Name: 쥐의 척수를 다친 후에 급성 및 만성 촉각 감각 테스트 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-04T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: 학습하세요 쥐의 척수 손상 후 급성 및 만성 촉각 감각 테스트 방법을 Von Frey 단사모 사용법과 함께. 이 검증된 기법은 촉각 역치 변화를 정량화하여 통증 연구에 활용됩니다.

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NIH NS43798 (DMB), NIH F31 NS058138 (MRD) P30-NS045758 (CBSCR) 및 미국 마비 재향 # 2451 (DMB) 및 # 2707 (MRD).

1. 위 / 아래 발바닥 폰 프라이 테스트 시험의 목적은 많은 힘이 자극의 발자국이 탈퇴를 유도하는 데 필요한 방법을 측정하여 촉각 민감도를 결정하는 것입니다. 4.56과 6.10의 범위 사이의 상용 보정 폰 프라이 헤어 monofilaments는 앞발을 자극하는 데 사용됩니다. 시각적 또는 고유 감각 입력을 바탕으로 답변에 잘못 있도록 자극이나 proprioception의 시각화와 같은 다른 감각 입력은 촉각 임계값 조치를 먹이고 있습니다. 쥐가 시리얼을 먹고있는 동안 피부를 만지고 monofilament의 시각화을 방지하기 위해, 우리는 오직 테스트합니다. 이것은 인지적 distracter는 또한 쥐가 휴식 비슷한 기준선 수준에서 검사하는 보장합니다. 오히려 촉각 입력보다 고유 감각에 의한 반응을 피하기 위해, 우리는 monofilament가 올렸거나 앞발을 이동 시련에 포함되지 않습니다. UP-DOWN 접근법에 대한 대답 : ACCLIMATION 절차 <ol><li> 현재 과일 cerea쥐를 먹이 보상을 인식하고 추구하므로 가정 안의구나. 쥐는 gentling 또는 테스트 프로세스의 어느 시점에서 박탈 음식이 될 필요가 없습니다. </li><li> 쥐들은 집 안의 과일 시리얼을 먹고 나면 테스트 환경 및 절차에 acclimated받을 준비가되었습니다. Accl​​imation 각지만보다가 필요한 수 10 분 최소 4 세션을 통해 발생합니다. 10 분 세션 쥐가 세션이 끝나기 전에 만족을 했소가되지 않도록하는 데 사용됩니다. </li><li> 과일 시리얼 3 가지로 테스트 챔버에서 쥐를 놓습니다. 추가 과일 시리얼에게 그들이 먹는대로 한 번에 1-2를 제공합니다. 쥐이 먹는 동안 쥐가 자사의 앞발로 땅을 차다 아래의 움직임에 익숙해집니다 있도록 세 번째 세션에서 철사 바닥 아래에서 손의 움직임을 생산하고 있습니다. 네 번째 세션에서 약 한 손 발바닥 표면 열 프레 젠 테이션의 총 분 단위 5.18 monofilament를 적용합니다. 나이브 쥐이 하위 임계값 자극에 반응해서는 안됩니다. </li><li> 키가 큰y는 소비 시리얼 조각, 배뇨하고 깨끗하게 함, 냉동 및 정리 동작 주파수. 냉동 동작은 두 가지 방법으로 발생) 쥐가 다시 벽면 근처 보통지면에 낮게 웅크리고있는 짐승 떼거리를 봤어이나 시험관에서 떨어져 직면하고 움직이지 유지되며 B) 쥐가 새장의 중간에 이상 hunched되며 보통은 이빨을 chatters . 냉동 행동은 오랜 기간 동안 계속 사용할 수 있습니다. </li><li> 테스트가 준비 gentled 쥐 10 분 동안 거의 지속적으로 먹을 것입니다. 그것은 우리 안에 쉽게 이동하고 마지막을 소모 후 매우 빨리 과일 시리얼을 요청합니다. 중요한 것은 쥐 먹는 걸 멈추지 않을 것이다 또는 와이어 바닥이나 웃기고 monofilament 응용 프로그램을 아래의 손 움직임을 신경 쓸 수. </li></ol> UP-DOWN 이동할 동안 B. 테스트 절차 <ol><li> 쥐 우리 인간의 청각 범위는 아래에 있습니다 조난 vocalizations를 생성합니다. 그들이 누군지들을 수 있도록 테스트를 위해 대기 쥐는 별도의 룸에 보관한다alizations. </li><li> 폰 프라이 헤어 테스트를 위, 아래에 적합한 척수 부상과 쥐는 팔다리와 함께 체중 베어링을 입증해야합니다. monofilaments의 응용 프로그램이 머리에 신경을 쓰실 전에 앞발을 이동하기 때문에 쥐를 지원할 수없는 팔다리가 안정적으로 테스트할 수 없습니다. </li><li> 과일 시리얼 2 ~ 3 조각으로 테스트 챔버에서 쥐를 놓습니다. 쥐 각 VFH 응용 프로그램 동안 식사를해야합니다. </li><li> HL 먼저 테스트를 시작하는 결정하는 주사위를 굴려. 비록 숫자는 오른쪽 앞발을 나타내며 홀수 번호는 왼쪽을 나타냅니다. </li><li> 5.18 monofilament로 테스트 세션을 시작합니다. 