Name: 파킨슨병의 일방적-6-OHDA lesioned 마우스 모델의 개발 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: 학습하세요 쥐의 일측성 6-OHDA 병변 수술을 통해 파킨슨병 모델을 만드는 방법을. 이 프로토콜은 95% 이상의 도파민 고갈과 낮은 사망률을 보이며 행동 실험에 적합한 동물 모델을 제공합니다.

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이 작품은 외교 계열과 국제 무역 (캐나다 정부), 토론토 Connaught 펀드, 혁신, NSERC, Krembil 재단과 치료 파킨슨병 Trust와 캐나다 재단의 대학에 의해 지원되었다.

<ol><li>Costall, B., Naylor, R. J., Pycock, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-specific+supersensitivity+of+striatal+dopamine+receptors+after+6-hydroxydopamine+lesion+of+the+nigrostriatal+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Non-specific supersensitivity of striatal dopamine receptors after 6-hydroxydopamine lesion of the nigrostriatal pathway.</a> Eur. J. Pharmacol. 35, 276-283 (1976).</li>
<li>Maneuf, Y. P., Mitchell, I. J., Crossman, A. R., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+role+of+enkephalin+cotransmission+in+the+GABAergic+striatal+efferents+to+the+globus+pallidus%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">On the role of enkephalin cotransmission in the GABAergic striatal efferents to the globus pallidus.</a> Exp. Neurol. 125, 65-71 (1994).</li>
<li>Robertson, G. S., Robertson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+L-dopa-induced+rotational+behavior+is+dependent+on+both+striatal+and+nigral+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Evidence that L-dopa-induced rotational behavior is dependent on both striatal and nigral mechanisms.</a> J. Neurosci. 9, 3326-3331 (1989).</li>
<li>Ungerstedt, U., Arbuthnott, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+recording+of+rotational+behavior+in+rats+after+6-hydroxy-dopamine+lesions+of+the+nigrostriatal+dopamine+system%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative recording of rotational behavior in rats after 6-hydroxy-dopamine lesions of the nigrostriatal dopamine system.</a> Brain Res. 24, 485-493 (1970).</li>
<li>Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approaches+to+the+symptomatic+treatment+of+parkinsonian+syndromes%3A+alternatives+and+adjuncts+to+dopamine-replacement%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Novel approaches to the symptomatic treatment of parkinsonian syndromes: alternatives and adjuncts to dopamine-replacement.</a> Curr. Opin. Neurol. 10, 340-345 (1997).</li>
<li>Besson, M. J., Graybiel, A. M., Nastuk, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B3H%5DSCH+23390+binding+to+D1+dopamine+receptors+in+the+basal+ganglia+of+the+cat+and+primate%3A+delineation+of+striosomal+compartments+and+pallidal+and+nigral+subdivisions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">[3H]SCH 23390 binding to D1 dopamine receptors in the basal ganglia of the cat and primate: delineation of striosomal compartments and pallidal and nigral subdivisions.</a> Neuroscience. 26, 101-119 (1988).</li>
<li>Gerfen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D1+and+D2+dopamine+receptor-regulated+gene+expression+of+striatonigral+and+striatopallidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">D1 and D2 dopamine receptor-regulated gene expression of striatonigral and striatopallidal neurons.</a> Science. 250, 1429-1432 (1990).</li>
<li>Schiffmann, S. N., Jacobs, O., Vanderhaeghen, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+restricted+adenosine+A2+receptor+%28RDC8%29+is+expressed+by+enkephalin+but+not+by+substance+P+neurons%3A+an+in+situ+hybridization+histochemistry+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Striatal restricted adenosine A2 receptor (RDC8) is expressed by enkephalin but not by substance P neurons: an in situ hybridization histochemistry study.</a> J. Neurochem. 57, 1062-1067 (1991).</li>
<li>Hutchison, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+neuronal+activity+in+segments+of+globus+pallidus+in+Parkinson%27s+disease+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Differential neuronal activity in segments of globus pallidus in Parkinson's disease patients.</a> Neuroreport. 5, 1533-1537 (1994).</li>
<li>Pan, H. S., Penney, J. B., Young, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gamma-aminobutyric+acid+and+benzodiazepine+receptor+changes+induced+by+unilateral+6-hydroxydopamine+lesions+of+the+medial+forebrain+bundle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Gamma-aminobutyric acid and benzodiazepine receptor changes induced by unilateral 6-hydroxydopamine lesions of the medial forebrain bundle.</a> J. Neurochem. 45, 1396-1404 (1985).</li>
<li>Pan, H. S., Walters, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilateral+lesion+of+the+nigrostriatal+pathway+decreases+the+firing+rate+and+alters+the+firing+pattern+of+globus+pallidus+neurons+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Unilateral lesion of the nigrostriatal pathway decreases the firing rate and alters the firing pattern of globus pallidus neurons in the rat.</a> Synapse. 2, 650-656 (1988).</li>
<li>Gong, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+expression+atlas+of+the+central+nervous+system+based+on+bacterial+artificial+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A gene expression atlas of the central nervous system based on bacterial artificial chromosomes.</a> Nature. 425, 917-925 (2003).</li>
<li>Kreitzer, A. C., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocannabinoid-mediated+rescue+of+striatal+LTD+and+motor+deficits+in+Parkinson%27s+disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Endocannabinoid-mediated rescue of striatal LTD and motor deficits in Parkinson's disease models.</a> Nature. 445, 643-647 (2007).</li>
<li>Shen, W., Flajolet, M., Greengard, P., Surmeier, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dichotomous+dopaminergic+control+of+striatal+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Dichotomous dopaminergic control of striatal synaptic plasticity.</a> Science. 321, 848-851 (2008).</li>
