기록할 수 있습니다. 3,000프레임 후에 중지를 누르고 파일을 저장합니다.