탈퇴 응답은 정상 및 SCI 쥐에게 4.56에서 6.10로 발생할 수 있으며 5.18 monofilament는 범위의 중간에 빠져 들었어. </li><li> 쥐이 crouches를 얼려하거나 먹지 않는 동안 monofilament를 적용하지 마십시오. 테스터가 대기하는 경우, 때로는 이러한 조건이 해결되며, 테스트는 다시 시작할 수 있습니다. 쥐은 응용 프로그램에서 이러한 행동과 총 시간을 표시하는 경우aratus 처음 다음날부터 시험과 재시험을 중단, 20 분 거리에 있습니다. 이것이 그들의 발생을 증가시킬 수로 이러한 동작을 표시하는 동안 쥐를 제거하지 마십시오. 쥐 이러한 행동을 강화 피하기 위해 그것을 취급하기 전에 이러한 패턴를 나서는 때까지 기다리십시오. </li><li> 그것 잠함병 (그림 1A 참조)까지 도보로 패드 사이에 뒷다리 손 안에 5 번 발바닥 dermatome에 monofilament 만져. 이 부드러운 꾸준한 응용 프로그램은 약 두 번째는 그때 피부에서 제거 소요됩니다. 피부의 민감성이 분야에서 훨씬 낮으로 발 패드의 어떤 부분을 만지는 것을 피하십시오. 이것은 싱글 터치 한 재판을 구성합니다. </li><li> 쥐 빠르게 monofilament에서 떨어져 앞발을 들어 올렸 때 긍정적인 반응이 발생합니다. 탈퇴는 응답이 monofilament 응용 프로그램과 연결되어 있는지 확인하기 위해서 monofilament가 제거되는 시간에 의해 시작되어야한다. </li><li> MO 인식의 다른 증거를 위해 동물을 조심같은 발성과 같은 nofilament 터치, 아래로, 뒤로 또는 테스트 한것 땜에 원하는대로 넘어, 지속적인 발자국이 탈퇴를 핥아하거나 귀가 꿈틀. 데이터 시트에 그들을합니다. 이러한 행동은 발자국 탈퇴가 발생했을 때 그것은 자극의 supraspinal 인식의 증거로서의 역할을합니다. </li><li> 긍정적인 반응이있다면, 다음 낮은 monofilament를 적용합니다. 응답이 (마이너스)가없는 경우, 다음의 높은 monofilament까지 이동합니다. (개작을 방지하기 위하여) retesting하기 전에 기본적인 발사로 돌아와야하는 감각 수용체 각 monofilament 응용 프로그램 사이에 30 초 정도 소요됩니다. </li><li> 당신은 10 시련을 쌓을 때까지 긍정적이거나 부정적인 응답을 바탕으로 뒷다리 웃기고 높거나 낮은 monofilaments을 적용 계속합니다. 그런 다음 다른 뒷다리 다쳤구나을 반복한다. (예 : 데이터 시트 참조). </li><li> 고유 감각 입력을 소개하고 앞발을 들기없이 테스트할 수있는 최고의 VFH은 6.10입니다. 앞발로 땅을 차다가 monof 전에 올렸 때문에 6.45VFH 대형은 사용하지 않아야합니다ilament 신경을 쓰실. 6.10에서 아무런 응답이 없다면 그 다음 재판은 다시 6.10을 적용합니다. </li><li> 응답이 무효화되어야하고 다음 중 하나가 자극 응용 프로그램이나 발자국이 탈퇴하는 동안 발생하는 경우 재판이 다시 테스트해야합니다 <ol class="lalpha"><li> 쥐은 지속적으로 섭취하지 않습니다. </li><li> 쥐은 불가능 탈퇴 응답을 elicits 적용 력을 알고 만드는 monofilament의 굽힘 전에 멀리 VFH 자극으로부터 이동합니다. </li><li> 앞발로 땅을 차다는 촉각 자극 이외에 고유 제공 VFH (이전 또는 VFH가 휘었죠 전이나 후에)에 의해 해제됩니다. </li></ol></li><li> 테스트 세션은 일반적으로 두 hindlimbs를위한 15 분 내로 완료할 수 있습니다. </li></ol> UP-DOWN 이동할 동안 C. 데이터 처리 <ol><li> 성공적인 테스트는 각 다쳤구나 10 순차 재판을해야합니다. </li><li> 촉각 임계값의 값은 &amp; G의 발자국이 탈퇴를 생산하고 가장 낮은 monofilament입니다전자, 프레 젠 테이션 및 monofilament 중 3 개 이상의 프레 젠 테이션의 50 %가 (예를 들어 데이터 시트를 임계값 동그라미되는 참조) 실시했다. </li><li> 단 2 총 시련과 monofilament는 한 재판은 긍정적이고 부정적인 하나에도 문턱으로 선택되어 있지 않습니다. 자극의 여러 프레 젠 테이션은 강제로 응답 패턴의 더 좋은 지표입니다. </li><li> 시험 중 50 % 이상에서 긍정적인 반응을 생산하지 monofilament이 없다면, 쥐가 6.45의 점수가 주어집니다. 이것 만한게 임의의 기회를 넘어선 6.10의 높은 testable monofilament를 검색하지 않은 것을 의미합니다. 그것이 monofilaments의 testable 범위보다 높은 다음 값을 나타냅니다 때문에 6.45의 값이 주어집니다. </li><li> 그램 강제로 오른쪽과 왼쪽 발냄새위한 문턱 값을 변환합니다. 