<li>Lundblad, M., Picconi, B., Lindgren, H., Cenci, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+L-DOPA-induced+dyskinesia+in+6-hydroxydopamine+lesioned+mice%3A+relation+to+motor+and+cellular+parameters+of+nigrostriatal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">A model of L-DOPA-induced dyskinesia in 6-hydroxydopamine lesioned mice: relation to motor and cellular parameters of nigrostriatal function.</a> Neurobiol. Dis. 16, 110-123 (2004).</li>
<li>Grealish, S., Mattsson, B., Draxler, P., Bjorklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+behavioural+and+neurodegenerative+changes+induced+by+intranigral+6-hydroxydopamine+lesions+in+a+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Characterisation of behavioural and neurodegenerative changes induced by intranigral 6-hydroxydopamine lesions in a mouse model of Parkinson's disease.</a> Eur. J. Neurosci. 31, 2266-2278 (2010).</li>
<li>Dauer, W., Przedborski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+mechanisms+and+models%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: mechanisms and models.</a> Neuron. 39, 889-909 (2003).</li>
<li>Francardo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+the+lesion+procedure+on+the+profiles+of+motor+impairment+and+molecular+responsiveness+to+L-DOPA+in+the+6-hydroxydopamine+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Impact of the lesion procedure on the profiles of motor impairment and molecular responsiveness to L-DOPA in the 6-hydroxydopamine mouse model of Parkinson's disease.</a> Neurobiol. Dis. 42, 327-340 (2011).</li>
<li>Jakowec, M. W., Petzinger, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1-methyl-4-phenyl-1%2C2%2C3%2C6-tetrahydropyridine-lesioned+model+of+parkinson%27s+disease%2C+with+emphasis+on+mice+and+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Med%22%5BJournal%5D)">1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-lesioned model of parkinson's disease, with emphasis on mice and nonhuman primates.</a> Comp. Med. 54, 497-513 (2004).</li>
<li>Visanji, N. P., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MPTP-Induced+Models+of+Parkinson%27s+Disease+in+Mice+and+Non-Human+Primates%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">MPTP-Induced Models of Parkinson's Disease in Mice and Non-Human Primates.</a> Curr. Protoc. Pharmacol. Chapter 5, 42-42 (2005).</li>
<li>Sedelis, M., Schwarting, R. K., Huston, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+of+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping of the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Behav. Brain Res. 125, 109-125 (2001).</li>
<li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke%2C+cortical+ablation%2C+parkinsonism+and+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li>
<li>Paul, M. L., Currie, R. W., Robertson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priming+of+a+D1+dopamine+receptor+behavioural+response+is+dissociated+from+striatal+immediate-early+gene+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Priming of a D1 dopamine receptor behavioural response is dissociated from striatal immediate-early gene activity.</a> Neuroscience. 66, 347-359 (1995).</li>
<li>Breese, G. R., Traylor, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+6-hydroxydopamine+on+brain+norepinephrine+and+dopamine+evidence+for+selective+degeneration+of+catecholamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Effect of 6-hydroxydopamine on brain norepinephrine and dopamine evidence for selective degeneration of catecholamine neurons.</a> J. Pharmacol Exp. Ther. 174, 413-420 (1970).</li>
<li>Breese, G. R., Chase, T. N., Kopin, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+tyramine-3H+and+octopamine-3H+by+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Metabolism of tyramine-3H and octopamine-3H by rat brain.</a> Biochem. Pharmacol. 18, 863-869 (1969).</li>
<li>Frankin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFrankin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , (2008).</li>
<li>Cornell-Bell, A. H., Finkbeiner, S. M., Cooper, M. S., Smith, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+induces+calcium+waves+in+cultured+astrocytes%3A+long-range+glial+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Glutamate induces calcium waves in cultured astrocytes: long-range glial signaling.</a> Science. 247, 470-473 (1990).</li>
<li>Iancu, R., Mohapel, P., Brundin, P., Paul, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+characterization+of+a+unilateral+6-OHDA-lesion+model+of+Parkinson%27s+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral characterization of a unilateral 6-OHDA-lesion model of Parkinson's disease in mice.</a> Behav. Brain Res. 162, 1-10 (2005).</li>
<li>Tan, Y., Williams, E. A., Lancia, A. J., Zahm, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+altered+expression+of+tyrosine+hydroxylase+and+calbindin-D+28kD+immunoreactivities+and+viability+of+neurons+in+the+ventral+tegmental+area+of+Tsai+following+injections+of+6-hydroxydopamine+in+the+medial+forebrain+bundle+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">On the altered expression of tyrosine hydroxylase and calbindin-D 28kD immunoreactivities and viability of neurons in the ventral tegmental area of Tsai following injections of 6-hydroxydopamine in the medial forebrain bundle in the rat.</a> Brain Res. 869, 56-68 (2000).</li>
<li>Thiele, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+model+of+L-DOPA-induced+dyskinesia+in+two+different+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Generation of a model of L-DOPA-induced dyskinesia in two different mouse strains.</a> J. Neurosci. Methods. 197, 193-208 (2011).</li>
<li>Henry, B., Crossman, A. R., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+rodent+model+in+which+to+investigate+the+molecular+and+cellular+mechanisms+underlying+the+pathophysiology+of+L-dopa-induced+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Characterization of a rodent model in which to investigate the molecular and cellular mechanisms underlying the pathophysiology of L-dopa-induced dyskinesia.</a> Adv. Neurol. 78, 53-61 (1998).</li>
</ol>

