Name: 원격 높은 처리량 Phenotyping에 마우스 눈 핵의 제거 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: 학습하세요 마우스 눈 핵적출 기법으로 고처리량 표현형 분석을 위한 조직 고정을 수행하는 방법을. 해부학적 랜드마크를 식별하고 정확한 수술 절차를 익혀 연구 결과를 향상시키세요.

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Bartly J. Mondino MD, 줄스 스타 인 안구 연구소, UCLA의 이사;, 그리고 라미 네즈 - 솔리스, 재키 선배 화이트와 Sanger 연구소, 웰컴 트러스트 게놈 캠퍼스에서 쟌 Estabel 실명 방지를위한 연구. 이 연구는 안과 및 Visual 연구에서 동물의 사용에 대한 ARVO 보호 정책을 준수합니다.

1. 무딘 절개 : 고정되지 않은 표본에서 마우스 눈의 핵의 제거 <ol><li> 노출과 뒤쪽 세계 (안구) 표면에 대한 액세스를 개선하기 위해 눈꺼풀를 분열. </li><li> 궤도의 (이하) 세계 (눈 소켓) 뒤에 곡선 드레스 forcep를 놓습니다. Mahajan Sharptip 드레싱 forcep은 (재료 및 시약 표 참조)이 단계를 쉽게하기 위해 뾰족한 팁을 사용자 정의 악기입니다. </li><li> forcep을 닫고 세계를 쥐어 피하려면 조심하면서 전 세계 뒤에 궤도 결합 조직과 시신경을 파악. </li><li> 부드럽게 위쪽으로 forcep을 뽑아 궤도에서 눈알을 뽑아 내다. 흰색 스레드와 같은 조직은 시신경입니다. </li><li> PBS의 눈을 놓으십시오. 30 게이지 바늘을 사용하여, 하나의 구멍이 안구에 바늘 1~2밀리미터를 삽입하여 limbus에 바로 뒤쪽 상처를합니다. 이 안구 조직을 침투하기가 달리없는 등 글 루타 알데히드 등의 fixatives는,,, 실내 직접 수행 할 수 있습니다적이있는 눈. 이 정착액 등 paraformaldehyde 또는 알코올 등, 관심 안구 조직에 diffusing 할 경우이 찔린 상처를 만들 필요하지 않을 수 있습니다. </li><li> 즉시 침지 고정 용 정착액으로 전체 눈을 놓습니다. </li></ol> 2. 샤프 해부 : 마우스 눈 다음 재관류 고정의 핵의 제거 <ol><li> 거리에 세계에서 눈꺼풀을 보유하는 곡선 colibri forcep을 사용합니다. </li><li> 전 세계에 평행 동양 곡선 Westcott의 분해 가위, 궤도의 뒷면을 향해 목표로하는 동안. </li><li> 하부, 중간, 우수한, 그리고 측면 측면에서 세계를 둘러싸고있는 고정 결합 조직을 잘라. </li><li> 세계 뒤에 곡선 forcep을 놓고 세계에 눌러없이 결합 조직을 파악하고, 눈을 명백히하다 앞으로 당긴다. 궤도 결합 조직은 관류 고정에서 치열한이기 때문에, 궤도 조직의 추가 절단 완전히 글로브를 공개 할 필요가있을 수 있습니다5. </li></ol> 3. 고정 및 패키징 고정 조직의 배송은 적절한 라벨 및 포장을 포함하여 기관 및 우편 서비스 요구 사항을 준수해야합니다. 다음 프로토콜은 주위 온도에서 비 전염성 생물 샘플을 출하의 예입니다. 이 3 포장 층 있지만 클래스 A / B 생물학적 물질 또는 액체 질소 라벨이 필요합니다. <ol><li> 고정 짧은 경우 최소 3-ML의 정착액, 포스트 정착액 버퍼로 5 ML 유리 섬광 유리 병에 눈을 넣습니다. 유리 병의 뚜껑에있는 추적 번호를 작성하고 Parafilm로 밀봉. </li><li> 생물학적 샘플로 장소 섬광 튜브는 배송 컨테이너를 승인했습니다. 샘플이 배치되는 밀폐 용기, 흡수 중간 계층 및 보호 외부 층 : 우리 연구소에서 예를 들어, 승인 컨테이너는 3 층이 필요합니다. </li><li> 버블 랩 패키지로 한 다음 응용 프로그램에 컨테이너를 놓고적절한 서류와 함께 roved 실험실 배송 컨테이너. </li></ol> 4. 대표 결과 눈의 조직 학적 시험은 Hematoxylin과 Eosin의 착색, 효소 표현 감지, 전송 전자 현미경, 그리고 immunohistochemistry 등의 다양한 방법으로 수행 할 수 있습니다. 4 % paraformaldehyde에 침적 고정 후, 조직은 파라핀과 마이크로톰에 sectioned에 포함되었다. 높은 처리량 phenotyping, 우리는 학생 - 시신경 부분을 분석이 눈에 샘플 모든 조직 유형 (그림 1). 조직의 제는 lacZ 표현 (그림 2), 세포 세포 소기관의 전송 전자 현미경 (그림 3) 및 항체 (그림 4)와 특정 분자의 표현을 검토했다. 우리의 표현형 검사 방법에서는 (latera 코에 대해 (중간 안각)과 측두엽과 눈의 방향을 유지하기 위해 중요하지리터 안각)면. 눈의 방향이 필요한 경우 최소한 두 가지 옵션이 있습니다. 핵의 제거 후, ​​우리는 휴대용 소작 장치와 세시 위치에 시간적 각막에 빛 소작을 적용했습니다. 