Name: 만성에 대한 성인 태어나 강한 뉴런의 선택 바이러스성 전달 생체내에 Optogenetic의 자극 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-28T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: 배우세요 후각구 뉴런의 광유전학적 활성화 방법을 통해 성인 신경발생과 행동 변화를 연구하는 기술입니다. Channelrhodopsin2 렌티바이러스 주사와 LED 임플란트를 사용하여 정밀한 뉴런 자극이 가능합니다.

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이 작품은의 &quot;ERA - NET 뉴런 &#39;의 프레임에있는 생명 보험 회사&quot;Novalis - Taitbout &quot;가르슈 DES Neurosciences 드 파리 (ENP), 회사 직원 Nationale 드 라 공들인&quot;ANR - 09 - NEUR - 004 &quot;에 의해 지원되었다 유럽​​위원회에 의해 FP7 프로그램, &quot;재단 부어 라 공들인 Medicale&quot;Letten 재단과 파스퇴르 재단.

1. Stereotaxic 주사 <ol><li> 이러한 실험에 사용되는 바이러스는 Channelrhodopsine2 - YFP (노란색 형광 단백질)을 표현할 수있는 HIV 바이러스에 따라 복제 - 결함 lentiviral 벡터는 퓨전 synapsin업자 6 기반 구축. 플라스미드는 넉넉한 K. Deisseroth의 연구 그룹 (에서 제공한 <a href="http://www.stanford.edu/group/dlab/optogenetics/index.html">http://www.stanford.edu/group/dlab/optogenetics/index.html</a> ). Lentiviruses 설립 프로토콜 7에 따라 실험실에서 상용 소스에서 얻은 또는 생산 수 있습니다. 평균 벡터 titers은 10 10 도입 단위 / ML의 순서에 있었다. 바이러스성 aliquots는 -80 ° C에서 저장하고 피펫로드하기 전에 해동해야합니다. 복수 동결 / 해동 사이클은 피해야한다. 직접 드라이 아이스에 결코 노출 바이러스 솔루션입니다. </li><li> 표준 피펫 풀러 (셔터 P에 borosilicate 유리 모세관을 사용하여 유리 pipettes 준비-97 피펫 풀러). 당기 설정이 제대로 길고 까다로운 피펫을 양보하도록 조정해야합니다. 다음, 직경 30-40 μm의의 팁을 얻기 위해 가위를 사용하여 피펫의 끝을 잘라. 저장소가 먼지 무료 상자에 pipettes를 추출. </li><li> 50 NL의 제공을위한 제조 업체의 지침 Nanoject II microinjector를 설치합니다. 미네랄 오일과 함께 백업 작성하여 사출 피펫을 준비하고 microinjector 플런저에 그것을 넣습니다. stereotaxic 프레임에 microinjector을 첨부합니다. 바이러스 솔루션을 작성하기 전에 유리 피펫에서 부분적으로 비어있는 기름 </li><li> micropipette으로 Parafilm의 살균 조각에 바이러스 솔루션 2 μl를 전송합니다. 부드럽게 바이러스 솔루션의 드롭에 유리 피펫을 절감하고 1-2 μl로 피펫을 채울. 피펫에 기포가 없는지 확인합니다. </li><li> 100 MG / kg 케타민을 및 무균 식염수에 희석 10 밀리그램 / kg Xylazine와 마우스를 마취. 의 두피에서 머리카락을 제거쥐 면도기, 면도날, 가위, 또는 화학 depilitory 에이전트를 사용하여 동물. 70 % 에탄올과 betadine을 교대 세 응용 프로그램과 두피를 소독. 모든 수술 악기도 autoclaved하고 다음 70 % 에탄올로 소독한다. 머리가 안전하다는 확보, 귀 바 코 표시줄 stereotaxic 프레임에있는 동물을 놓습니다. 각막의 건조 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 메스와 눈 사이에서 귀 사이에 두피를 잘라. 두개골을 노출하고 클램프 한 쌍의로 피부를 앵커에 따로 피부를 당겨. 두개골의 표면을 청소합니다. stereotaxic 장치는 bregma에 유리 피펫의 끝에와 제로입니다. 다음 팁은 사출 사이트 (; 메디오 - 측면 모두 오른쪽과 왼쪽 반구에 대한 ± 0.82, 각각 Antero - 후부, 3.30)에 배치됩니다. 코 표시줄의 위치는 stereotaxic 좌표의 계산에 따라 조정되어야합니다. 우리의 실험에서, 코 표시줄이 U를 조정됩니다한패 bregma 및 사출 사이트는 동일한 높이로 정렬됩니다. </li><li> 사출 사이트를 식별합니다. 고속 수술 드릴을 사용하여 조심스럽게 두개골에 구멍을 드릴. 