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이 프로토콜은 높은 병변 성공률과 낮은 사망률로, 극단적으로 재현할 수있다 파킨슨병의 안정 일방적 6-OHDA-lesioned 마우스 모델의 생성을위한 방법을 설명합니다. 6-OHDA 병변 수술의 성공은 쉽게 lesioned striatum 27&gt; 95 %의 도파민 고갈 지표&gt; 70 % ipsiversive의 회전과 함께 자발적인 회전 동작의 측정에 의해 추정 할 수 있습니다. 그것이 striatal 도파민 레벨 28 직접 측정을 제공으로 striatal 도파민 수준의 부량은 substantia nigra 갈 거예요 compacta의 번호 TH-양성 세포의 quantificiation에 비해 striatal 도파민 고갈의 범위에 가장 정확한 측정이다. 이 프로토콜은 파킨슨병의 1,4의 잘 특성화 일방적 6-OHDA-lesioned 쥐 모델의 주입의 사이트 (MFB)과 병변의 개발 기간 (21 일) 재현 것을 감안할 때, 그것은 일을 추정하실 수 있습니다이 마...

<table border="1" &gt;<tbody&gt;<tr &gt;<td<strong시약의&gt; 이름</strong</td&gt;<td<strong&gt; 회사 소개</strong</td&gt;<td<strong&gt; 카탈로그 번호</strong</td&gt;<td<strong&gt; 댓글 (옵션)</strong</td&gt;</tr&gt;<tr &gt;<td&gt; desipramine HCL</td&gt;<td&gt; 시그마 - 올드 리치, 옥빌, ON, 캐나다</td&gt;<td&gt; D125</td&gt;<td&gt; 25mg/kg</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; pargyline HCL</td&gt;<td&gt; 시그마 - 올드 리치, 옥빌, ON, 캐나다</td&gt;<td&gt; P8013</td&gt;<td&gt; 5mg/kg</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 6-OHDA HBR</td&gt;<td&gt; 시그마 - 올드 리치, 옥빌, ON, 캐나다</td&gt;<td&gt; H116</td&gt;<td&gt; 3mg / 마우스</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; stereotaxic 프레임</td&gt;<td&gt; Kopf 인 스트 루먼트, Tujunga, CA, 미국</td&gt;<td&gt; 모델 900</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 마우스 귀 컵</td&gt;<td&gt; Kopf 인 스트 루먼트, Tujunga, CA, 미국</td&gt;<td&gt; 모델 921 관골의 귀 컵</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 마우스 앞니 바</td&gt;<td&gt; Kopf 인 스트 루먼트, Tujunga, CA, 미국</td&gt;<td&gt; 모델 923B</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 마우스 마취 마스크</td&gt;<td&gt; Kopf 인 스트 루먼트, Tujunga, CA, 미국</td&gt;<td&gt; 모델 923B</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 마중물 키트 (250ml 주사기를 포함)</td&gt;<td&gt; 해밀턴 회사, 리노, 네바다, 미국</td&gt;<td&gt; PRMKIT 81,120</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; RN 압축 피팅 키트 (1 ㎜)</td&gt;<td&gt; 해밀턴 회사, 리노, 네바다, 미국</td&gt;<td&gt; 55750-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdRN 압축 피팅 킷에서&gt; 픽 튜빙<