그램 강제 값은 폰 프라이의 머리카락 공급자가 제공한 것입니다. . 양국 외상의 데이터의 경우 두 발냄새에 대한 임계값 g 포스는 양보 함께 평균 수단일 점수. </li></ol> 2. 지느러미 폰 프라이 테스트 이 테스트의 목적은 그들이 전형적인 발바닥 VFH 방법을 사용하여 테스트할 수 없다는 등 가난한 모터 제어와 쥐에 촉각 감성을 결정하는 것입니다. 그것은 터치 힘이 aversive 반응을 생산하는 데 필요한 양을 quantifies. 고유 감각 자극에 반응을 방지하기 위해, 우리는 앞발로 차다가 응용 프로그램을하는 동안 VFH에 의해 이동되는 시련에 포함되지 않습니다. 또한, 우리는 VFH가 잘때 또는 발 등 부분의 표면에 걸쳐 닦았되는 시련에 포함되지 않습니다. 지느러미 폰 프라이 테스트하기 A. ACCLIMATION 절차 <ol><li> 기준 테스트 및 척수 손상 이전 십분 각각 네 가지 세션 젠틀 쥐. </li><li> 엉덩이쪽에가 (그림 1B) 아래 그림과 같이 노출되도록 대충 작은 수건에 쥐를 싸다. 뒷다리 발냄새가 가볍게 표면에 휴식과 함께 테이블 위에 쥐를 둡니다. 동일 사용아늑한하지만 단단히 포장을하여 각 쥐 있는다. 테이블 가장자리에 팔뚝을 긴장시키는 것은 쥐 간의 다양성을 줄일 수 있습니다. </li><li> 테스트가 준비 gentled 쥐의는 몇 분 동안 연속 타월로 잡혀 저항 없지만 당신은 다시 포장 쥐 1 또는 뒷다리는 발 모두의 테스트 기간 동안 2 회 할 수 있습니다. </li></ol> 지느러미 폰 프라이 테스트 B. 테스트 절차 <ol><li> 첫번째 테스트 시작 뒷다리하는 사지 결정하는 주사위를 굴려. 비록 숫자는 오른쪽 앞발을 나타내며 홀수 번호는 왼쪽을 나타냅니다. </li><li> 대충 노출된 엉덩이쪽에두고 수건에 쥐를 싸다. </li><li> 촉각 자극이 생쥐 녀석은 최소 10 초 동안 조용하고 조용 후에만 적용됩니다. </li><li> 4.56 VFH부터 (그림 1C) 관절에 약 1cm 근위 첫 번째와 두 번째 metatarsal 사이에 지느러미 표면에 수직으로 monofilament를 적용합니다. 부드럽고 ste의 monofilament를 적용한 초 간격 이상 ady는 방식으로 그것 숨어 그때 그것을 제거하지 않는 한. 이것은 싱글 터치 한 재판을 구성합니다. </li><li> 쥐 빠르게 자극에서 떨어져 앞발을 이동할 때 긍정적인 반응이 발생합니다. 운동의 방향은 뒷다리는 근육이 수축되기 전에 자주 후부 또는 외부입니다. 탈퇴는 응답이 monofilament 응용 프로그램과 연결되어 있는지 확인하기 위해서 monofilament가 제거되는 시간에 의해 시작되어야한다. </li><li> 4.56 monofilament에게 감각 '돈이 팔을 올립니다 "을 방지하고 감각 수용체가 (적응을 방지하기 위하여) retesting 전에 해고 기준으로 돌아올 수 있도록 응용 프로그램 사이에 최소한 30 초 배 이상을 적용합니다. </li><li> 자극 시험 VFH 전표면 다시 적용하고 부드럽게 솔질을하거나 오히려 뾰족한 연락을 청소의 힘 전달이 더 만들고 피부를 grazes해야합니다. </li><li> 4.56 monofilament ~ 2 (즉, 1 또는 0) 미만의 긍정적인 답변이있을 경우, 다음 큰 VFH 3을 적용한다같은 방식으로 배. </li><li> 이러한 방식으로 두 개 이상의 긍정적인 반응이 발생할 때까지 5.88를 통해 4.56부터 점차적으로 더 큰 VFHs이 적용되거나 최대 VFH가 도달할 때까지. </li><li> 발자국이 인출 한도는 3 시련을 들락 거 렸고 최소 2 긍정적인 반응을 elicits 낮은 VFH입니다. </li><li> 다른 다쳤구나를 반복합니다. </li><li> 테스트 세션은 보통 뒷다리는 발 모두 15 분 안에 완료할 수 있습니다. </li></ol> 3. 대표 결과 성공적인 테스트 관절 (그림 1C)에서 중순 발바닥 지역 (그림 1A) 또는 1 일 및 2 차 metatarsal 1cm 사이 지느러미 표면에 수직으로 적용 VFH에 뒷다리 손 즉각적인, 활발한 철회가 발생합니다 . 이러한 응답은 각 뒷다리 다쳤구나에 대해 촉각 임계값을 도출하기 위해 않게됩니다. 발바닥 VFH 임계값은 파생과 급성 SCI의 지느러미 VFH 시험에서 촉각 임계값 뛰어난 충실도를 보여주만성 번 (그림 2)에서 D. 발바닥이나 지느러미 시험에서 파생된 촉각 임계값 감소는 등급 SCI (그림 3 3,5)에 대해 발생합니다. 이러한 과민성은 SCI 후 이르면 칠일 등의 명부와 실험 3-4,6 기간 동안 유지됩니다. SCI의 severities의 범위 손 촉각 감각 임계값에 영향을 미치지 않지만, 임계값 감소는 더 심각 SCI (그림 3)에 대해 발생합니다. 