끝에서 만났 구부러진 주사기 바늘로, 경질의 mater을 폭로 얇은 뼈의 잔존물을 제거합니다. 구멍이 올바른 위치에 중심 있는지 확인합니다. 시추하는 동안 두뇌의 표면에 파열에 혈관 않도록 조심해. 혈관이 파열하는 경우에는 혈액의 흐름이 멈출 때까지, 부드럽게 몇 초 동안 작은 목화 꽃봉오리 또는 조직과 두뇌의 표면에 누르십시오. </li><li> 피펫을 절감하고 피펫의 끝이 두뇌의 표면을 접촉 때 Dorso - 복부 높이를 제로. 그런 다음 올바른 Dorso - 복부 깊이 (뇌 표면에서 2.9, Dorso - 복부)에 낮은 및 압력 평형 30 초 정도 기다리십시오. 200 NL 총 바이러스 4 회 50 NL 주사. 각 분사 사이에 30 초 정도 기다립니다. </li><li> 마지막 주사 후, 천천히 파이프를 철회 한 분TTE. 반복 다른 반구에 대한 1.6-1.8을 가리 킵니다. , stereotaxic 장치에서 동물을 제거 절개와 봉합 수술 스레드를 사용하여 자른 피부를 청소하십시오. 동물이 케이지로 돌아오기 전에 온난 패드에 복구할 수 있습니다. 또한, 동물은 즉시 비 steroidal 항염증성 진통제 (예 : Carprofen 4mg/kg)을 부여하고 3 일 수술을 다음 수 있습니다. </li></ol> 2. 후각 망울의 생체내의 optogenetic의 자극에 대한 만성 LED 주입 <ol><li> lentiviral 입자로 주입 동물은 양자 다음 만성 소형 블루 LED (Osram, LED CMS 4.6W 청색)을 심어됩니다. 커넥터는 LED의 반대쪽에 위치되도록 여성 소형 전기 커넥터 솔더는 LED 핀. 어떤 전기 지름길이 없다는 것을 확인하고 커넥터에 대한 긍정과 부정 핀 식별합니다. 적절한 케이블하지만 LED를위한 전류 컨트롤러에 연결하여 LED를 테스트합니다. </li><li> 측정 및 / 또는 LED의 절대 조명 전원을 설정하려면, 마운트 micromanipulator과 위치에 LED가 470 NM에서 최고 빛의 강도의 전원 측정기의 광검출기과 직접 접촉 하였다. 불투명한 PVC 보드에 3mm 직경의 핀홀을 드릴. 부착이 전원 미터에 핀홀 및 광학 전력 대 mm 2 당 전력을 계산하기 위해 전류 입력의 표준 곡선을 빌드합니다. </li><li> 두뇌를 통해 빛의 전파를 측정하기 위해 300 신선한 뇌 조직의 블록, 500, 1000, 1500 및 0-4에서 2,500 μm의 두께 ° C ACSF가 vibratome 14를 사용하여 잘라. LED 아래에 사는 생쥐에서 수행한 것과 동일한 craniotomy과 두개골 조각을 넣으십시오. 첫째, LED 중심 조직없이 빛을 전력을 측정합니다. 그렇다면 LED와 전원 측정기의 광검출기 사이의 조직의 각 블록을 배치하고, 전원을 측정합니다. 비율로 계산 조직의 두께 비교 상대 전송 분율의 곡선을 작성조직을 통하여 조직 않고 측정 전원 사이. </li><li> 100 MG / kg 케타민을 및 무균 식염수에 희석 10 밀리그램 / kg Xylazine와 마우스를 마취. 깨끗하고 70 % 에탄올로 LED를 소독. 동물의 두피에서 머리카락을 제거하고 70 % 에탄올과 betadine을 교대 세 응용 프로그램과 두피를 소독. 다음 stereotaxic 프레임에 동물을 배치. 각막의 건조 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. stereotaxic 홀더에 커넥터를 연결합니다. 후각 망울 위에있는 두개골의 표면이 완벽하게 수평과 미니어처의 표면에 평행하게 LED 때까지 코 막대의 위치가 조정되어야합니다. </li><li> 메스를 사용하면 귀가 사후 3mm로 눈 앞쪽에 3mm에서 두피를 잘라. 이외에도 피부를 당겨와 클램프의 한 쌍의로 앵커. 면도날을 사용하여 두개골의 표면에있는 세포막을 떨어져 다쳤어요. 청소와 두개골을 건조. 후속 광고를 허용하는 cyanoacrylate 접착제의 얇은 커버를 적용치과 아크릴의 hesion. </li><li> 후각 전구를 통해, 고속 수술 드릴을 사용하여 사각형 craniotomy (5.1 mm 꼬리를 중심으로, bregma에서 측면 0mm 꼬리 1mm과 측면 3mm)을 수행합니다. 신중하게 얇은 두개골,이 작업을 수행하려면 뼈를만을 얇은 레이어는 유지까지. 조심스럽게 구부러진 주사 바늘의 도움으로 남은 뼈를 제거합니다. 특별한주의가 경질 물질을 펑쳐링 두 반구 사이 후각 구근의 꼬리 국경에서 거짓말의 주요 혈관을 rupturing 않도록 주의해야한다. 뇌 표면에 혈액 축적과 응고 조직에 최적의 조명 침투하는 걸로. craniotomy 및 멸균 식염수에 두뇌의 표면을 씻어 다음 두개골을 건조. </li><li> 커넥터 LED 모형을 연결합니다. 후각 전구의 상단에있는 LED 모형을 낮춥니다. 미니어처 LED의 주요 축은, 살균 염분 및 D와 클린 마우스의 주동이의 - 꼬리 축에 평행해야스피 두개골. 