병변은 조직 학적 소견에 분명하고 조직 학적 잉크와 같은 처리하는 동안 손실되지 않습니다. 단점은 그 소작 손해 시험을위한 중요한 조직이 될 수있는 각막이다. 다른 옵션은 extraocular 근육 삽입을 식별 할 수있는 숙련 된 해부학자가 필요합니다. stereomicroscope에서 하부 우수한 경사 근육 삽입의 식별이 세계의 하부 및 뛰어난 및 측면을 표시합니다. 3 중 오리엔테이션 방법으로는 오른쪽 또는 왼쪽 눈으로 표본을 추적하는 것이 중요합니다. 함께이 sectioning하기 전에 정확한 전 방향을 할 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig1.jpg" alt="눈 해부학 현미경 사진; 조직학 섹션; 수정체, 망막, 각막; 셀룰러 레이어 세부 정보." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="그림 1"> 1 그림. 마우스 눈 조직 학적 이미지는 afte R 원격 획득. 마우스 눈은 4 % paraformaldehyde로 관류 고정 후 날카로운 절개로 enucleated했다. Hematoxylin과 Eosin 물들 A.의 학생 - 시신경이 섹션은 모든 조직 substructures의 보존을 보여줍니다. 시신경이 없으면, ON. , IPL, 내부 plexiform 레이어, INL, 내부 핵 계층, OPL, 외부 plexiform 레이어, ONL, 외부 RGC, 망막 신경절 세포 : 일반 망막의 (녹색 규모의 바 = 500 마이크론) B. 높은 배율의 전망은 판상 구조를 보여줍니다 핵 레이어 (photoreceptor 세포) (화살표), OS, photoreceptor 외부 세그먼트; RPE, 망막 안료 상피, C, 맥락막, photoreceptor 내부 세그먼트 (화살표 머리)입니다. (녹색 규모 바 = 50 마이크론) C.는 정상적인 망막에 비해,이 표본은 photoreceptor 변성에 얇은 때문입니다. ONL는 있으며, OS는 (화살표) 완전히 결석입니다. (녹색 규모 줄이 = 50 마이크론) "ALT ="그림 2 "/&gt; 유전자 변형 쥐 그림 2. lacZ의 표현. 눈 (5 MM K3Fe (CN) 6, 5 MM K4Fe (CN) 6, 2 MM MgCl2, 0.02 % NP40 무딘 절개로 enucleated 1 MG / ML X-여자 솔루션에 몰두했다 37의 밤 및 0.1 % 나트륨 deoxycholate) ° C. 눈은 30 분 마이크로톰에 sectioned 2 % formaldehyde/0.2 %의 글 루타 알데히드에서 수정되었습니다. X-여자 제품 (파란색) 레이블 : A. Ciliary 상피, B. 각막 상피와 C. 망막의 망막 신경절 세포 (RGC) 계층. INL, 내부 핵 계층, ONL, 바깥 쪽 핵 층. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig3.jpg" alt="망막 구조; 막대 외부 세그먼트, RPE 세포, Bruch's membrane을 보여주는 전자 현미경 사진." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 망막 색소 상피 (RPE)의 전송 전자 현미경. 찔린 상처의 무딘 절개과 창조 후, 눈을 집중했다는 0.1M 나트륨 인산염 버퍼에 2.5 %의 Paraformaldehyde / 2.5 %의 글 루타 알데히드에 고정. 눈이 secon했다darily, 1 % 오스뮴의 textroxide에서 수정 서서히 건조하고, Spurr의 수지에 포함. 조직은 90 나노 미터에서 sectioned이고 Formvar로 덮여 구리 슬롯 격자에 배치하고 전송 전자 현미경을 사용하여 이미징. 현미경은 photoreceptor 외부 neurosensory 망막의 세그먼트, 망막 안료 상피 내 melanosomes (M), 그리고 Bruch의 멤브레인을 보여줍니다. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig4.jpg" alt="박테리아 생물막 구조의 형광 현미경 이미지; 20미크론 스케일의 배율." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="그림 4"> 4 그림. 마우스 유리체에서 초과 산화물 dismutase-3 Immunohistochemical 라벨 (녹색). 눈이 무딘 절개로 enucleated와 4 % paraformaldehyde에 침적 고정을 받았습니다되었습니다. 그들은 마이크로톰을 사용하여 파라핀과 sectioned에 포함되었습니다. 1시 50분을 희석 조직 섹션은 토끼 polyclonal SOD3 항혈청과 incubated되었습니다. SOD3 표현은 염소 안티 - 토끼 IgG (H + L) - 알렉사 형석 488 복합 차 항체를 사용하여 감지되었습니다. SOD3의 라벨은 GRE에 표시됩니다ko 페이지를 참조하십시오.