중요한 것은, 아래 레벨 allodynia의 개발은 병변 진원지에서 하얀 물질의 60 % 이상의 손실이있을 때 발생하는 모든 또는 없음 응답입니다. (그림 4 3). 촉각 임계값은 부패와 낮은 VFH 세력에 인위적인 반응을 생산할 수있다. 적어도 두 가지 조건은 임계값 붕괴를 생산할 수 - 급속하게 자극 응용 프로그램간에 오랫동안 기다리고 파고 또는 jabbing 방식으로 피부에 VFH을 적용하거나 없습니다. 그 자신감을촉각 임계값은 정품이며,주의가 유사한 저속 접근 방법과 interstimulus 간격은 최소 30 초 있어야합니다을 사용하여 각 VFH을 적용하기 위해 이동해야합니다. 우리는 또한 행동을 먹는 것은 임계값 붕괴 5 감소하는 것으로 나타났습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3247/3247fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 발바닥과 지느러미 폰 프라이 머리 (VFH) 테스트 VFH 자극의 위치를 그린 약도와 사진. )은 발바닥 VFH 테스트의 경우 폰 프라이 머리가 느린에서 중간 지골 (같은 hindpaw의 발바닥 표면의 다이어그램에 빨간색 상자로 표시)에 약 1cm 후부 중반 발바닥 hindpaw에 수직으로 적용해야 일관된 속도가 숨어까지. 사진과 같이 지느러미 VFH 기법에 대한 B와 C), 쥐 다를수 외과 수건에 싸여있다. VFH는 첫 번째와 두 번째 metatarsa​​l approximatel 사이에 손 등 부분의 표면에 적용됩니다관절의 근위 Y 1cm. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3247/3247fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 지느러미 폰 프라이 헤어 감각 임계값이 표준 발바닥 VFH 상관 관계. (N-44, 피어슨 계수 = 0.503, P &lt;0.01, R2 = 0.67). 점선 라인 지느러미 VFH이나 발바닥 VFH 기법을 사용하여 allodynic 센세이션을위한 차단 임계값을 보여 주며 지느러미 VFH 테스트를 사용하여 SCI 후 칠일에 allodynic 임계값은 발바닥 VFH 방법에 의해 결정 만성 아래 수준 allodynia를 예측할 수 있음을 나타냅니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3247/3247fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 조기 지느러미 폰 프라이 헤어 감각 임계값은 나중 timepoints에서 부상 severities에 걸쳐 allodynic 및 비 allodynic 촉각 민감도를 예측했다. 비하 감각 임계값 7 일 게시물 SCI의 지느러미의 VFH 및 28일 포스트 SCI 발바닥 VFH 조치 사이에 발생했습니다. 놀라운 유사성은 위해 발생 상당한 allodynia와 SCI의 광범로 중간 심각한 SCI (모든 다른 그룹 대 P &lt;0.05 1.1 밀리미터 변위)에서 지적했다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3247/3247fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4. SCI 후 6주에서 hindpaw allodynia을 보여주는 laminectomy를 (없음 SCI) 수신 쥐 및 SCI 그룹의 비율. Allodynia는 촉각 자극에 대한 중간 또는 심한 SCI (오스 ESCID 장치 0.9, 1.1, 1.25, 1.3 밀리미터 코드 변위) 가벼운 SCI와 쥐 (0.3, 0.5, 0.7 mm 척추 변위)을 전시하는 동안 정상적인 반응과 쥐에서 본되었다. 대표 코로나 척수의 섹션 laminectomy위한 병변 진원 (손상되지 않은 컨트롤)에서 myelin에 대해 묻다, 온화한은 (0.5 밀리미터 변위), 중간 (1.1 밀리미터 변위)과 중증 (1.3 밀리미터 변위) 척수의 타박상은 axonal의 정도를 보여주 포함되어 있습니다 이러한 과민성와 연결되어 살려주는. (스케일 바 = 0.5 밀리). K "&gt; <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/3247/3247fig5.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 5"> 그림 5. 위, 아래 폰 프라이 머리 테스트를위한 샘플 데이터 시트. 헤어 가치와 결과 (긍정적이거나 부정적인) 각 시범 서비스에 기록됩니다. 테스트 supraspinal 의식의 징후가 설명되어 있습니다. 시험이 끝나면, 각 헤어 가치 응답 않게됩니다. 예제 데이터를 선택한 임계값이 돌고있다.