그런 다음 보안 치과 아크릴의 두 번째 레이어에 이어 아크릴의 첫 번째 계층 (즉, polycarboxylate 시멘트)와 두개골되었다. 이 작은 나사의 추가는 LED를 수정해야 할 수 있습니다. 나사는 두개골에 삽입 (LED 위치 후부)와 두 acrylics으로 덮여 있어야합니다. 아크릴 여전히 액체이지만, 치과 아크릴의 표면에있는 두피의 자유 모서리를 뒤로 당겨 및 접착제. 커넥터에 대한 아크릴을 적용 안됩니다. 아크릴이 강화된 후 stereotaxic 장치에서 동물을 제거하고 케이지로 돌아오기 전에 그것이 온난 패드를 복구하자. 동물은 적어도 7 일 동안 수술에서 회복하기 위해 자신의 새장에 격리 남아 있습니다. 또한, 동물은 즉시 비 steroidal 항염증성 진통제 (예 : Carprofen 4mg/kg)을 부여하고 3 일 수술을 다음 수 있습니다. LED가 실험 주입 전 및 종료 후 테스트해야합니다. </li><li> 가벼운 electri칼 케이블은 LED의 타이밍과 강도를 제어하는​​ 펄스 발생기 (석사 - 8)에 결합하여 LED를위한 전류 컨트롤러에 밧줄 동물을하는 데 사용됩니다. 얇은 케이블은 운동의 완전한 자유를 허용합니다. 커넥터의 극성을 존중 조심해. 반전 극성은 LED을 깰 수 있습니다. </li></ol> 3. 대표 결과 : ChR2 - YFP은 약 48 시간이 주사 후 신경을 transduced로 표현하고, 몇 개월 7 안정 유지됩니다. 그림 1은 15 일 이후 사출 paraformaldehyde - 고정 동물의 화살 섹션의 대표 사진입니다. 밀도 라벨 및 RMS에 주입 사이트의 크기를합니다. 신생아의 세포 다수의 후각 망울 (그림 1)의 서로 다른 레이어를 식민지로 RMS 따라 마이 그 레이션했습니다. 융합 단백질은 소마, dendrites, 그리고 쪽이 포함한 모든 신경 세포의 구획에 표시됩니다. 미니어처 LED impla ntation 큰 규모와 관심의 광범위한 지역의 저렴한 광학 자극 수 있습니다. 동물은 운동의 완전한 자유를 허용하는 가벼운 전기 케이블로 LED 컨트롤러에 곁에 있습니다. 두뇌 조직 및 ChR2 활성화의 문턱에서 빛을 확산을 특성화하여, 우리는 그 광학 활성이 LED의 표면 아래에 ~ 2mm (그림 2A)의 깊이에서 발생 될 수 예상하고있다. 의 기능 활성화를 모니터링하려면 ChR2은 - 표현 생체내에 신경을 C - fos,의 연결 활동의 마커의 표현은 반복적인 가벼운 자극 (그림 2B) 이후 분석하실 수 있습니다. 대안으로, 초점 가벼운 자극에 결합 ChR2 - 표현 뉴런의 체외 electrophysiological 녹음에 14을 수행할 수 있습니다. 마지막으로, 두 광자 대상 느슨한 - 패치 녹음은 생체내 9 LED 유사한 모형에 의한 ChR2 - 표현 대뇌 피질의 뉴런의 기능 활성화를 연구하는 데 사용되었습니다. ntent "&gt; <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3380/3380fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 십오일 주동이의 RMS에 lentivirus의 주사 후 마우스의 후각 망울의 saggital 섹션 ChR2 - YFP 주동이의 철새 스트림에 lentiviral 주사의 표현. 대표 공촛점 이미지. RMS의 마지막에서 OB의 다른 레이어로 마이 그 레이션 흩어져 YFP 신생아 뉴런의 존재를합니다. 신생아 세포 (95 %)의 대부분은 과립 세포 레이어 (GCL)와 dendrites에서 소마의 거짓말은 외부 Plexiform 층 (EPL)에서 arborize 과립 세포입니다. 신생아 뉴런의 작은 인구 사구체 층에있는 OB의 가장 표면 계층 (GL)까지 마이 그 레이션. 스케일 바, 100μm. dendrites에서뿐만 아니라 쪽이에서 ChR2 - YFP의 멤브레인 표현을 보여주는 신생아 과립 세포의 삽입, 높은 배율. 스케일 바, 20μm. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3380/3380fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 다이어그램의 새로운 과립 세포를 표현 ChR2 - YFP의 후각 망울 가벼운 - evoked C - fos 표현의 상단에 LED 심어. 이식 후각 전구 위의 LED의, 도식 그림. B, 보여주는 대표 공촛점 이미지를 두 번 표시 ChR2 - YFP + C - fos 일시간 후각 망울의 빛 자극 후 + 과립 세포. C - fos 표현은 토끼 반 C - fos 차 항체 (Calbiochem, 1:5000)와 A568 - 복합 백신 토끼 항체를 보조 (Invitrogen, 1:1000)를 사용하여 드러났습니다. 스케일 바, 10μm.