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</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

대부분의 유전자 변형 마우스는 눈을 검사하지 않는 실험실에 존재합니다. 우리 비디오 기술은 눈 작은 경험이있는 실험실에서 조직 획득을 최적화 할 수 원격 수술 기술 이전을위한 간단한 표준화 된 방법을 보여줍니다. 이 비디오 기술은 의미있는 비교 phenotypic와 분자 연구를 방지 비 표준화 조직 수집 및 고정 방법에 의한 전문 사이트 제한된 수의를 사용하는 것입니다 높은 처리량 phenotyping에 주요 함정을 극복하는 데 도움이됩니다. 새로운 원격 실험실과 기술자와 품질 관리를 설정하고 유지하기 위해, 그것은 시작과 정기적으로 연구를 통해 야생 형 눈을 포함하는 것이 중요합니다. 우리는 또한 여러 genotypes에서 여러 눈 등 각각의 눈에 고유 한 식별 번호를 할당 할 수있는 웹 기반 시스템으로, 전송 때 추적 시스템이 중요하다는 것을 발견했다. 높은 수준의 고정 및 후속 조직 섹션을 얻을 수 있지만재관류 - 고정 동물, 우리는 고정되지 않은 동물로부터 enucleated 표본은 대부분의 형태학 및 분자 연구를위한 ...

<table border="1"><tbody><tr><th> 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 코멘트 </th></tr><tr><td> 구부러진 드레싱 Forcep </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1408 </td><td></td></tr><tr><td> Mahajan Sharptip 드레싱 forcep </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1406 (REF SP7-64520) </td><td></td></tr><tr><td> 곡선 Westcott의 가위 </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3321 WH </td><td></td></tr><tr><td> 15 ° BD 비버 Microsurgical 블레이드 </td><td> Becton - 디킨슨 </td><td> 374881 </td><td></td></tr><tr><td> 0.22 미세 Castroviejo Suturing의 포셉 </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1805 </td><td></td></tr><tr><td> 0.12 Colibri 포셉 </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> 132분의 2 </td><td></td></tr><tr><td> 30 게이지 바늘 </td><td> Becton - 디킨슨 </td><td> 305128 </td><td></td></tr><tr><td> 바이오 해저드 메일 서버 </td><td> 어부 </td><td> 03-523-4 </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> 어부 </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> 유리 섬광 튜브 </td><td> 휘튼 </td><td> 4500413033 </td><td></td></tr><tr><td> PBS, pH를 7.4 </td><td> Invitrogen </td><td> 70011-044 </td><td></td></tr><tr><td> 16 % Paraformaldehyde </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td> 15,700 </td><td></td></tr><tr><td> 0.1M 나트륨 인산염 버퍼에 2.5 %의 Paraformaldehyde / 2.5 %의 글 루타 알데히드 </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td> 15700 및 16300 </td><td> 실험실에서 혼합 </td></tr><tr><td> 50 % 글 루타 알데히드 </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td> 16,300 </td><td></td></tr><tr><td> 0.25 % Formvar </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td> 15,810 </td><td></td></tr><tr><td> 순경슬롯 그리드 당 </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td> M2010-CR </td><td></td></tr><tr><td> 4 % 오스뮴의 Tetroxide </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td> 19,140 </td><td></td></tr><tr><td> 안티 SOD3 항체 </td><td> Abcam </td><td> Ab21974 </td><td></td></tr><tr><td> 염소 안티 - 토끼 알렉사 형석 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11070 </td><td></td></tr><tr><td> Spurr의 삽입 수지 </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td> 14,300 </td><td></td></tr></tbody></table>