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</ol>

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VFH 테스트 방법은 민감하고 쥐의 SCI 모델에 사용할 유효한 두 테스트 패러다임을 대표 여기서 제시. 중요한 것은, 지느러미 VFH 시험 쥐들은 엉덩이쪽에 서있을 수 없을 때 심하게 중반 흉부 SCI​​를 따라 뒷다리 발냄새 촉각 감각의 회복의 평가를 위해 만들었습니다. 쥐가 자신의 무게를 지탱하고 경추 SCI 후 두 다리를 위해있는 능력을 되찾을 때 테스트 패러다임도 사용할 수 있습니다. 두 패러다임은 여기 각각의 뒷다리 손 촉각 임계값을 결정하도록 조정 VFH을 활용 보여주었다. 다른 방법은 일반적으로 무해한하거나 정상적으로 유해 자극을 둘 수있는 금단의 주파수를 결정한다. 우리는 이전에 촉각 임계값의 작은 개선이 만성 neuropathic 고통과 정상 촉각 감각의 존재의 차이를 나타내는 수도 것으로 나타났습니다. 따라서 통증이 임계값 5 월 FA를 파생 실험적인 테스트 방법을 활용잠재적인 치료적 개입의 병원에 대한 번역을 cilitate. <p class="j...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> Semmes - 웨인 스테인의 Monofilaments </td><td> 공동 Stoelting </td><td> 58,011 </td><td></td></tr><tr><td> 생선 목축 박스 </td><td> 수족관 공급 스토어 </td><td></td><td> 구멍은 시리얼 전송을위한 측면에서 뚫고 </td></tr><tr><td> 고가 와이어 메쉬 (1 / 4 &quot;X 1 / 4&quot;그리드) </td><td> 하드웨어 스토어 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 탄성 대신에 생선 개종 상자를 개최하는 </td><td> 크래프트 스토어 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 설탕이 시리얼 </td><td> 식료품점 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 외과 헉 타올 16 &quot;X 23&quot; </td><td> 의료 공급 스토어 </td><td></td><td></td></tr></tbody></table><p클래스 = &quot;jove_content&quot;&gt;