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<li>Alonso, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turning+astrocytes+from+the+rostral+migratory+stream+into+neurons%3A+a+role+for+the+olfactory+sensory+organ%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Turning astrocytes from the rostral migratory stream into neurons: a role for the olfactory sensory organ.</a> J. Neurosci. 28, 11089-11102 (2008).</li>
<li>Mouret, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Learning+and+survival+of+newly+generated+neurons%3A+when+time+matters%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Learning and survival of newly generated neurons: when time matters.</a> J. Neurosci. 28, 11511-11516 (2008).</li>
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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

Optogenetic 도구는 최근 후각 시스템에서 성인 태어난 뉴런의 연결을 포함하는 선택적 인구, 이상 우리의 통제를 증가하고있다. 여기 성인 태어난 뉴런의 특정 인구 ChR2 - YFP을 표현하는 lentiviral 벡터의 stereotaxic 주사를 수행하는 방법에 대해 설명합니다. 조심스럽게 기간 후 주사를 모니터링함으로써, 우리는 상대적으로 균일한 나이가 성인에서 태어난 뉴런의 일대의 활동을 분석하고 조작하실 수 있습니다. 때문에 그들의 낮은 확산 보급, 높은 전달 효율과 RMS의 neuroblasts을 위해 상대적으로 좋은 tropism의 lentiviral 벡터는 같은 retroviruses 또는 adeno - 관련 바이러스 (AAV)와 같은 다른 바이러스 벡터에 비해 선호되어야합니다. 그들이 선택적으로 같은 줄기 세포 또는 progenitors로 나누어 세포를 감염하기 때문에, 레트로 바이러스 벡터는 subventricular 영역에 주입 및 신생아 뉴런의 작은...