 (1/16<sup&gt; 일</sup&gt; 인치)</td&gt;<td&gt; 해밀턴 회사, 리노, 네바다, 미국</td&gt;<td&gt; 55751-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 듀얼 작은 허브 RN 커플러</td&gt;<td&gt; 해밀턴 회사, 리노, 네바다, 미국</td&gt;<td&gt; 55752-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td로&gt; luer 작은 허브 RN 어댑터</td&gt;<td&gt; 해밀턴 회사, 리노, 네바다, 미국</td&gt;<td&gt; 55753-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 1ml 초 주사기 모델 7001KH</td&gt;<td&gt; 해밀턴 회사, 리노, 네바다, 미국</td&gt;<td&gt; 80,100</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; * 6의 33G 이동식 바늘 (RN) 갑. . 45 &lt;° 베벨과 정의 1 인치</td&gt;<td&gt; 해밀턴 회사, 리노, 네바다, 미국</td&gt;<td&gt; 7803-05</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 가위</td&gt;<td&gt; 파인 과학 도구, 밴쿠버, 브리티시 컬럼비아, 캐나다.</td&gt;<td&gt; 14084-08</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 메스</td&gt;<td&gt; 파인 과학 도구, 밴쿠버, BC, 캐나다</td&gt;<td&gt; 10003-12</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 메스 블레이드</td&gt;<td&gt; 파인 과학 도구, 밴쿠버, BC, 캐나다</td&gt;<td&gt; 10035-20</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Forcep</td&gt;<td&gt; 파인 과학 도구, 밴쿠버, BC, 캐나다</td&gt;<td&gt; 11608-15</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Hemostats</td&gt;<td&gt; 파인 과학 도구, 밴쿠버, 브리티시 컬럼비아, 캐나다.</td&gt;<td&gt; 13004-14</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isoflurane</td&gt;<td&gt; 원장</td&gt;<td&gt; 02241315</td&gt;<td&gt; 2~3%</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Suters (Vicryl 4.0)</td&gt;<td&gt; Syneture</td&gt;<td&gt; SS-683</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Steriliser</td&gt;<td&gt; 파인 과학 도구, 밴쿠버, BC, 캐나다</td&gt;<td&gt; 18000-45</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 주입 펌프</td&gt;<td&gt; 하버드 장치</td&gt;<td&gt; 박사 2,000분의 22</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 바늘 (27G)</td&gt;<td&gt; Becton 디킨슨</td&gt;<td&gt; 305,109</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 바늘 (25G)</td&gt;<td&gt; Becton 디킨슨</td&gt;<td&gt; 305,127</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 주사기 (1ml)</td&gt;<td&gt; BD 주사기</td&gt;<td&gt; 309,692</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Anaesthesia 트롤리</td&gt;<td&gt; 레이 의학</td&gt;<td&gt; M2000</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Baytril</td&gt;<td&gt; CDMV, 세인트 hyacinthe, QC</td&gt;<td&gt; 102,207</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Lidocaine</td&gt;<td&gt; CDMV, 세인트 hyacinthe, QC</td&gt;<td&gt; 3914</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Betadine 용액</td&gt;<td&gt; CDMV, 세인트 hyacinthe, QC</td&gt;<td&gt; 19,955</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

