Name: 메인 스트림 담배 연기에 자유 래디 칼을 감지하고 가스 단계 청소를위한 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: 배우세요 담배 연기의 자유 라디칼을 ESR 분광법으로 정량 분석하고 식물성 항산화제의 소거 효과를 평가하는 방법을. 이 기술은 유해 물질 분석에 활용됩니다.

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이 작품은 건강의 국립 연구소 부여 번호 NIH / NCRR P41 - RR 016,292 (ACERT에 대한)에 의해 지원되었다.

1. 자료 이 작품에 사용된 모든 용매는 시약 등급 있었다. 스핀 N - tert - 부틸 - α - phenylnitrone (PBN)와 표준 스핀 라벨을 포함하여 트랩, 2,2,6,6 - tetramethyl - 1 - piperinyoxyl이 (템포) 시그마에서 얻은되었고 공급으로 사용되었습니다. 공장 산화 억제제는 Swanson, 주식 회사 미국에서 상업적으로 획득했다. 2. 자유 래디 칼의 담배 연기 및 분석의 준비 <ol><li> lycopene은 아세톤에 녹아있는 동안 필터에 산화 억제제를 소개하려면, 산화 억제제의 pycnogenol과 포도 종자 추출물 먼저, 95 % 에탄올에 용해되었다. 솔벤트 볼륨 항산화 용해도에 따라 달랐다. </li><li> 0.4의 산화 억제제의 양은 MG / 필터가 사용되었습니다. 그들은 다음 활성탄의 10 MG로 코팅했다. 이런 목적을 위해 활성 탄소 필터와 진공 하에서 건조 무산소 조건에서 항산화 솔루션 ~ 12 시간을 위해 흔들되었다. </li> 산화 억제제는 다음 종래의 아세테이트 필터 (CA 필터)에 도입되었습니다. 이를 위해 필터를 두 조각으로 절단되었다. 항산화 필터 샌드위치 (그림 1A) - 코팅 공장 산화 억제제는 필터를 형성하기 위해 필터와 테이프의 조각으로 싼 두 조각 사이에 삽입되었습니다. 이 결합된 필터는 이후에 담배를 포함하는 담배 막대에 붙어 있 었지. 필터가없이 항산화 제외 항산화 필터와 같은 방식으로 만들어진 컨트롤이 추가되었습니다. <li> 전에 흡연 시뮬레이션하는 연구 담배는 압축을 푼 2 일 최소 포화 NaBr 솔루션을 사용하여 일정한 습도 환경 (20 ° C, 60 % 상대 습도)에 보관되었다. </li><li> 일상적인 분석을 위해 흡연 시뮬레이션이로 Fig.1과 같이 단일 포트 흡연 장치를 사용하여 주위 온도에서 공연되었다, 물 흡인기 또는 GAST DOA - P104 - BN의 진공 펌프 / 공기 압축기 (벤톤 하버, Mich) 연결로 구성되어 있습니다 스핀 - 트래핑하기오픈 한 쪽 끝에있는 T - 교차점을 통해 조립. 퍼프는 퍼프 사이에 열어 두었던 오픈 엔드를 연결해에 의해 수행되었다. 가스 흐름이 유량계에 의해 체크 ~ 2.2에 설정된 SCFH = 17.5 펌프와 통풍구 사이에 위치 밸브를 조정하여 ML / s의. </li><li> 연구 담배는 1과 비슷한 60 초마다 반복 이초의 기간 동안 35 ML의 퍼프 볼륨의 상태에 따라 훈제했다. 가스 상 자유 래디 칼의 양적 추정을위한 흡연 시뮬레이션으로 그림에 표시된 스핀 트래핑 시스템과 연계하여 수행되었다. 1. </li><li> 열 강한 퍼프 (35 ML / 퐁퐁)은 각 담배에 대한 촬영했다. 가스 상 자유 래디 칼은 캠브리지 필터 패드를 통해 MCS를 전달하여 수집된 후 스핀 트래핑 솔루션 (벤젠, 2.0 ML에서 0.05 M PBN)에 도입되었습니다. </li><li> 마지막 퍼프 후, 부풀어 오른 트래핑 솔루션은 동일한 벤젠과 초기 볼륨 (2.0 ML)로 재조정했다. 