원격 높은 처리량 phenotyping에 마우스 눈 핵의 제거

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

마우스 눈은 인간의 안과 질환의 병진 연구의 중요한 유전 모델입니다. 이러한 황반 변성, photoreceptor 변성, 백내장, 녹내장, retinoblastoma, 그리고 당뇨병 성 망막증과 같은 인간에 실명을 야기하는 안구 질환을 치료는 1-5 대부분의 유전자 변형과 녹아웃 마우스가 아닌 안과 질환을 연구하기 위해 실험실에 의해 생성되었습니다. 유전자 변형 마우스에 recapitulated하지만, 한 장기 시스템 사이의 유전 절약은 동일한 유전자의 많은도 안구 개발과 질병에 역할을 할 수 있습니다 제안합니다. 따라서,이 마우스는 눈에 새로운 유전자형 - 표현형의 상관 관계를 발견하기위한 중요한 자원을 나타냅니다. 이 마우스는 전 세계에 흩어져 있기 때문에, 취득, 유지 관리 및 효율적 비용 효율적인 방법으로 표현형을하기가 어렵습니다. 따라서, 대부분의 높은 처리량 안과 phenotyping 화면은 라이브 쥐에 눈을 검토하기 위해 안과 전문 현장에서 필요로 몇 가지 위치로 제한됩니다. 6-9는 우리 연구실에서 개발 한 대체 접근 방식은 유전자 변형 마우스 눈 크고 작은 규모의 설문 조사에서 사용할 수있는 원격 조직 - 취득하는 방법입니다. 비디오 기반의 수술 기술 이전, 조직 고정 및 배송을위한 표준화 된 절차는 실험실 돌연변이 동물로부터 전체 눈을 수집하고 분자 및 형태학 phenotyping에 보내 할 수 있습니다. 이 비디오 문서에서는, 우리는 원격 phenotyping 분석을 위해 떼어 낸 및 재관류 모두 고정 마우스 눈을 명백히하다하고 전송하는 기술을 제시한다.

분해 기술은 높은 처리량 화면에서 phenotyping을 수행 할 조직 고정에 대한 마우스 눈의 핵의 제거를 보여줍니다.

원격 높은 처리량 Phenotyping에 마우스 눈 핵의 제거

마우스의 눈은 인간 안과 질환의 중개 연구를 위한 중요한 유전적 모델입니다. 황반변성과 같은 인간의 실명 질환은...