파킨슨병의 일방적-6-ohda lesioned 마우스 모델의 개발

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

그것이 recapitulates 기저 신경 회로의 변화와 약리학가 관찰한 이후 일방적으로 lesioned 6 hyroxydopamine (6-OHDA) lesioned 파킨슨병의 쥐 모델 (PD)는 parkinsonian 증상의 기초 메커니즘에 대한 우리의 이해를 발전에 귀중한 것으로 판명되었습니다 parkinsonian 환자 1-4. 다만, 기저 신경의 주요 입력 영역입니다 striatum, 내의 출력 경로의 cortico-striatal 시냅스에서 발생하는 정확한 세포와 분자 변화는 애매 남아 있으며 이것은 parkinsonian 증상을 밑에있는 병적인 이상이 3 발생할 사이트로 여겨지고 5. 경찰서에서 nigro-striatal 경로의 기저 신경 회로를 다음과 변성 변화의 기본 메커니즘을 이해하는 것은 크게 촉진에 의한 지나친 표현 녹색 형광 단백질은 세균 인공 염색체의 개발 (BAC) 생쥐하여 고급되었습니다그들은 고립에서 공부 수 있도록 8, :; : 두 striatal 출력 경로 (eGFP-D2와 eGFP-A2a 간접 경로 eGFP-D1 직접 경로)에 대한 구체적인 RS. 예를 들어, 최근의 연구 parkinsonian 마우스 9,10의 시냅스 소성의 병리 학적 변화가있다는 것을 제안했습니다. 그러나 이러한 연구는 청소년 생쥐와 parkinsonism의 급성 모델을 활용. 그것은 안정적인 6-OHDA의 병변과 성인 쥐에 설명된 변경 사항은 또한 이러한 모델에서 발생하는지 불분명하다. 다른 그룹은 중간 forebrain 번들 (MFB)을 lesioning하여 경찰의 안정 일방적-lesioned 6-OHDA 성인 마우스 모델을 생성하기 위해 시도했습니다 .. 안타깝게도,이 연구에서 사망률이 겨우 14 %가 21 수술을 이겨낸과 함께 매우 높은였다 일 이상 11. 더 많은 최근 연구에서 낮은 사망률 모두 함께 내부 nigral 병변을 올렸습니다 dopaminergic 뉴런의&gt; 80 % 감소, L-DOPA 유도 운동 이상증 11,12,13,14 중 단 표현이 변수였다이러한 연구 인치 경찰의 또 다른 잘 확립 마우스 모델은 MPTP-lesioned 마우스 15입니다. 이 모델은 잠재 neuroprotective 요원 16 평가에서 유용하게 입증되었습니다하는 동안, 그것은이 모델은 종종 모터 적자를 유도하는 데 실패로 경찰의 메카니즘 밑에 증상을 이해하는 데 덜 적합하고, 병변 17 정도, 18의 넓은 다양성을 보여줍니다 . 여기에서 우리는 지속&gt; 95 % striatal 도파민의 손실 (등 HPLC로 측정)뿐만 아니라 행동을 생산의 원인이 MFB,에 6-OHDA를 직접 관리하여 경찰의 안정 일방적 6-OHDA-lesioned 마우스 모델을 개발 불균형은 경찰의 잘 특성화 일방적 6-OHDA-lesioned 쥐 모델에서 관찰했다. 경찰이 새롭게 개발한 마우스 모델 parkinsonian 증상 세대의 기본 메커니즘을 이해하는 데 유용한 도구를 새삼 느끼게 될 것이다.

생쥐의 중간 forebrain 번들의 일방적 6-OHDA의 병변을 수행하기위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 이 방법은 striatal 도파민과 90.63의&gt; 95 %의 손실을 보여주는 살아남은 동물의 89 %를 낮은 사망률 (13.3 %) ± -4.02 % 병변의 측면을 향해 ipsiversive 회전 편견을 가지고 있습니다.

파킨슨병의 일방적-6-OHDA lesioned 마우스 모델의 개발

일측성 6-하이드록시도파민(6-OHDA) 손상 쥐 모델은 파킨슨병(PD) 연구를 진전시키는 데 매우 유용한 것으로 입증되었으며...

