JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 2:54 분 • June 18th, 2025
제자리에 단단히 고정된 실험용 지그에 구속되고 깨어 있는 쥐부터 시작하십시오.
이전에 이식된 기록 챔버를 열고 실리콘 젤 덮개를 제거합니다.
뇌에 접근하기 위해 다시 자란 조직을 제거하십시오.
수분 유지를 위해 식염수 한 방울을 추가하십시오.
그런 다음 시카고 블루 염료가 들어 있는 미리 채워진 기록 피펫을 마이크로 매니퓰레이터에 부착합니다.
피펫이 표적 뇌 영역에 도달할 때까지 기록 챔버로 내립니다.
피펫은 뉴런과 접촉하고 뉴런을 관통하지 않고 뉴런의 신호를 기록합니다.
이러한 신경 신호를 딸깍 소리로 들은 다음 피펫을 통해 전기 펄스를 전달합니다.
이 펄스는 뉴런에 인접한 염료를 주입하여 표적 뇌 영역을 정밀하게 염색할 수 있습니다.
이러한 세포 교차 기록 및 염색 기술은 기록 부위를 정확하게 시각화하고 신경 활동을 뇌 해부학에 정확하게 매핑할 수 있도록 합니다.
쥐를 천 양말에 넣고 천 양말을 적절한 실험 지그의 단단한 튜브로 옮깁니다. 쥐의 머리 구속 플레이트를 지그의 해당 조각에 부착합니다. 다음으로, 쥐에게 이식된 머리 고정 볼트에 832 너트를 놓습니다.
그런 다음 나사산이 있는 스테인리스 스틸 막대를 헤드 볼트에 나사로 고정합니다. 그런 다음 기록실을 열고 실리콘겔을 제거합니다. 개두술에서 조직이 다시 자란 경우 미세한 집게를 사용하여 개두술을 청소하십시오. 필요한 경우 이 과정에서 이소플루란 마취를 사용하십시오.
그런 다음 피펫을 전동 마이크로매니퓰레이터에 부착합니다. 피펫을 전방, 후방 및 내측 측면 축의 원하는 기록 위치로 이동합니다. 그런 다음 피펫이 의도한 기록 위치에서 등쪽으로 약 500마이크로미터가 될 때까지 경막을 통해 복부로 전진시킵니다. 녹음된 증폭된 전압의 오디오 모니터에서 스파이크 이벤트를 들으면서 피펫을 천천히 전진시킵니다. 스파이크 이벤트가 식별되면 양의 전압 편향이 약 500마이크로볼트보다 클 때까지 피펫을 약 0-100마이크로미터 계속 움직입니다.
기록 부위에 레이블을 지정하려면 전류 소스를 음의 4마이크로암페어로 설정하십시오.amps 50% 듀티 사이클에서 2초 펄스. 그리고 4분 동안 전류를 통과시켜 피펫을 통해 시카고 스카이 블루를 이온영동으로 주입합니다.