<table border="1"><tbody><tr><td> 자료 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 케타민을 </td><td> Merial </td><td> Imalgène 1000 </td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> 바이엘 건강 </td><td> Rompum 0.2 % </td></tr><tr><td> 피펫 풀러 </td><td> 셔터 </td><td> P - 97 </td></tr><tr><td> 유리 모세 혈관 (3.5 &quot;) </td><td> Drummond 과학 </td><td> 3 - 000-203 - G / X </td></tr><tr><td> Nanoject II Microinjector </td><td> Drummond 과학 </td><td> 3-000-204 </td></tr><tr><td> 고속 드릴 외과 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 18000-17 </td></tr><tr><td> 마이크로 드릴 철강 털은 0.7mm 팁 직경 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 19008-07 </td></tr><tr><td> LED 파란색 CMS 4.6 W </td><td> OSRAM </td><td> LBW5SN </td></tr><tr><td> 여성 전기 커넥터 (2.54 mm) </td><td> 피셔 Elektronik </td><td> BL5.36Z </td></tr><tr><td> LED를위한 전류 컨트롤러 (최대 : 1A) </td><td> A1W Electronik </td><td> HKO - KL50 - 1000 </td></tr><tr><td> 펄스 발생기 </td><td> AMPI </td><td> 마스터 - 8 </td></tr><tr><td> 광 파워 미터 </td><td> 토르 실험실 </td><td> PM100 </td></tr><tr><td> Cyanoacrylate 접착제 </td><td> Loctite </td><td> 454 </td></tr><tr><td> Polycarboxylate 시멘트 (첫 번째 레이어 시멘트) </td><td> Septodont </td><td> Selfast (# 0068Q) </td></tr><tr><td> 메타 크릴 레이트 시멘트 (두 번째 레이어 시멘트) </td><td> GC InternationalCorp. </td><td> Unifast 트라드 - 리퀴드 (# 339292) Unifast 트라드 - 파우더 (# 339114) </td></tr><tr><td> Carprofen </td><td> 화이자 </td><td> Rimadyl </td></tr></tbody></table>

만성에 대한 성인 태어나 강한 뉴런의 선택 바이러스성 전달 생체내에 optogenetic의 자극

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

지역 interneurons는 지속적으로 1-3 성인 설치류의 후각 망울에서 생성됩니다. 이 과정에서 측면 뇌실의 벽에서 신경 줄기 세포는 후각 망울에 도달하고 통합할 수있는 주동이의 철새 스트림 (RMS)을 따라 몇 밀리미터에 대한 마이 그 레이션 neuroblasts을 일으키다, 성인 neurogenesis했다. 다른 단계와 후각 회로 전부터으로 성인에서 태어난 뉴런 통합의 영향을 연구하기 위해서는 선택적으로 라벨과 뉴런의 특정 인구의 활동을 조작하는 것이 필요합니다. optogenetic 기술의 최근 발전은 정확하게 주위의 뉴런은 4,5 영향을주지 않고 뉴런의 특정 일대를 활성화하기 위해 조명을 사용하는 기회를 제공합니다. 여기, 우리들은 후각 망울에 도달하기 전에 RMS의 neuroblasts의 temporally 제한 일대에서 virally 표현 Channelrhodopsin2 절차의 시리즈 (ChR2) YFP를 제시하고 NE 성인 탄생이 될urons. 또한, 우리는 ChR2 - 표현 뉴런의 생체내 자극에 만성위한 LED 미니 이식해서 보정하는 방법을 보여줍니다.