나누어지는는 ~ 25 안으로 옮겨졌 다가길이 0mm, 한쪽 끝에 봉인 3mm의 ID 유리관. </li><li> 트래핑 솔루션은 냉동 펌프 - 해동 절차를 사용 deoxygenated되었습니다. 그것은 액체 질소에 따라 냉동었고, 진공이 적용되었습니다. 그렇다면 그것은 함정에 가스 거품이 탈출 수 있도록, 아르곤 분위기 하에서 해동되었고, 다시 냉동. 이 사이클은 세 번 반복 후, 튜브했습니다 불꽃 - 밀봉 진공하에 추가적인 ESR 측정에 사용. 벤젠에 잘 용해됩니다 산소, 유기 래디 칼의 ESR 라인을 넓혀 때문에이 단계가 필요합니다. 탈산소 반응은 극적으로 신호 대 잡음 비율을 향상시킵니다. </li><li> X - 밴드 ESR 스펙트럼은 표준 조건에서 9.34 GHz의 주파수에서 Bruker EMX 분광계에 기록되었다. 대부분의 실험에 사용되는 분광계 설정되었습니다 : 센터 현장 3312.5G, 스캔 폭 80G, 변조 진폭 0.5G, 시간 상수 82 마이크로초, 검사 시간 40 초. </li><li> 스핀 트랩 부가물 어떤 경우에는 req 실험 조건에서 비교적 안정일반적으로 ~ 20 분 데려 25 쌓일, uired. 그러나, 12 시간 이후 벤젠 용액의 ESR 신호의 강도가 ~ 5 요소에 의해 감소​​. </li><li> 트래핑 adduct의 농도를 정량하기 위해 초기 처음 유도체 ESR 스펙트럼이 통합되었습니다. 그 결과 흡수 스펙트럼의 연기에 포함된 검댕 / 타르 제품에 따라 가능성이 가장 광범위한 일중 배경을 보여줍니다. 뺄셈 후에이 배경의 트래핑 adduct의 분리 삼인승는 한 번 더 (그림 2) 통합되었습니다. </li></ol> 3. 대표 결과 담배 생산 연기 (기상)를 굽기에있는 자유 래디 칼의 대부분은 즉시하고 불안정하고 있습니다. 이러한 래디 칼을 관찰하기 위해 스핀 트랩 기술을 채용합니다. 그것은보다 안정되고 ESR (Fig.1)에 의해 감지 수있는 스핀 adduct로 그들을 변환하여 가스 상 자유 래디 칼을 캡처합니다. 0.05의 현재 연구에서 스핀 - 트랩 솔루션M PBN 15을 구분하기가 어렵습니다 산소와 탄소 중심의 래디 칼의 혼합 아르 자유 래디 칼, 위상 연기 가스를 수집하기 위해 사용되었다. 우리의 경우에는, 그러나, 관찰 초미세 분리 상수 N = 13.7G와 H = 1.95G들이 주요 제품에 것을 제안, alkoxyl 자유 래디 칼 (RO.) 2 부가물를 트래핑에 해당하는 값이 매우 유사합니다. 우리는 연기의 흐름에 습기로 인해 있다고 약한 ESR 신호 (그림 2) 초기 측정에서 관찰 낮은 재현성을 보여주었다. 이 문제를 해결하기 위해, 우리는 캠브리지 필터와 스핀 트랩 솔루션 사이에 액체 질소 (LN2) 트랩을 추가했습니다. 에선이 함정 급속 냉동하여 MCS 흐름에서 물을 제거하고 유리관의 내벽에 캡처. 이것은 크게 ESR 신호를 개선하고 높은 재현성 결과를 (그림 3) 허용. 함정 자유 래디 칼의 금액을 사용하여 결정되었다참고 샘플. 컨트롤 샘플 산화 억제제없이, 템포 알려진 농도의 이중 적분 스펙트럼과의 이중 적분 스펙트럼의 비교에 의해 예상 벤젠의 전형적인 adduct 농도는 1.24 μm의 (Fig.2)되었습니다. 공기의 양이 흡연하는 동안 각각의 담배 통과 이후 ~ 350 ML, 이것은 ~ 7.1X10 -9 M의 MCS의 가스 단계에서 자유 라디칼 농도에 대한 견적을 제공하고, 래디 칼의 총 숫자는 가스 단계에서 덫에 걸렸다 ~ 1.5X10 15 전체 담배. 가스 및 미립자 단계 모두 포함한 전체 담배의 연기에 자유 래디 칼의 총 금액에 대한 견적은 16 ~ 10 자유 래디 칼 9했습니다. 메인 스트림 담배 연기의 가스 단계 자유 래디 칼에 식물 산화 억제제의 청소 효과의 다른 수준이 관찰되었다. 