이 절차의 전반적인 목적은 파킨슨병 마우스 모델을 생성하는 것입니다. 이를 위해 먼저 수술에 필요한 약물을 준비합니다. 다음 단계로 수술 장치를 설정한 후, 적절한 수술 후 관리와 함께 일측성 6-hydroxy dopamine 병변 수술을 수행합니다.6마리의 6-hydroxy dopamine으로 병변을 유도한 동물들을 행동 실험에 사용할 수 있습니다. 결과적으로, 외측 단측의 내측 전뇌 다발에서 95% 이상의 도파민 고갈이 나타납니다. 이 절차에서 연구자가 가장 주의 깊게 살펴봐야 할 두 가지 핵심 사항 중 첫 번째는 동물의 생존을 보장하기 위한 적절한 수술 후 관리입니다.둘째로, 6-hydroxy dopamine의 주입을 위한 장비 준비 과정에 주의하여 신경독소가 완전히 전달되도록 합니다. 이 절차를 시작하려면, 고압 증기 멸균기로 수술 도구를 멸균하십시오. 다음으로, 모든 표면과 장비를 이소프로필 알코올로 세척하십시오.그런 다음 바닥에 종이 타월을 깐 마우스 회복용 케이지를 준비하여 수술 후 조치를 대비하십시오. 마취 트롤리를 설정하기 위해 케이지를 가열 램프 아래나 가열 패드 위에 놓으십시오. 산소 유입구가 연결되어 열려 있는지, 그리고 isof fluorine 저장조가 완전히 채워져 있는지 확인하십시오.그 후, 산소 유량을 1%로, 이소플루린을 2~4%로 설정합니다. 다음 단계는 주입 장치를 조립하는 것입니다. 피크 튜브의 한쪽 끝에 RN 금속 너트 하나를 끼우고, 이어서 피크 컵 페룰을 끼웁니다. 그다음 표준 PFA 페룰을 끼웁니다. 표준 PFA 페룰의 원뿔 부분이 피크 컵 페룰의 결합 부위에 맞게 들어가도록 페룰의 방향을 맞춥니다.그 다음, 결합된 피크 컵(peak cup)과 표준 PFA 페룰(ferral)을 듀얼 소형 허브 RN 커플러의 양 끝단 중 한 곳에 배치하고, 듀얼 소형 허브 RN 커플러의 반대쪽 끝에 있는 RN 금속 너트를 조입니다. 33 gauge 주사 바늘을 삽입합니다. RN 금속 너트 중 하나를 통해 바늘을 통과시킨 후 조입니다.33 gauge 바늘이 이중 소형 허브 RN 커플러와 180도 각도를 이루는지 확인하십시오. 그런 다음 peak 튜빙의 다른 쪽 끝에 RN 금속 너트를 끼우고 이어서 peak 컵 페룰을 끼웁니다. 그다음 정준 PFA 페룰을 두 번째 이중 소형 허브 RN 커플러의 더 깊은 홈에 끼우고 RN 금속 너트를 조여 연결을 고정하십시오.다음으로, 두 번째 소형 듀얼 RN 허브 커플러의 반대쪽 끝에 루어를 소형 허브 RN 어댑터에 삽입하고, 루어의 RN 금속 너트를 조여 연결을 고정합니다. 이제 주입 장치의 설치가 완료되었습니다. 또 다른 준비 단계는 주입 장치를 프라이밍하는 것입니다.먼저, 250 µL 및 1 µL Hamilton 시린지를 멸균수로 채웁니다. 이때 기포가 없는지 확인하십시오. 그 다음 250 µL 시린지를 루어 어댑터에 연결하고, 250 µL 시린지의 플런저를 눌러 튜브 반대편 끝에 있는 33 gauge 주사 바늘을 통해 물이 배출되도록 합니다.250 µL 시린지를 루어 어댑터에서 빼내면서 시스템을 통해 계속해서 물을 밀어내십시오. 루어 어댑터 끝에 작은 물방울이 맺혀 있도록 둔 상태에서, 1 µL 시린지의 플런저를 눌러 작은 물방울이 배출되게 합니다. 그다음 1 µL 시린지를 루어 어댑터에 조심스럽게 삽입하십시오.1 µL 주사기의 물 방울이 루어 어댑터의 물 방울과 연결되었는지 확인하십시오. 그다음 1 µL 주사기를 루어 어댑터에 완전히 삽입하고, 소형 듀얼 RN 허브 커플러 내부에 기포가 없는지 확인하십시오. 이제 관류 장치를 정위 고정틀에 고정한 후, 인퓨전 펌프 클램프를 사용하여 33 gauge 주사 바늘이 연결된 소형 듀얼 RN 허브 커플러를 정위 고정틀의 매니퓰레이터 암에 고정하십시오.그런 다음 1 µL 시린지를 관류 펌프에 고정합니다. 그 후, 수술 30분 전에 주입 펌프를 설정하여 0.1 µL/min의 주입 속도로 주입되도록 합니다. 동물의 무게를 측정하고 기록합니다.마우스에 2.5 mg/mL의 dopamine hydrochloride와 0.5 mg/mL의 parline hydrochloride 혼합액을 kg당 10 mL의 용량으로 복강 내 투여합니다. 그다음, 수술 중 동물의 체온을 유지하기 위해 이어 바(ear bar)와 절치 바(incisor bar) 아래에 따뜻한 가열 디스크를 배치하고, 고정틀의 이어 바와 절치 바에 맞게 동물을 적절한 높이로 유지합니다. dopamine hydrochloride와 parline hydrochloride 혼합액 투여 후 15분이 지나면 고정틀을 설치합니다.마우스를 폐쇄된 발작 챔버에 넣습니다. 이소플루레인(isoflurane) 흡입을 통해 동물을 마취합니다. 뒷다리 꼬집기에 반응이 없고 눈깜빡임 반사가 나타나지 않으면 동물이 충분히 마취된 것입니다.