이 영상에서는 마우스의 눈과 안구 적출, 즉 안와에서 안구를 제거하는 과정을 보여드립니다. 안구는 아래 눈꺼풀 가장자리에 의해 경계가 지어집니다. 이곳이 내측 또는 비측 안각입니다.뒤쪽은 외안각입니다. 위쪽은 상안검연입니다. 여기 수술 검체가 있습니다.바늘이 투명한 각막을 가리키고 있습니다. 홍채 너머로 수정자가 약간 튀어나온 것을 볼 수 있습니다. 갈색으로 보이는 이곳이 홍채이며, 수정자를 덮고 있습니다.가장 중요한 수술적 지표는 이 흰색 선, 즉 각막연이며, 이 바로 뒤쪽에 천자창을 만들게 됩니다. 안구의 뒷부분은 각막연 뒤에 위치하며, 현재 근육 삽입 부위를 가리키고 있습니다. 여기서 안구에 밀착되어 있는 근육과, 안와를 채우고 있으며 눈물샘을 포함하는 결합 조직을 확인할 수 있습니다.마지막으로, 이것은 둔성 박리를 통해 얻은 시신경의 흰색 긴 띠 형태입니다. 끝을 날카롭게 가공한 곡선형 드레싱 포셉을 사용하여 눈꺼풀을 벌리기 시작합니다. 이렇게 하면 안구가 외부로 돌출되어 분리되는 경향이 있습니다.포셉을 조심스럽게 사용하여 안와 내부의 안구 뒤쪽으로 진입한 뒤, 안구를 압박하지 않도록 주의하며 뒤쪽에서 부드럽게 압축하고 앞으로 잡아당깁니다. 이때 안구가 아닌 결합 조직을 잡아야 합니다. 안구를 옆으로 돌리면 흰색의 시신경과 함께 안와 조직을 확인할 수 있습니다.이는 다시 한번 보여드리기 위한 두 번째 해부 과정입니다. 내안각 부위로 진입하여 핀셋을 안구 뒤쪽으로 밀어 넣은 다음, 결합 조직을 잡아 안구 자체를 누르지 않으면서 앞으로 끌어당깁니다. 다시 보시면 길고 흰 시신경 형태의 결합 조직을 확인하실 수 있습니다. 천자상을 만들기 위해서는 근육 부착부를 통해 안구를 잡고, 안구를 고정하기 위해 잡고 있는 부위 바로 옆의 각막연 뒤쪽으로 바늘을 삽입하십시오.이렇게 하면 고정액이 안구 내부로 들어갈 수 있습니다. 안구를 잡고 있는 지점에서 멀리 떨어진 곳에 천공을 만들면 안구가 매우 불안정해지며, 안구를 압박하거나 과도한 압력을 가하지 않으면서 상처를 충분한 길이로 만들기 어려워집니다. 또한 안구 바로 뒤의 모든 결합 조직을 잡을 수도 있습니다.일부 고정제는 천자 상처를 낼 필요가 없습니다. 일반적으로, 안구가 완전히 잠길 수 있도록 최소 3 cc의 고정제가 들어 있는 5 cc 신틸레이션 바이알에 안구를 넣습니다. 관류 고정된 동물의 경우, 정밀한 박리가 필요합니다.곡선형 calibri 포셉과 곡선형 wescott 가위를 사용합니다. calibri 포셉으로 하안검을 잡습니다. 안와골을 따라 가위를 삽입하여 결합 조직을 절개하기 시작합니다.안구에서 멀어지는 곡선을 따라 절개하며 크기 조절 시 주의합니다. 한쪽 내안각에서 반대쪽 내안각까지 하안검 가장자리를 따라 안구의 어느 부위든 가능합니다. 어느 정도 진행되면 대부분의 결합 조직이 제거되며, 가위를 안구 뒤쪽으로 밀어 넣어 안구를 당겨 분리할 수 있습니다.가위의 끝을 안와 내로 삽입하되, 안구가 아닌 안와골 쪽으로 밀어 넣어 결합 조직을 잘라내는 또 다른 예시입니다. 이렇게 하면 바구니 속의 농구공과 같은 상태인 안구가 자유로워지기 시작합니다. 포셉을 사용하여 눈꺼풀을 뒤로 젖히고, 안구 주변을 짧고 부드럽게 절개하십시오.여기서는 Collibra를 사용하여 결합 조직이나 근육 삽입부를 잡고, 안구를 안와 결합 조직으로부터 완전히 절제합니다. 안구가 적절히 고정된 후, 운반이 필요한 경우에는 보관 바이알 주변을 파라필름으로 감쌉니다.포장은 소속 대학 및 정부 규정을 준수해야 합니다. 일반적으로 이러한 샘플은 액체 누출을 방지하기 위해 솜을 넣은 용기에 담으며, 이 용기는 매우 단단히 밀봉해야 합니다. 그 후, 이 운송 용기를 에어캡 봉투에 넣습니다.이를 관련 문서와 함께 액체 실험실 운송 팩에 넣습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 프로토콜은 explant의 electroporation을 통해 마우스 망막 생활 CIS - 규제 요소의 활동 (즉, 확장기 / 발기인)를 수치 간단하고 저렴한 방법을 설명합니다. DNA의 준비, 망막 절개, electroporation, 망막 explant의 문화, 포스트 고정 분석과 부량이 설명되어 있습니다.

의 활동을 Quantifying CIS</emExplant Electroporation하여 마우스 망막에서> - 규제 요소

출처: Jagodzinska, J., et. al., Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo. J. Vis. 특급. (2017) &lt;br /&gt; 이 비디오에서는 SD-OCT(spectral-domain optical coherence tomography)를 사용하여 망막층을 이미지화하고 시신경병증이 있는 유전자 변형 마우스 모델의 구조적 변화를 평가하는 방법을 보여줍니다.