그들의 청소 요금은 그림에서 소개되었습니다. 4. Lycopene과 포도 씨앗 추출물은 가장 높은 속도를 보여주 낮은 반면어 속도는 pycnogenol (Fig.4)에 대한 관찰되었다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 스핀 트랩을 사용하여 주류 담배 연기 (MCS)에서 가스 위상 자유 래디 칼을 수집에 대한 개선 흡연 시뮬레이션 설계의 도표. MCS는 다음 CA 필터, 캠브리지 필터 (노란색 필터)를 통해 물 흡인기에 의해 그려진 및 H 2 O.을 제거하는 액체 질소 트랩 통과되었다 가스 상 제품은 마침내 함정을 스핀에 가서 스핀 트랩 솔루션을 통해 부풀어 오른 모양이었다. 식물 항산화는 MCS의 자유 래디 칼을 청소하기 위해 담배에 부착 (동그라미로 확대) 종래의 아세테이트 필터의 두 가지 사이에 위치했다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 벤젠의 스핀 - 트래핑의 adduct 농도에 대한 양적 평가는 첫 번째 integra에서 광범위한 배경 신호를 빼서 필요내 스펙트럼. 스핀 - 트래핑의 adduct에 대한 초미세 분리 매개 변수 H = 1.95 G, N = 13.7G입니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 3"> 그림 3. LN2 트랩을 통해 전달이 상당히 MCS의 스핀 - 트래핑 얻은 ESR 신호의 품질을 향상시킵니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig4.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 4"> 그림 4. MCS의 자유 래디 칼의 농도에 자연 산화 억제제의 효과. 상대 신호 농도는 다음과 같습니다 제어 - pycnogenol 100 % - 55 %, 포도 종자 추출물 - 12 %, lycopene - 10 %.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

담배 연기에있는 다른 자유 라디칼 청소부의 효과의 신뢰성 추정은 자유 래디 칼의 양적 검출을위한 기술을 재현할 수 있어야합니다. 이전 1, 그것은 비 극성 용매에서 높은 농도 스핀 트랩 솔루션의 작은 볼륨이 담배 연기에서 자유 래디 칼을 트래핑에 가장 효과적인 것으로 나타났습니다. 담배 연기는 항상 유기 화합물의 연소 및 트래핑 용매에 끝날 수있는 담배의 잔류 수분에서 수증기가 포함되어 있습니다. PBN의 스핀 트랩 용액에 물이 혼합물은 크게 스핀 트래핑 부가물의 수명과 ESR 신호의 강도를 감소시킵니다. 가스 상 래디 칼의 일부 분율도 얼어붙은 표면에 갇혀있을 경우에도 액체 질소로 냉각 U 자형 튜브를 통하여 간단하게 통과 MCS하여 수분을 제거하면 크게, 우리의 실험에서 ESR 스펙트럼의 품질을 개선. t를 사용그의 기술은 우리가 담배 필터에 도입된 천연 화합물을 다른 급진 -​​ 소기의 상대적 효율성을 비교. 우리는 lycopene과 포도 씨앗 담배 필터로 통합 후 기상 MSC에서 자유 래디 칼의 90 %까지 청소하실 수 있습니다 즉시 추출 것으로 나타났습니다. 이러한 높은 청소 능력은 헤모글로빈과 shikonine 8,14 같은 가장 효율적인보고 자유 라디칼 프로텍터 중에서이 저렴한 즉시 사용 가능한 천연 화합물을 차지한다. 그러나, 공부 천연 산화 억제제와 함께 로드된 실험의 담배 필터에 실온에서 스토리지 일주일 후 그들의 소기 용량의 눈에 띄는 부분을 잃었습니다. 이 문제를 해결하는 것은 lycopene과 상업 담배 필터의 포도 종자 추출물 미래의 애플 리케이션을 자극 수 있습니다.