쥐의 척수를 다친 후에 급성 및 만성 촉각 감각 테스트

Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats

척수 손상 (SCI)는 allodynia 1-8을 일으키는 감각 시스템을 impairs. 민감한 allodynia의 세포와 분자 원인, 그리고 쥐 SCI 모델에서 유효한 감각 테스트를 식별하는 것이 필요합니다. 그 표준화된 방법이 연구소를 통해 구현되지 않은 않도록 그러나 최근까지 단일 테스트 접근법은 SCI에 대한 검증도 있었다. 또한, 가능한 테스트 방법은 심하게 구현되지 않았습니다이나 심한 운동 장애가 존재하면, SCI 유발 allodynia 3의 개발 연구를 방지. 여기 SCI 4-5 이후에 촉각 감각 임계값의 변화를 계량 폰 프라이 머리 (VFH) monofilaments을 사용하여 두 검증 관능 검사 방법을 제시한다. 한 검사는 만성 5 테스트한 다른 SCI의 severities에 걸쳐 높은 감도와 특이성을 보여주는 탄탄한 위, 아래 테스트입니다. 다른 시험은 SCI 후 심하게 적용할 수있는 신개발 지느러미 VFH 시험 때llodynia 전에 모터 회복 4-5로 개발하고 있습니다. 그것 숨어까지 뒷다리 손 피부에 닿는 순간 각 VFH의 monofilament는 보정 력을 적용합니다. 위, 아래 방법으로 높거나 낮은 세력의 교체 VFHs는 flexor 탈퇴 임계값을 윤곽을 그리다 위해 발바닥 5 번 dermatome에 사용됩니다. 철수가 낮은 힘 VFHs는 탈퇴가 멈추면 때까지 사용 후 발생할 때까지 연속 높은 세력이 적용됩니다. 촉각 임계값은 자극의 50 %에서 인출을 유도하는 데 필요한 힘을 반영한다. 쥐은 시험관에서 지원하는 동안 새로운 시험은 각 VFH는 손 등 부분의 5 번 dermatome에 적용됩니다. VFH의 자극이 주어진 힘이에서 3 응용 프로그램의 최소 2의 발자국이 탈퇴를 생산하기 전까지 힘의 오름차순으로 발생합니다. 촉각 감각 임계값은 시간의 철회 66%을 유도하기 위해 가장 낮은 원동력이다. Accl​​imation, 테스트 및 채점 절차가 설명되어 있습니다. 재시험 전형적인 시련을 필요로 탈선 재판이 정의됩니다. 동물 사용하는 w같은 오하이오 주립 대학 동물 보호 및 사용위원회에 의해 승인했다.

우리는 쥐의 척수 손상의 급성 또는 만성 기간을위한 두 촉각 감각 테스트 방법을 설명합니다. 이러한 확인 절차는 allodynia 같은 감각의 개발과 유지 보수를 검색할 수 있습니다.

척수 손상(SCI)은 감각 계통을 손상시켜 이질통(allodynia)을 유발합니다1-8. 이질통의 세포 및 분자적 원인을 규명하기 위해, 민감하고 타당한 감각...

