Epifluorescent Microscopy를 사용한 슬상 신경절 뉴런 반응의 생체 내 이미징

미각 처리 말초 뉴런의 클러스터인 외과적으로 노출된 무상 신경절이 있는 마취된 마우스로 시작합니다.

이 뉴런은 칼슘 결합 시 형광을 발하는 칼슘 지표인 GCaMP를 발현합니다.

명확한 시각화를 위해 신경절을 덮고 있는 액체를 제거합니다.

현미경으로 흡수 패드 위에 마우스를 놓고 해부학적 랜드마크를 사용하여 슬상 신경절을 찾습니다.

epifluorescence scope에서 적절한 필터를 사용하여 GCaMP 발현 뉴런에서 녹색 형광을 검출합니다.

그런 다음 테이스탄트 전달 튜브에 연결된 디스펜싱 바늘을 마우스의 입에 삽입하고 테이스탄트를 전달합니다.

맛은 미각 수용체 세포를 자극하여 신경절 뉴런 수용체에 결합하는 ATP를 방출하여 칼슘 유입을 유발합니다.

이 칼슘 이온은 GCaMP에 결합하여 형광 방출을 유도합니다.

카메라를 현미경의 시야에 맞추고 비디오 녹화를 맛 전달과 동기화하여 형광 변화를 통해 실시간 신경 활동을 캡처합니다.

테이스탄트 패널을 실행하려면 흡입을 사용하여 슬상에서 액체를 제거하고 해부 현미경 아래에서 흡수 패드 위에 마우스를 놓습니다. 수포에 남겨진 구멍, 측두골의 구멍, 일곱 번째 신경을 사용하여 슬상 신경절을 찾습니다. 그리고 epifluorescence 스코프에서 FITC/GFP 필터를 사용하여 개별 GCaMP 발현 슬상 신경절 뉴런을 확인합니다. 한 테이스탄트 라인의 분배 바늘을 동물의 입에 단단히 넣습니다. 비디오 녹화 시작과 시식 프레젠테이션 시작을 동기화하고 라이브 피드에서 응답을 확인합니다.