메인 스트림 담배 연기에 자유 래디 칼을 감지하고 가스 단계 청소를위한 프로토콜

A Protocol for Detecting and Scavenging Gas-phase Free Radicals in Mainstream Cigarette Smoke

흡연은 인간의 암와 관련된 것입니다. 이것은 폐암 사망자의 대부분은 흡연 5,6,7,12로 인해 발생하는 것이보고되었습니다. 담배 연기의 입자 단계에서 담배 tars 및 관련 제품이 발암성 및 mutagenic 관련 질병의 주요 원인이지만, 담배 연기도 9,10 물질들의 중요한 그룹으로 간주됩니다 자유 래디 칼의 상당 금액을 포함하고 있습니다. 자유 래디 칼은 손상 단백질 구조, lipids과 DNA 시퀀스에 의해 세포 성분을 공격하고 암 다양한 형태의 개발의 위험을 증가시킵니다. 흡입 급진파는 폐 3 담배 연기의 부정적인 건강 효과를 많은 기여 부가물을 생산합니다. 연구는 흡연 유발 손상의 위험을 감소하기 위해 담배 연기에 자유 래디 칼을 줄이기 위해 실시되었습니다. 이것은 헤모글로빈과 헴이 함유 화합물 것은 부분적으로 질산 산화, 반응을 청소 수있는 것으로보고되었습니다oxidants와 담배 연기의 4 발암성 휘발성 nitrosocompounds. 헤모글로빈과 활성탄은 자유 래디 칼을 청소하고 담배 연기 14에서 자유 래디 칼의 90 %까지 제거하는 데 사용된의 &#39;바이오 필터&#39;는 구성된. 그러나, 비용 비효율로 인해, 그것은 성공적으로 상용화되지 않았습니다. 또 다른 연구는 shikonin, 중국 한방 의학 8 구성 요소의 좋은 청소 효율을 보여주었다. 현재 연구에서는, 우리는 스핀 - 트래핑을 사용하여 주류 담배 연기에 가스상 자유 래디 칼의 청소 효과 (MCS)의 담배 연기 및 측정의 가스상 자유 래디 칼을 청소에 대한 담배 필터에 일반 자연 항산화 추출물을 도입을위한 프로토콜을보고 전자 스핀 공명 (ESR) 분광학 1,2,14. 우리는 lycopene과 담배 필터에 자신의 미래의 응용 프로그램을 가리킨 수있는 포도 종자 추출물의 높은 청소 능력을 보여주었다. 이 프로의 중요한 이점pective 청소부들은 각각 토마토 또는 와인 산업의 부산물 11,13에서 대량으로 얻을 수있다는 것입니다

스핀 - 트래핑 ESR 분광법은 공장 산화 억제제 lycopene, pycnogenol와 담배 연기의 가스 상에게 자유 래디 칼을 청소에 포도 종자 추출물의 효과를 연구하는 데 사용되었다.

흡연은 인간의 암 발생과 관련이 있습니다. 대부분의 폐암 사망 원인이 흡연인 것으로 보고되었습니다 5,6,7,12. ...