이 절차의 전체적인 목표는 두 가지 서로 다른 Von Fry 테스트 방법을 사용하여 척수 손상 후 급성 및 만성 시점에서의 촉각 감각 변화를 정량화하는 것입니다. 이를 위해 먼저 랫드를 up-down von fry 테스트용 플렉시글라스 챔버에 적응시키고, dorsal von fry 테스트를 위해 수건으로 고정하는 과정에 적응시킵니다. 절차의 두 번째 단계는 von Fry 모노필라멘트를 사용하여 뒷발의 발바닥 또는 등쪽 표면에 촉각 자극을 가하는 것입니다.쥐가 모노필라멘트로부터 발을 빠르게 들어 올릴 때 양성 반응이 나타납니다. 절차의 마지막 단계는 가해진 각 힘에 대한 양성 반응 또는 발 회수 횟수를 정량화하여 뒷발의 촉각 감각 역치를 결정하는 것입니다. 궁극적으로, up, down 및 dorsal von fry 테스트 기법 모두 중등도에서 중증의 척수 손상 후 발생하는 촉각 역치의 저하에 민감하다는 결과를 얻을 수 있습니다.오늘은 척수 손상을 입은 쥐의 발바닥 촉각 감각을 테스트하는 두 가지 기법을 시연하겠습니다. 이러한 기법들은 쇠약해지는 통증과 척수 손상을 겪는 사람들을 위한 향후 치료법을 결정하는 데 도움이 될 것입니다. 척수 손상을 입은 사람들의 최소 3분의 2는 이후 심각하고 쇠약해지는 신경병증성 통증을 겪게 됩니다.연구자로서 향후 치료제 개발을 위한 세포 및 분자 메커니즘을 규명하기 위해서는 정확하고 민감하며 타당한 행동 테스트 기법을 사용하는 것이 중요합니다. 이 방법은 중흉추 척수 타박상 후의 감각 회복에 대한 통찰을 제공할 뿐만 아니라, 촉각에 영향을 미치는 다른 유형의 병리 및 손상에도 유용합니다. 감각 평가 시 쥐의 발Withdrawal 반응(발 떼기 반응) 해석에 의존하므로, 이 테스트의 시각적 시연이 매우 중요합니다.초보 사용자의 경우, 반응이 고유 수용성 또는 시각적 신호가 아닌 실제로 촉각 자극으로 인한 것인지 판단하기 어려울 수 있습니다. 이 영상을 시청하고 나면, 동물을 테스트 환경에 적응시키고 진정시키는 방법을 익히게 될 것입니다. von fry 모노필라멘트를 뒷발의 등쪽 또는 발바닥 표면에 적용하고, 양성 발Withdrawal 반응을 해석하는 방법을 배우게 됩니다.마지막으로, 동물의 촉각 감각 역치를 측정합니다. 먼저, 쥐가 먹이 보상을 인식하고 찾을 수 있도록 홈 케이지에서 과일 시리얼을 제공합니다. 쥐가 홈 케이지에서 시리얼을 먹는 것에 익숙해지면, 과일 시리얼 3개를 더 넣은 테스트 챔버에 쥐를 넣습니다.과일 시리얼을 먹는 대로 추가로 제공하십시오. 테스트 준비가 된 온순한 쥐는 10분 동안 거의 지속적으로 먹이를 먹으며, 철망 바닥 아래에서의 손 움직임이나 발바닥에 가해지는 역치 미만의 모노필라멘트 자극에 주의를 빼앗기지 않습니다. 온순한 쥐를 과일 시리얼 두세 조각과 함께 테스트 챔버에 넣으십시오.쥐가 먹이를 먹는 동안 주사위를 굴려 어느 뒷다리부터 테스트를 시작할지 결정합니다. 짝수는 오른쪽 발을, 홀수는 왼쪽 발을 나타냅니다. 5.18 monofilament를 사용하여 테스트 세션을 시작하십시오. 만약 쥐가 정지 반응(freezes CROs)을 보이거나 먹이를 먹지 않으면, 쥐가 진정될 때까지 기다리십시오.테스트를 진행하기 전, 모노필라멘트가 굽어질 때까지 뒷발 발바닥 패드 사이의 L5 저측 피부 분절(planter dermatome)에 접촉시킵니다. 이때 모노필라멘트를 제거하기 전까지 약 1초 동안 부드럽고 일정하게 가압해야 합니다. 쥐가 모노필라멘트로부터 발을 빠르게 들어 올리면 양성 반응으로 간주합니다.발성, 테스트 중인 발을 쳐다보거나 핥는 행위, 또는 귀의 씰룩거림과 같이 모노필라멘트 접촉을 인지했다는 추가적인 증거가 있는지 관찰하고 기록하십시오. 양성 반응이 나타나면, 그다음 단계의 더 낮은 강도 모노필라멘트를 적용하십시오. 반응이 없으면, 그다음 단계의 더 높은 강도 모노필라멘트로 이동하십시오. 이때 각 모노필라멘트 적용 사이에 30초의 간격을 두어, 재테스트 전 감각 수용체가 기저 발화 상태로 돌아올 수 있도록 하십시오.털이 발을 물리적으로 밀어내는 무효 시행이 있는지 주의 깊게 살피십시오. 이러한 시행에서 털은 촉각 및 고유 수용성 피드백을 모두 제공하므로, 해당 데이터는 향후 분석에서 제외해야 합니다.양성 또는 음성 반응에 따라 더 높거나 낮은 강도의 모노필라멘트를 뒷발에 계속 적용하십시오. 총 10회의 시험을 위해 쥐의 뒷부분이 노출되도록 작은 수건으로 느슨하게 감쌉니다. 