그런 다음 마우스의 머리 윗부분을 삭모합니다. 이제 마우스를 정위 고정기(stereotaxic frame)에 배치합니다. 절치 바를 입에 물리고 안면 마스크를 얼굴에 씌웁니다.그 후 이소플루란의 유량을 조절합니다. 솜을 사용하여 국소 마취제인 리도카인을 피부에 직접 도포합니다. 절치 바(incisor bar)와 이어 컵(ear cups)을 조절하여 두개골 상단을 수평으로 맞춥니다.그 다음 Betadine 용액으로 피부를 소독합니다. 이어서 이어 컵(ear cups)을 삽입합니다. 머리가 완전히 평평해지고 어느 방향으로도 움직이지 않을 때 이어 컵이 올바르게 삽입된 것입니다.그 후, 메스 날을 사용하여 머리의 정중선을 따라 절개하고 피부를 젖힙니다. 거즈 패드로 두개골 표면의 수분을 제거합니다. 1 µL 주사기의 플런저를 누른 다음, 33 gauge 주사 바늘을 15 mg/mL 농도의 1 mL 튜브에 넣습니다.알루미늄 호일로 덮인 6-hydroxy dopamine 용액. 33 gauge 주입 바늘을 6-hydroxy dopamine 용액에 담근 상태에서 플런저를 천천히 뒤로 당깁니다. 다음으로, 주입 바늘의 팁을 B bgma 쪽으로 이동시켜 6-hydroxy dopamine 용액을 소량 분사하여 작은 방울을 형성합니다.그런 다음 주입 바늘 팁을 천천히 내립니다. 비드가 bgma에 닿으면 바늘 전진을 멈추고 이 좌표를 기록합니다. 주입 바늘을 등쪽 방향으로 2mm 후퇴시킨 후, 람다(Lambda)를 향해 시상 봉합선을 따라 rostral coddle 방향으로 이동합니다.Lambda의 상단에 위치했을 때, 주사 바늘에서 소량의 six hydroxy dopamine 용액을 분사하여 작은 방울을 형성합니다. 그런 다음 바늘 끝을 lambda 방향으로 천천히 내립니다. 방울이 Lambda에 닿으면 바늘 전진을 멈추고 해당 좌표를 기록합니다.BMA와 Lambda의 내측-외측 및 등측-복측 좌표는 동일해야 합니다. 만약 동일하지 않다면, 그에 맞게 절치 바(incisor bar)를 조정하십시오. 전후 좌표와 내측-외측 좌표를 위한 이어 바(ear bar)의 경우, 바늘을 주입 좌표로 이동시키십시오.AP -1.2 mm, ML -1.1 mm의 상대적 좌표에서, 작은 방울을 형성하기 위해 주입 바늘로부터 소량의 용액을 분사합니다. 이 작은 방울을 두개골 위에 내려놓아 구멍을 뚫을 위치를 표시합니다. 그런 다음 바늘을 빼고, 25 gauge 바늘을 사용하여 두개골에 구멍을 뚫습니다.주입 바늘을 주입 좌표로 되돌린 후, 등-배측(dorsal ventral) 방향을 따라 -5 mm까지 바늘을 삽입합니다. 다음으로, 6-hydroxy dopamine 또는 vehicle 0.2 µL를 분당 0.1 µL의 속도로 내측 전뇌다발(median forebrain bundle)에 일측성으로 주입합니다. 6-hydroxy dopamine 또는 vehicle 투여가 완료되면, 주입 부위에서 확산이 일어날 수 있도록 바늘을 5분 동안 더 그대로 둡니다.그 후, 바늘을 천천히 뽑고 세 바늘의 봉합사로 두피의 절개 부위를 봉합한 다음, 1 mL의 젖산 링거액(lactated ringer solution)을 피하 주사합니다. 마지막으로, 동물을 정위 고정 장치에서 분리하여 의식을 회복할 때까지 회복용 케이지에 둡니다. 6-하이드록시도파민(six hydroxy dopamine) 병변 수술 후 15~21일이 경과한 시점입니다.신경독소로 인한 세포 사멸이 완료되면, 6-hydroxy dopamine 병변 유도의 성공 여부를 평가하기 위해 자발적인 360도 회전 횟수를 측정할 수 있습니다. 이 행동 평가에서, 6-hydroxy dopamine으로 인해 도파민 결핍이 95% 이상 유도된 마우스는 6-hydroxy dopamine을 부분적으로 처리했거나 가짜 수술(sham operation)을 받은 마우스보다 유의하게 더 많은 IP subversive rotation을 보입니다. 각 개체의 SAL 도파민 수치와 자발적 IP subversive rotation의 백분율을 상관 분석함으로써, 6-hydroxy dopamine 병변 후 IP subversive rotation이 70% 이상 나타난 마우스는 Sal 도파민의 95% 이상이 소실된 것으로 확인되었습니다.이 영상을 시청한 후에는 마우스에서 정위 고정 및 확산 제어 방식으로 6-hydroxy dopamine 병변을 효과적으로 유도하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 이를 통해 95% 이상의 도파민 고갈 수준을 달성할 수 있습니다. 또한, 마우스에서 파킨슨병의 행동 평가를 수행하는 방법도 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