이 절차의 전반적인 목표는 주류 담배 연기 내의 자유 라디칼 양을 측정하고, 여러 항산화제의 소거 능력을 평가하는 것입니다. 이를 위해 먼저 여러 가지 서로 다른 소거 화합물이 포함된 필터와 소거 필터가 없는 대조군을 준비합니다. 준비 후에는 연구용 담배의 연기를 스핀 트래핑 용액에 통과시켜 흡연 시뮬레이션을 수행합니다.전자 스핀 공명(ESR로 약칭함)을 사용하여 트랩된 라디칼 및 표준 시료의 스펙트럼을 기록합니다. 다음으로, 얻어진 ESR 스펙트럼을 일상적인 분석에 회부하여 배경 신호로부터 트랩된 기상 라디칼의 신호를 분리하고, 표준 시료를 사용하여 라디칼 농도를 정량화합니다. 최종적으로, 스핀 트래핑 ESR 분광법을 통해 주류 담배 연기 내 자유 라디칼 함량에 대한 정량적 정보와 천연 항산화제의 소거 능력 추정치를 결과로 나타냅니다.가스 크로마토그래피와 같은 기존의 담배 연기 분석 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 ESR이 자유 라디칼에 특히 민감하다는 것입니다. 자유 라디칼은 주요 발암 물질 그룹이므로, 이 기술의 응용은 담배 연기의 유해한 영향을 줄이는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법은 담배 연기 내의 자유 라디칼 연구에 대한 통찰력을 제공할 수 있으며, 산업용 배기가스나 매연과 같은 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다. 전자 스핀 공명 기술을 위한 National Biomedical Research Center(CERT로도 알려짐)는 현대적인 ESR 기술 개발 분야에서의 광범위한 경험을 통해 성장하였습니다.전자 스핀 공명 연구자들을 위해, 당사는 해당 연구자들과 생의학 커뮤니티를 위한 광범위한 서비스를 제공하고 있습니다. 당사는 담배 필터에 항산화제를 도입하기 위해 시설을 정기적으로 개방하고 있습니다. 우선, 항산화제인 pycnogenol과 포도 추출물을 95% ethanol에 녹이고, lycopene을 acetone에 녹입니다.항산화제의 용해도에 따라 용매의 부피를 조절하십시오. 다음으로, 용해된 항산화제와 활성탄을 혼합하고 혐기성 조건에서 약 12시간 동안 교반하십시오. 혐기성 조건은 교반하는 동안 혼합물에 Argonne을 버블링하여 유지합니다.배양 후, 용액을 여과하고 진공 상태에서 건조합니다. 그런 다음, 일반적인 아세테이트 필터를 두 조각으로 잘라 항산화제와 탄소를 투입합니다. 코팅된 식물성 항산화제를 필터 두 조각 사이에 끼워 항산화 필터 샌드위치 형태를 만든 후, 이를 다시 담배 종이 실린더 안에 삽입합니다.실험 설정 전 항산화제를 첨가하지 않는다는 점을 제외하고, 대조군 필터를 항산화제 필터와 동일한 방식으로 준비합니다. 연구용 담배는 포장을 제거한 후, 포화 브롬화나트륨 용액을 이용하여 최소 이틀 동안 일정한 습도 환경에서 보관해야 합니다. 담배 잎이 포함된 담배 스틱을 꺼내어 결합된 필터에 부착합니다.한쪽 끝이 개방된 T-분기점을 통해 스핀 트래핑 장치에 연결된 워터 에스피레이터 또는 진공 펌프/공기 압축기로 구성된 단일 포트 흡연 장치를 사용하여 상온에서 일상 분석을 위한 흡연 시뮬레이션을 수행합니다. 유량계를 사용하여 가스 유량을 확인하고, 펌프와 통기구 사이에 설치된 밸브를 조절하여 약 2.2 standard cubic feet per hour로 설정합니다. 연구용 담배를 35 milliliters의 강한 흡입량으로 2초 동안 흡연하고, 이를 60초마다 반복합니다.흡연 장치의 개방된 끝부분은 흡입 시에는 막고, 흡입 사이에는 열어두어야 합니다. 끝부분을 열어두면 담배를 통해 공기가 거의 흐르지 않으며, 이는 흡입 사이의 조건에 해당합니다. 