쥐의 뒷발이 표면에 살짝 닿도록 테이블 위에 배치하십시오.테이블 가장자리에 전완부를 기대면 쥐 간의 변동성을 줄일 수 있습니다. 다만, 테스트 준비가 된 온순한 쥐는 수분 동안 수건에 감싸져 있어도 저항하지 않으므로, 양쪽 뒷발을 모두 테스트하는 동안 쥐를 다시 감쌀 필요가 없을 수도 있습니다. 다시 한번 주사위를 굴려 어느 쪽 뒷다리부터 테스트할지 결정하십시오. 먼저 온순한 쥐의 뒷부분이 드러나도록 수건으로 느슨하게 감쌉니다.쥐가 최소 10초 동안 진정된 후, 첫 번째와 두 번째 중족골 사이, 관절에서 근위부로 약 1cm 떨어진 등쪽 표면에 4.56 von fry hair를 수직으로 적용합니다. 이때 모노필라멘트가 휠 때까지 1초의 간격 동안 부드럽고 일정하게 누릅니다. 쥐가 뒷다리를 굴곡시키기 전에 발을 빠르게 후방 또는 외측으로 움직이면 양성 반응으로 간주합니다. 모노필라멘트에 대해 뒷발의 움직임이 없거나, 움직임이 von Fry hair 적용과 직접적인 관련이 없는 경우에는 음성 반응으로 간주합니다.적응 현상을 방지하기 위해 4.56 모노필라멘트를 최소 30초의 간격을 두고 두 번 더 적용합니다. 4.56 모노필라멘트에 대해 긍정적인 반응이 두 번 미만인 경우, 동일한 방식으로 다음 단계의 더 굵은 필라멘트를 적용합니다. 세 번의 시도 중 최소 두 번의 긍정적 반응을 유도하는 모노필라멘트가 확인되면 테스트가 완료됩니다. 여기서 두 가지 von Fry hair 테스트 방식의 반응을 합산하여 각 뒷발의 촉각 역치를 도출합니다. 급성 SCI 쥐를 대상으로 한 등쪽 von fry hair 테스트의 촉각 역치는 up-down von fry 방식과 매우 우수한 일치도를 보입니다.만성 단계에서 도출된 모발 역치는 족저 또는 배측 테스트에서 도출된 촉각 역치의 감소와 함께 나타나며, 이러한 과민증은 가장 심한 SCI 쥐에서 SCI 후 이르면 7일 만에 나타나 실험 기간 내내 지속됩니다. 중요한 점은, 손상 수준 이하의 이질통 발생은 병변 중심부의 백질이 60% 이상 소실되었을 때 나타나는 전무 또는 전부(all or none) 반응이라는 것입니다. 일단 숙달되면, 이 기술은 적절히 수행되었을 때 쥐 한 마리당 약 15분에서 20분 정도 소요됩니다.이러한 기법들을 정확하게 사용하기 위해서는 환경 내의 혼란 변수를 제어하는 것이 중요합니다. 하루 중 동일한 시간에 테스트를 수행하고, 온도와 습도가 조절되는 동일한 실험실에서 테스트하는 것과 같이 행동 요인에 변동성을 유발할 수 있는 요소들을 관리하면 변동성을 최소화하는 데 도움이 됩니다. 또한, 쥐는 초음파로 발성하므로 테스트 시간이 될 때까지 테스트실 외부에서 대기시키는 것이 중요합니다. 아울러, 감각 역치를 안정시키기 위해 설탕이 가미된 시리얼을 투여합니다.우리는 시리얼을 제공했을 때 역치(thresholds)가 안정적이며, 시리얼을 제공하지 않았을 때보다 더 안정적이라는 것을 확인했습니다. 이러한 행동은 예측 행동과 통증에 대한 위협으로 인해 나타날 가능성이 높으며, 이는 쥐의 공포 및 정서 센터를 활성화하여 과각성 및 파국화 행동을 유발합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

수술의 단순하고 강력한 행동 결과로 인해 좌골 신경의 만성적인 수축이 neuropathic 고통의 사전 저명한 동물 모델 중 하나입니다. 수술에 따라 24 시간 내에 통증 과민성 설립되고 양적 폰 프라이 aesthesiometer (기계적 시험)과 발바닥 진통제 측정기 (온도 시험)를 사용하여 측정할 수있다.

좌골 신경 및 쥐의 통증 과민성 시험의 만성 수축

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쥐에 심각한 척수 손상의 타박상 모델

설치류의 자궁 경부 척수 손상 후 앞다리의 기능을 평가하기위한 세 가지 새로운 행동 검사 (앞다리 스텝 교대, 자세 불안정 시험, 파스타 처리 시험)에 설명되어 있습니다.

소설 작업을 사용하여 일방적 경부 SCI​​ 후 앞다리의 기능을 평가 : 사지 스텝 교대, 자세 불안정 및 파스타 처리

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쥐의 척수를 다친 후에 급성 및 만성 촉각 감각 테스트

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