세뇨관 결함을 연구하기 위한 쥐 모델의 2차 조화 생성 이미징

0 조회수2:40 • June 17th, 2025

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유리 슬라이드에 장착하고 완충액에 담근 쥐 뇌 조직 조각으로 시작합니다.

쥐는 미세소관의 구성 요소인 튜불린의 결함으로 인해 발생하는 세뇨관병증을 앓고 있으며, 이는 미세소관의 비정상적인 축적과 파괴로 이어집니다.

이것은 또한 중추 신경계의 미엘린 생성에 영향을 미칩니다.

상세한 이미징을 위해 슬라이스를 덮은 2광자 여기 현미경 아래에 놓습니다.

무결성을 유지하기 위해 슬라이스에 정기적으로 수분을 공급하십시오.

현미경을 비스캔 이미징 모드 (약한 신호를 감지하기위한 레이블이없는 기술) 로 설정합니다.

조직을 펄스 적외선 레이저에 노출시킵니다.

미세소관은 2차 고조파 발생 또는 SHG 신호로 알려진 감지 가능한 신호로 빛을 방출합니다.

정상적인 미세소관 축적이 있는 영역은 이러한 신호를 증폭시켜 검출 가능성을 높입니다.

광학 필터를 적용하여 이러한 신호를 미세 조정합니다.

캡처된 이미지는 미세소관 밀도와 이상을 드러내며, 여기서 높은 SHG 강도와 클러스터링은 튜불린 결함 및 미엘린 생산 감소를 나타냅니다.

샘플을 현미경 아래에 놓고 투과광으로 안경을 통해 직접 관찰하여 대물렌즈 아래에 적절하게 배치합니다. 얇은 액체 필름이 전체 샘플을 덮도록 과도한 HBSS를 제거합니다. 샘플의 과도한 증발 및 건조를 방지하기 위해 몇 분마다 액막을 육안으로 확인하십시오.

어두운 배양 챔버의 모든 문을 닫거나 검은색 나일론 폴리우레탄 코팅 직물로 배양 챔버를 덮는 것을 포함하여 디스캔되지 않은 이미징을 위해 현미경 스테이지를 준비합니다. 전송 경로를 따라 스캔 해제되지 않은 이미징 모드를 선택합니다. 이렇게 하면 튜불린의 약한 SH 신호 포착이 최적화됩니다.

그런 다음 목표를 선택합니다. 다음으로 픽셀 체류 시간이 12.6마이크로초인 레이저 출력을 설정합니다. 512 x 512 픽셀 이하의 이미지를 속도 5, 평균 2로 촬영하여 평균 획득 시간 15초입니다. 먼저 485나노미터 단거리 통과 필터를 사용하여 이미지를 캡처합니다. 그리고 두 번째 단계에서는 날카로운 405나노미터 대역 통과 필터를 추가합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026