파킨슨 질환은 실험적으로 6 - OH - 도파민에 의해 유도된 수있는 striatum에 dopaminergic innervation의 손실로 인해 발생합니다. 우리는 stereotaxic 병변을 수행하고 생쥐에서 apomorphine 유발 회전 동작을 모니터링하는 방법에 대해 설명합니다. 이 모델은 유용하고 파킨슨 질환에 대한 새로운 치료법을 테스트하기 위해 신뢰할 수 있습니다.

파킨슨병에 대한 Murine 모델 : 6 - OH 도파민의 병변에서 행동 테스트

이 비디오는 신경독 6-하이드록시도파민(6-OHDA)을 뇌에 주입하여 파킨슨병의 쥐 모델을 만드는 절차를 보여줍니다. 내측 전뇌 다발(MFB)에 주입된 신경독은 운동 조절을 담당하는 도파민 뉴런을 특이적으로 표적으로 삼아 파괴하고 파킨슨병 증상을 복제합니다.

파킨슨병의 6-하이드록시도파민 쥐 모델 생성

일반적으로 파킨슨 병 및 운동 장애에 민감하고 안정적​​인 행동 분석은 새로운 잠재적 인 치료를 테스트하기 위해 필수적입니다. 여기, 우리는 흑질 선조체 시스템에 손상의 정도를 변화와 전임상 연구에 유용에 민감한 쥐를위한 감각 테스트의 관리 배터리를 설명합니다.

파킨슨 병의 마우스 모델에서 감각 기능의 평가

우리는 MPTP, 실린더 및 오픈 필드 테스트를 사용 하 여 모터 기능을 측정 하는 행동 평가 사용 하 여 파 킨 슨 병에 대 한 murine 모델의 설립을 설명 합니다. 우리 다음 사용 하 여 l 아미노산의 일종 한 예로 PD 약물의 연구에서이 모델을 적용 하는 방법을 보여 줍니다.

Murine MPTP 유발 파 킨 슨 병 모델에서 자발적인 운동의 행동 평가

이 프로토콜은 센다이 바이러스 감염에 의해 신경 줄기 세포를 유도하는 말초 혈액 단핵 세포의 재프로그래밍을 제시, 도파민성 뉴런으로 iNC의 분화, 일방적으로 병변에 DA 전구체의 이식 파킨슨병 마우스 모델, PD 치료를 위한 iNSC 유래 DA 전구체의 안전성 및 효능에 대한 평가.

말초 단핵 세포에서 유도 된 신경 줄기 세포의 생성 및 이식 연구에 대 한 도파민성 신경 전구체로 분화

여기에서는 쥐의 증가된 크기와 무게를 수용하기 위해 MouseWalker 장치를 재설계하여 구축된 RatWalker 시스템에 대해 설명합니다. 이 시스템은 좌절된 전체 내부 반사(FTIR), 고속 비디오 캡처 및 오픈 액세스 분석 소프트웨어를 사용하여 보행 매개변수를 추적하고 정량화합니다.

파킨슨병의 유전적 쥐 모델에서 보행 분석을 위한 RatWalker 시스템 적용

6-하이드록시도파민(6-OHDA) 모델은 파킨슨병에 대한 이해를 높이기 위해 수십 년 동안 사용되어 왔습니다. 이 프로토콜에서, 우리는 내측 전뇌 다발에 6-OHDA를 주입하여 쥐의 일방적 인 nigrostriatal 병변을 수행하는 방법을 보여주고, 운동 결핍을 평가하고, 스테핑 테스트를 사용하여 병변을 예측합니다.

파킨슨 병의 6- 히드 록시 도파민 쥐 모델

L-DOPA 유발 운동 이상증의 설치류 모델은 L-DOPA의 반복 투여로 인해 나타나는 증상을 완화하거나 발달을 약화시키기위한 치료 적 개입을 식별하는 데 귀중한 도구입니다. 이 프로토콜은 파킨슨 병의 일방적 인 6-OHDA 병변 쥐 모델에서 운동 장애와 같은 움직임을 유도하고 분석하는 방법을 보여줍니다.

파킨슨 병의 일방적 인 6-OHDA 병변 쥐 모델에서 L-DOPA 유발 운동 이상증 평가

이 글은 파킨슨병의 래트 모델에서 레보도파로 인한 운동이상증을 유도하고 평가하는 방법을 설명한다. 이 프로토콜은 운동 이상과 운동 장애 행동의 범위, 둘 다 강도와 빈도에 관한 자세한 정보를 제공하여이 충족되지 않은 의학적 필요를 목표로하는 치료법을 테스트 할 수있는 신뢰할 수있는 도구를 제공합니다.

파킨슨 병의 쥐 모델에서 레보도파 유도 운동 장애의 유도 및 평가

이 연구는 파킨슨 병의 전임상 모델에서 신경 염증, 신경 변성 및 운동 장애를 유도하는 데 필요한 벡터 용량과 노출 시간을 분석합니다. 인간 α시누클레인을 코딩하는 이들 벡터는 파킨슨병과 관련된 시누클레인 병리를 재분석하기 위해 흑질로 전달된다.

인간 α-시누클레인을 코딩하는 아데노 관련 바이러스 벡터에 의해 유도된 파킨슨병 마우스 모델 분석

학습하세요 쥐의 일측성 6-OHDA 병변 수술을 통해 파킨슨병 모델을 만드는 방법을. 이 프로토콜은 95% 이상의 도파민 고갈과 낮은 사망률을 보이며 행동 실험에 적합한 동물 모델을 제공합니다.

파킨슨병의 일방적-6-OHDA lesioned 마우스 모델의 개발

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