Imaging and Quantification of Axonal Regeneration in Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons

0 조회수2:23 • June 17th, 2025

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멸화된 인간 후각 외피 아교세포 또는 OEG 세포와 축삭 절제된 쥐 망막 신경절 뉴런 또는 RGN을 커버슬립에 공동 배양합니다.

OEG 세포는 RGN에서 축삭 재생을 촉진하는 신경재생 특성을 나타냅니다.

RGN은 체세포 또는 세포체가 빨간색 형광을 발하고 축삭이 녹색 형광을 발하도록 면역 표지됩니다.

마운팅 매체를 사용하여 셀이 들어 있는 커버슬립을 장착합니다.

낙산화형광 현미경을 사용하여 RGN의 여러 이미지를 캡처합니다.

이미징 소프트웨어에서 이미지를 엽니다.

총 RGN 수에 비해 축삭이 있는 뉴런의 백분율을 정량화합니다.

다음으로, 체세포에서 끝까지 축삭을 추적하고 축삭 추적을 시작하여 모든 축삭의 길이를 결정합니다.

모든 축삭 길이의 합을 총 RGN 수로 나누어 축삭 재생 지수를 정량화합니다.

커버슬립을 마운팅 매체로 장착하고 섭씨 4도로 유지합니다. 낙후형광 현미경의 40배 대물렌즈를 사용하여 축삭 재생을 정량화합니다. 망막 신경절 뉴런의 전체 인구에 비해 축삭이 있는 뉴런의 비율을 정량화합니다.

ImageJ의 NeuronJ 플러그인을 사용하여 축삭 재생 지수 또는 평균 축삭 길이를 정량화합니다., 이는 식별된 모든 축삭의 길이를 축삭을 제시했는지 여부에 관계없이 계산된 뉴런의 총 수로 나눈 값입니다. 이미지를 연 후 분석을 클릭하고 현미경 설정에 따라 마이크로미터당 픽셀 단위로 작업하여 배율을 설정합니다. 추적 추가를 선택하여 축삭 추적을 시작한 다음 체세포에서 끝까지 축삭을 추적합니다. 추적 측정을 클릭하고 추적 측정값을 표시하고 실행합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026