0 조회수 • 3:00 분 • June 17th, 2025
화학적으로 고정된 마우스 뇌 조각을 멀티웰 플레이트에 넣습니다.
조직에는 지질이 풍부한 수초로 둘러싸인 축삭이 포함되어 있습니다. 세포체에는 거친 소포체와 리보솜으로 구성된 Nissl 소체가 포함되어 있습니다.
형광 Nissl 염색제를 포함하는 투과화 용액에서 배양합니다. 용액은 세포막을 투과시켜 염색이 Nissl 체 내의 리보솜 RNA에 결합하고 세포체에 라벨을 붙일 수 있도록 합니다.
일관성 있는 반-스토크스 라만 분광법(CARS) 이미징 시스템을 사용하여 공초점 현미경 아래에 조직을 놓습니다.
지질이풍부한 수초의 분자 결합을 자극하도록 조정된 조직에 직접 동기화된 펌프 및 Stokes 레이저 빔
.프로브 레이저 빔을 도입하여 여기된 결합과 상호 작용하고 미엘린에 특이적인 항-스토크스 신호를 생성합니다.
광검출기는 신호를 캡처하여 미엘린 특이적 이미지를 생성합니다.
공초점 이미징을 사용하여 표지된 Nissl 바디에서 신호를 캡처합니다.
뉴런 구조를 시각화하기 위해 공초점 및 CARS 이미지를 오버레이합니다.
원고에 설명된 대로 조직을 준비한 후, Nissl 및 항체 배지를 위해 자유 부유 절편을 염색하여 세포체를 시각화합니다. 그런 다음 표준 실험실 셰이커에서 실온에서 30분 동안 절편을 배양합니다. 샘플을 현미경으로 가져오기 전에 CARS 레이저를 켜고 최소 1시간 동안 예열하십시오. 그런 다음 펌프와 Stokes 레이저 빔을 공간적으로 겹쳐서 CARS 레이저를 정렬하고 두 레이저 빔 사이의 지연을 조정합니다.
Kohler는 전방 CARS 이미징을 위한 콘덴서 광학 장치와 현미경의 다이어프램입니다. 그런 다음 외부 잠망경을 조정하여 공간적으로 겹치는 두 개의 레이저를 현미경의 스캐닝 헤드 미러 중앙에 배치합니다. 최상의 전방 CARS 비스캔 감지를 위해 콘덴서가 코러링되어 있는지 확인하십시오.
면역형광 공초점 이미징 및 CARS 이미징의 경우 형광 이미징을 위한 가시광선 레이저가 장착된 공초점 현미경을 통합하여 CARS 레이저를 전방 및 epi-CARS 비디스캔 검출기에 장착합니다. 이제 조직이 건조되지 않도록 커버슬립 바닥과 PBS가 있는 배양 접시에 절편을 놓습니다. 또한 유리 추를 사용하여 티슈를 커버슬립 근처에 유지하십시오.
그래픽 사용자 인터페이스 사용. CARS 및 Nissl 형광 공초점 이미징을 위한 이미지 획득 매개변수를 설정합니다. 샘플을 현미경 스테이지에 놓습니다. 샘플에 초점을 맞추고 이미지를 캡처합니다.