광간섭 단층촬영(Optical Coherence Tomography)을 사용한 마우스 망막의 In vivo 이미징

또한 안구 적출술라는 눈의 제거는, 그것은 돌이킬 수없는 부분 (단안) 또는 전체 (쌍안) 시력 손실을 유발하기 때문에 포유류의 시각 시스템에 따라 시각, 크로스 모달, 발달 가소성의 측면을 연구하기위한 유용한 전략을 제공합니다. 여기에서 우리는 생체 안구 적출술에서 수행 할 수있는 높은 재현성 및 간단한 방법을 설명합니다.

높은 재현성과 단순 명료 한 방법이 수행하는 생체 안구 탈핵

이 기사에서는 R26R-Confetti 마우스를 사용하여 다중 색상 계통 추적 실험을 설계하고 수행하는 원칙을 설명합니다. 당사는 다른 관심 조직에 대해 변형될 수 있는 각막 상피 세포를 추적하기 위한 특정 프로토콜을 제공합니다.

멀티 컬러 형광 기자 마우스를 사용하여 각막 세포의 리니지 추적하는 방법

여기를 사용 하 여 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (HR-SD-10 월) subretinal 공간으로 유전자 치료 대리인의 납품을 지원, 그 영역 범위를 평가 하 고 포토 리셉터 활력을 특성화 새로운 접근 방식을 설명 합니다.

초고 해상도 마우스 광학 일관성 단층 촬영 망막 유전자 치료 연구에서 안 구내 주사를 돕기 위해

여기에 제시 라이브 마우스 안구 표면 이미징을위한 다광 현미경 플랫폼입니다. 형광 형질 전환 마우스는 안구 표면 내의 세포 핵, 세포 막, 신경 섬유 및 모세 혈관의 시각화를 가능하게합니다. 콜라주 구조에서 파생된 비선형 제2 고조파 생성 신호는 기질 아키텍처에 대한 라벨없는 이미징을 제공합니다.

마우스 각막과 결막의 라이브 이미징을 위한 맞춤형 다광현미경 플랫폼

생체 내 이미징은 건강 및 질병 생물학 연구를위한 강력한 도구입니다. 이 프로토콜은 표준 2 광자 현미경으로 마우스 망막의 경공 영상을 설명합니다. 또한 망막의 여러 세포 코호트를 형광으로 표지하는 다양한 생체 내 이미징 방법을 보여줍니다.

경동공 이광자 마우스 망막의 생체 내 이미징

원래 2016년1년페르난데스-고디노(Fernandez-Godino) 등에서 보고한 이 프로토콜은 트랜스웰 플레이트에서 1주일 이내에 기능적이고 편광된 RPE 단층층을 형성하는 마우스 RPE 세포를 효율적으로 분리하고 배양하는 방법을 설명합니다. 절차는 약 3 시간이 걸립니다.

1차 마우스 망막 색소 상피 세포의 효율적인 해부 및 배양

이 논문은 설치류의 안구 미세 해부에 대한 프로토콜을 제시합니다. 이 과정에는 니티팅 멤브레인(즉, 세 번째 눈꺼풀)과 함께 안구의 적출술이 포함됩니다. 그런 다음 후방 안구 컵과 전방 안구 컵을 분리합니다.

설치류 눈의 미세 해부

망막은 층류 구조 전반에 걸쳐 복잡한 공간 조직을 나타냅니다. 현대의 공간 전사체학 및 염기서열분석 기술에는 20μm 두께&lt; 조직 절편이 필요하기 때문에 망막 연구 적용이 제한됩니다. 이 신선 냉동 냉동 절편 방법은 평면 공간 관계를 유지하면서 마우스 망막의 얇은 표면 부분을 생성하여 층판 전반에 걸쳐 포괄적인 분자 매핑을 가능하게 합니다.

En 얼굴 High-dimensional Spatial Molecular Analysis (고차원 공간 분자 분석을 위한 마우스 망막의 동결 절편)

본 논문은 회전 원반 공초점 현미경을 사용하여 망막에서 미세아교세포 운동성과 시냅스 후 눈점과의 접촉을 시각화하고 정량화하는 방법을 시연합니다.

병든 쥐 망막에서 미세아교세포 역학과 시냅스와의 상호작용에 대한 실시간 영상 및 특성 분석

학습하세요 마우스 눈 핵적출 기법으로 고처리량 표현형 분석을 위한 조직 고정을 수행하는 방법을. 해부학적 랜드마크를 식별하고 정확한 수술 절차를 익혀 연구 결과를 향상시키세요.

원격 높은 처리량 Phenotyping에 마우스 눈 핵의 제거

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