후각 망울의 성인에서 태어난 뉴런은 optogenetically Channelrhodopsin2 - 표현 이식 미니어처와 함께 주동이의 철새 스트림과 만성 photostimulation에서 lentiviral 주사를 LED를 사용하여 조절할 수 있습니다.

만성에 대한 성인 태어나 강한 뉴런의 선택 바이러스성 전달 생체내에 Optogenetic의 자극

성체 설치류의 후각구에서는 국소 인터뉴런(Local interneurons)이 지속적으로 재생됩니다1-3. 성체 신경발생(adult neurogenesis)이라 불리는 이 과정에서, 신경 줄기세포는 ...

이 절차의 목적은 원격 제어를 통해 후각구 뉴런을 활성화하고, 이러한 활성화가 행동에 어떠한 영향을 미치는지 관찰하는 것입니다. 이는 성체 쥐의 표적 뉴런에 렌티바이러스 벡터를 정위 고정 주입하여 YFP와 결합된 channelrhodopsin-2 유전자를 도입함으로써 이루어집니다. 그 후, 뇌로 전달되는 빛의 양에 대한 전반적인 개념을 설정하기 위해 LED를 보정하고 이식 준비를 수행합니다.절차의 마지막 단계는 LED를 후각구 위에 이식하여 적절한 위치에 고정하고 부착하는 것입니다. 최종적으로, c-Fos, 면역 염색 및 행동 테스트 결과를 통해 뉴런의 활성화를 확인합니다. 표준 전기 자극이나 약물적 섭동과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 표지된 뉴런에 대한 광유전학적 자극이 활성화되는 뉴런의 종류와 수 모두에 대해 매우 특이적이라는 점입니다.이 기술은 정밀한 시간적 및 공간적 제어가 가능하다는 점에서 신경퇴행성 질환의 치료나 진단에 활용될 수 있습니다. 또한, 이 방법은 후각 신경망 내 성체 골신경 세포의 역할에 대한 통찰을 제공할 수 있습니다. 이는 피질 또는 뇌 폐신경 세포와 같은 다른 표면 영역에도 적용 가능합니다.먼저 -80°C 냉동고에서 준비된 벡터 타이터(vector titers)를 꺼냅니다. 사용 전까지 냉동 상태를 유지하고, 남은 타이터는 폐기하십시오. 가위로 풀드 보로실리케이트 유리 피펫(pooled boro silica glass pipettes)의 팁 끝부분을 자릅니다.목표는 직경 30~40 micron의 팁을 제작하는 것입니다. 준비된 피펫은 먼지가 없는 보관함에 보관하십시오. 다음으로, 마이크로 인젝터를 설정하여 미네랄 오일로 준비된 역충전액(back filler) 50 nanoliters를 주입하고, 이를 정위 고정 장치(stereotaxic frame)에 부착된 마이크로 인젝터 플런저에 삽입하십시오.바이러스 역가(titer)를 해동한 후, 유리 피펫에 들어 있는 오일을 일부 비우고 그 자리를 역가 용액으로 다시 채웁니다. 멸균된 파라필름 조각 위에 바이러스 2 µL를 옮깁니다. 유리 피펫을 액적 속으로 조심스럽게 내려 1~2 µL의 바이러스를 피펫에 채웁니다.피펫에 기포가 없는지 확인한 후, 멸균 식염수에 희석한 케타민과 자일라진을 사용하여 마우스를 마취하고 동물 준비를 진행합니다. 절차를 진행하기 전, 발가락 꼬집기와 같은 통증 자극에 마우스가 반응하지 않는

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

우리는 여기서 쥐, 인간의 비강 충치의 후각 점막 조직 검사로 연구를 해왔하는 방법을 설명합니다. 이러한 biopsies은 뇌 질환의 분자 변이를 식별하거나 뇌 손상 / 질병의 동물 모델에 세포 이식을 위해 활용할 수 multipotent 성인의 줄기 세포를 분리하거나 사용할 수 있습니다.

