성상세포의 구획 특이적 역학을 위한 자발적 칼슘 이미징

0 조회수2:33 • June 17th, 2025

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기록 챔버에서 뉴런-성상세포 혼합 배양물이 포함된 폴리머 코팅 커버슬립을 가져 와십시오.

이러한 형질감염된 세포는 원형질과 ER막에서 칼슘 민감성 단백질을 발현하며, 칼슘 결합 시 형광을 발현하여 세포내 칼슘 역학을 추적합니다.

칼슘 이온이 포함된 배지를 추가하고 증발을 방지하기 위해 챔버를 덮습니다.

챔버를 형광 현미경 아래에 놓습니다.

칼슘 이온은 칼슘에 민감한 단백질에 결합합니다. 청색광을 조사하면 ER 외막의 칼슘 민감성 단백질이 녹색 형광을 발합니다. 이 녹색 형광을 사용하여 성상세포를 찾습니다.

다음으로 녹색광을 조사합니다. 원형질막의 칼슘에 민감한 단백질은 빨간색 형광을 발합니다. 녹색 형광을 나타내는 동일한 성상세포에서 적색 형광의 존재를 확인합니다.

원형질막에 칼슘 민감성 단백질의 타임랩스 이미지를 기록한 다음 ER 외막에 칼슘 민감성 단백질을 기록합니다.

이미지를 분석하여 선택한 성상세포에서 구획 특이적 자발적 칼슘 활성을 관찰합니다.

Lck-RCaMP2 및 OER-GCaMP6f로 형질감염된 세포가 들어 있는 커버슬립을 현미경의 기록 챔버에 장착합니다. 400마이크로리터의 이미징 매체를 추가하고 챔버 위에 뚜껑을 놓습니다. GCaMP6f에 대한 필터 세트와 광원을 선택합니다. OER-GCaMP6f를 발현하는 성상세포를 찾습니다.

그런 다음 RCaMP2용 필터 세트와 광원을 선택합니다. 그리고 Lck-RCaMP2가 동일한 성상세포에서 발현되는지 확인합니다. Lck-RCaMP2의 타임랩스 이미지를 2Hz에서 2분 동안 기록하고 이미징 데이터를 저장합니다.

그런 다음 필터 세트를 GCaMP6f의 필터 세트로 다시 변경합니다. OER-GCaMP6f의 타임랩스 이미지를 2Hz에서 2분 동안 기록합니다. 그런 다음 이미징 데이터를 저장합니다.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026