JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 2:00 분 • June 17th, 2025
루시페린이 보충된 배지에 형질전환 마우스 배아의 피질 뇌 절편이 포함된 접시로 시작합니다.
피질 영역에는 녹색 형광 단백질 또는 GFP를 발현하는 신경 줄기 세포와 루시페라아제 리포터 유전자에 융합된 관심 유전자가 포함되어 있습니다.
형광 및 휘도 측정을 위해 접시를 현미경 스테이지에 놓습니다.
관심 영역에 초점을 맞춘 GFP 형광의 테스트 이미지를 캡처합니다.
신경 분화 과정에서 줄기 세포는 관심 유전자를 발현하기 시작하고 루시페라아제 효소와 융합된 단백질을 생성합니다.
루시페린은 루시페라아제 효소와 상호 작용하여 분화 과정에서 관심 유전자의 발현을 직접적으로 반영하는 생물발광을 생성합니다.
형광 이미지를 캡처하여 특정 활성 영역을 식별하고, 생물 발광 이미지를 캡처하여 동적 유전자 발현을 모니터링하고, 명시야 이미지를 캡처하여 형태학적 정보를 제공합니다.
이러한 3차원 타임랩스 이미지를 획득하여 천연 조직 환경 내에서 신경 분화 중 유전자 발현을 시각화합니다.
슬라이스 배양 내에서 루시페라아제 리포터 발현을 시각화하려면 40x 대물렌즈를 선택합니다. 그리고 샘플 접시를 현미경 스테이지에 놓습니다. 형광의 테스트 이미지를 획득합니다. 그리고 위치와 초점면을 적절한 여기 조명의 조명 아래에서 관심 영역으로 설정합니다. 그런 다음 24시간 동안 3차원 발광, 형광 및 명시야 획득에 의한 타임랩스 획득을 실행합니다.
전체 스크립트를 보고 수천 개의 과학 동영상에 액세스하세요