설치류 또는 인간의 네이절 강한 줄기 세포를 분리

우리는 lentiviral 하나의 후각 감각 신경 세포의 축삭의 유전자 조작과 시각화를위한 기술 및 터미널 arborization을...

강한 감각 뉴런의 Lentivirus - 중재 유전자 조작 및 시각화 생체내에</em

유전자 조작의 시간적 및 공간적 해상도는 그들이 교란 수있는 생물 학적 현상의 스펙트럼을 결정합니다. 여기 temporally과 공간 개별...

결합을 사용하여 타겟팅 후각 망울의 뉴런 VIVO에서 Electroporation 및 Gal4 기반 향상제 트랩 Zebrafish 라인

ChR2을 표현 성인에서 태어난 뉴런은 후각 신경 회로의 기능들에 대한 그들의 기여를 검토하기 위해 슬라이스 electrophysiological 준비로 조작할 수 있습니다.

뉴런의 사진 자극에 저렴한 LED 배열을 사용하여

우리는 시험관 내에서 신경 세포 집단을 광자극하기 위해 광유전학적 접근 방식을 사용하여 전뇌 회로의 기능적 지형 및 시냅스 특성을 특성화하는 방법을 설명합니다.

광유전학적으로 표적화된 전뇌 회로의 레이저 스캐닝 광자극

광유전학은 행동 신경과학 실험에 사용할 수 있는 강력한 도구가 되었습니다. 이 프로토콜은 레이저 시스템의 설계 및 설정에 대한 단계별 가이드를 제공하며, 대부분의 설치류 행동 테스트 패러다임과 호환되는 다중 및 동시 생체 내 광유전학적 자극을 수행하기 위한 전체 프로토콜을 제공합니다.

설치류 중추 신경계의 생체 Optogenetic 자극

우리는 뉴런 형태와 시간 경과에 따른 발달을 시각화하기 위해 전기천공법과 후속 컨포칼 레이저 스캐닝 또는 다광자 현미경에 의한 후각 감각 뉴런의 생체 내 라벨링 프로토콜을 설명합니다.

모델로 후각 시스템은 축삭 성장 패턴 및 형태를 연구하는 생체

이 프로토콜의 목표는 특정 국소 신경 회로의 화학 유전적 조작에 응하여 성인 신경 줄기/전구 세포의 행동을 분석하기 위한 접근법을 설명하는 것입니다.

성인 해마 신경 전구세포의 회로 특정 조절 을 시술

생체 외 뇌 조각은 구 심성 입력에 대한 유발 반응에 대한 휘발성 마취제의 효과를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 광유전학은 시상피질 및 피질 피질 구심성을 비원발성 신피질에 독립적으로 활성화하는 데 사용되며 시냅스 및 네트워크 반응은 이소플루란으로 조절됩니다.

뇌 조각에서 구 심성 경로의 광유전 적 활성화 및 휘발성 마취제에 의한 반응의 조절

여기서 우리는 급성 설치류 뇌 조각에서 시냅스 특이적 전기생리학적 특성을 허용하기 위해 광유전학적 구조를 가진 분리된 뇌 영역의 바이러스 형질도입을 설명하는 프로토콜을 제시합니다.

생체 외 내측 전두엽 피질에서 외측 내후각 피질까지의 장거리 시냅스 전달 및 가소성에 대한 광유전학적 심문

여기에서는 초파리 청소년 뇌에서 더듬이엽 시냅스 사구체의 후각 경험 의존적 리모델링을 유도하고 분석하는 방법을 설명합니다.

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period(어린 뇌 후각 감각 뉴런 시냅스 연결성의 경험 의존적 리모델링)

배우세요 후각구 뉴런의 광유전학적 활성화 방법을 통해 성인 신경발생과 행동 변화를 연구하는 기술입니다. Channelrhodopsin2 렌티바이러스 주사와 LED 임플란트를 사용하여 정밀한 뉴런 자극이 가능합니다.

만성에 대한 성인 태어나 강한 뉴런의 선택 바이러스성 전달 생체내에 Optogenetic의 자극

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