각 담배에 대해 10회의 강한 흡입을 실시하며, 이때 주류 담배 연기를 Cambridge 필터 패드에 통과시킨 후 스핀 트래핑 용액에 도입하여 기상 자유 라디칼을 수집합니다.액체 질소 트랩은 주류 연기에서 수증기를 제거하지만, 기상 라디칼에는 실질적인 영향을 미치지 않습니다. 마지막 퍼프 이후, 버블링된 트랩 용액의 일부를 내부 직경 3mm, 길이 약 10인치의 유리 샘플 튜브에 옮깁니다. 산소는 ESR 스펙트럼을 넓히고 분석법의 민감도를 감소시키므로, 먼저 튜브를 액체 질소에 담근 후 오일 펌프로 용액을 진공 상태로 만들고, 이어서 아르곤 기체 하에서 용액을 해동시키는 동결-펌프-해동법(freeze pump thaw method)을 사용하여 용액 내 산소를 제거합니다.이 동결-펌프-해동 과정을 여러 번 반복하십시오. 그다음, 진공 상태에서 튜브를 밀봉하십시오. 이제 튜브 준비가 완료되었습니다.추가적인 ESR 측정을 위해, Bruker EMX 분광계에서 9.34 gigahertz 주파수로 X-band ESR 스펙트럼을 기록하십시오. 표준 조건 하에서 사용되는 일반적인 분광계 설정값은 서면 프로토콜을 참조하십시오. 본 실험에서는 25회의 ESR 누적 측정을 수행하며, 이는 통상적으로 약 20분이 소요됩니다.스핀 트랩 부가물은 12시간 후 실험 조건에서 비교적 안정적이었으나, 벤젠 용액 내 ESR 신호의 강도는 5배 감소했습니다. 트래핑 부가물의 농도를 정량화하기 위해, 초기 1차 도함수 ESR 스펙트럼을 적분하십시오. 결과로 얻어진 흡수 스펙트럼은 넓은 싱글렛 배경을 보여주며, 이는 아마도 연기에 포함된 그을음 및 타르 생성물 때문일 가능성이 큽니다.이 배경값을 뺀 후, 트래핑 어덕트의 분리된 트리플렛을 적분하십시오. 자유 라디칼 농도를 구하기 위해 한 번 더 반복합니다. 스핀 트래핑 용액의 이중 적분 값은 본 실험에서 입증된 기지 농도의 니트로스 라디칼 tempo 용액의 값 및 서면 프로토콜에 기재된 추가 계산 값과 비교합니다.주류 담배 연기의 기상 내 자유 라디칼 농도는 약 7.1 × 10⁻⁹ M로 측정되었습니다. 이를 통해 담배 한 개분의 기상에서 포집된 총 라디칼 수는 약 1.5 × 10¹⁵개인 것으로 결정되었습니다. 본 실험 과정 중 초기 측정에서는 연기 흐름 내의 수분으로 인해 ESR 신호가 약하고 재현성이 낮게 나타났습니다.이 문제를 해결하기 위해, 캠브리지 필터와 스핀 트랩 용액 사이에 액체 질소 트랩을 흡연 시뮬레이션 장치에 추가하였습니다. 액체 질소 트랩은 주류 담배 연기 흐름 속의 수분을 급속 동결시켜 유리관 내벽에 포집함으로써 제거하였습니다. 이를 통해 ESR 신호가 크게 개선되었으며, 높은 재현성의 결과를 얻을 수 있었습니다.담배 주류 연기 내 기상 자유 라디칼에 대한 식물성 항산화제의 서로 다른 소거 효과 수준이 관찰되었으며, 그 소거율이 제시되었습니다. 라이코펜과 포도씨 추출물이 가장 높은 비율을 보인 반면, 피크노제놀은 더 낮은 비율을 보였습니다. 이 기술을 숙달하면 적절하게 수행했을 때 1시간 이내에 완료할 수 있습니다.해당 절차를 시도할 때, 연기를 액체 질소 트랩에 통과시키는 것이 중요합니다. 이는 SR 스펙트럼의 품질과 개발 후의 재현성을 향상시킵니다. 이 기술은 보건 및 환경 분야 연구자들이 다양한 휘발성 화합물 내에서 건강을 위협하는 자유 라디칼의 존재를 탐색하고 검출 수준을 높이는 데 도움을 주었습니다.영상을 시청한 후, 흡연의 유해한 영향을 줄이기 위해 주류 담배 연기 내의 자유 라디칼을 정량화하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

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