Name: 해부 Zebrafish 배아 심장의 Immunostaining (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: 배우세요 제브라피쉬 배아 심장의 해부 면역염색법으로 고해상도 세포 구조를 관찰하는 방법을. 이 기술은 항체 침투력을 높여 전통적인 전체 마운트 염색보다 처리 시간을 단축하고 선명한 이미지를 제공합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

우리는 zebrafish 축산 그의 도움 Beninio Jomok 주셔서 감사합니다. 이 작품은 NIH HL81753으로 후원됩니다.

1. 슬라이드의 준비 및 humidified 챔버 <ol><li> humidified 챔버는 비운 팁 박스 같은 상자에서 만들 수 있습니다. 챔버와 빛으로부터 샘플을 보호하기 위해 알루미늄 호일로 커버를 모두 넣어. </li><li> 챔버 내부, 건조에서 심장 샘플을 방지할 수 있습니다 챔버 내의 습도를 유지하기 위해 젖은 종이 수건 더미를 넣어. 슬라이드에 선반으로 종이 타월 위에 작은 microplate를 설정합니다. </li><li> 5x5 mm에 대한 차원과 심장 샘플 우물을 할 수있는 immEdge의 펜을 사용하여 현미경 슬라이드의 표면에 선 또는 원을 중 하나를 그립니다. 슬라이드가 건조하자. </li><li> humidified 챔버에 슬라이드를 넣고 각 우물에 50ul 신선한 4 % 포름 알데히드를 추가합니다. </li></ol> 2. 배아 심장의 해부 <ol><li> 생선 정지 몸 움직임까지 약 1 분 0.4 % tricaine을 포함 E3 계란 물 7 물고기의 배아를 마취 그래도 정상적인 마음을 가지고구타. </li><li> 해부 현미경의 무대에 오목 현미경 덮개를 씌우고. concaved 잘 수있는 배아를 전송합니다. </li><li> 명확하게 마음을 나타내기 위해 해부 현미경의 빛을 조합을 조정합니다. 개인 선호에 따라, 그것은 어두운 필드 또는 DIC과 같은 편광 상태 중 수 있습니다. </li><li> 다음 건조, 75 % 에탄올 두 개의 인슐린 주사기를 청소합니다. </li><li> 심장에 더 높은 배율과 집중 해부 현미경을 조정하십시오. 실제로 머리에 가까운 노른자 - 체절 경계 하나의 바늘 끝부분을 삽입하여 배아를 해결할 수 있습니다. 심장 지역에 다른 바늘 가까이를 삽입하고 신속하게 심장을 가져옵니다. 심장이 완전히 배아로부터 분리되지 않을 경우 심장과 노른자 사이에 남아있는 연결 조직을 잘라. </li><li> 분리된 심장에 낮은 배율과 초점 현미경을 조정합니다. 10μl pipetteman을 사용하여 1μl 볼륨으로 설정합니다. 중 그리거나 만지지로 pipetteman의 팁을 적용격리된 심장 내에서 또는 팁의 표면에 부착하거나되도록 심장 샘플. </li><li> 준비된 슬라이드에 4 % 포름 알데히드 용액에 피펫 팁을 찍어 및 솔루션에 마음을 공개하는 피펫 피스톤을 놓으면 되죠. 물 표면의 장력은 또한 피펫 팁에서 솔루션 마음을 출시하는 데 도움이됩니다. 각 잘 3 마음보다 놔. </li></ol> 3. Immunostaining <ol><li> 챔버를 닫고 부드러운 출렁 이는 운동과 함께 흔드는에 넣어. 상온에서 20 분 심장 샘플을 수정. </li><li> 슬라이드의 뒷면에있는 물을 닦아 및 교환 버퍼에 대한 해부 현미경의 무대에 슬라이드를 넣어. </li><li> 각 우물에 빈 영역에 10μl pipetteman에서 팁을 딥과 심장 표본에서 최대한 팁을 유지. 솔루션 끝에 그려진 때 마음은 물 흐름과 함께 이동 수도 있기 때문에, 팁에 연결 마음을 피하기 위해주의를 가져가라. 변화필요한 경우 팁 현지화. </li><li> 조직에 솔루션을 폐기하고 심장 샘플 쉽게 기포의 존재에 손실이기 때문에 끝에 거품을 생산하지 마십시오. 짧은 시간 동안 심장 샘플 부분적으로 건조 유지하면 마음이 슬라이드에 부착된 계속 도움이 될 수 있습니다. </li><li> 심장 샘플을 커버 5 분 느린 출렁 이는 운동의 humidified 챔버에서 부화 50μl PBST를 추가합니다. 한 번 더 씻어 반복합니다. 이 단계 후, 심장 샘플 4 humidified 챔버 최대 일주 ° C.에 저장될 수 있습니다 </li><li> 상온에서 1 시간 PBST에서 10 % 양의 혈청과 심장 샘플을 차단합니다. </li><li> 이러한 β - catenin 항체의 1:200 희석 및 mef2 특정 항체의 1:200 희석과 같은 기본 항체와 심장 샘플을 품어, 10 % 양의 실온에서 1 시간 동안 혈청 / PBST. </li><li> 상온에서 PBST 세 번 (5 분. 각)과 심장 샘플을 씻으십시오. </li><li> 보조로 샘플을 품어PBST에서 0.5 시간 동안 이러한 알렉사 - 태그 안티 - 마우스 및 / 또는 방지 토끼 항체의 1:1000 희석으로 항체,. </li><li> PBST로 세 번 심장 샘플을 씻으 (5 분. 각) 실온에서합니다. </li></ol> 4. 이미징 <ol><li> PBST를 제거하고 각 잘 ~ 10 μl 장착 매체를 추가합니다. 솔루션은 분명해진다 때까지 몇 분 동안 곳에는 바위. </li><li> 장착 매체의 대부분을 제거하고 현미경 커버 유리 (24x50) 한 슬라이드에있는 우물을 모두 커버. </li><li> 자이스 혈구 Axioplan이 현미경을 사용하여 이미지 물고기 마음이 ApoTome (칼 자이스 혈구)를 갖추고 있습니다. </li></ol> 5. 대표 결과 모든 zebrafish의 cardiomyocytes의 막과 핵을 드러 이미지의 예제는 그림에 표시됩니다. 1. mef2c 및 β - catenin 항체는 52 hpf의 zebrafish 배아에서 심장 해부 샘플을 얼룩 함께 사용되었습니다. 동안 mef2c 항체 얼룩 cardiomyocytes의 핵, β - catenin항체는 각 세포 8-10의 경계를 나타낸다. 복합 현미경의 무대를 조절함으로써, 심장 샘플 이미지는 외부 곡률과 마음 11 내부 곡률 관찰 수 같은 방향으로 조정할 수 있습니다. 총 cardiomyocyte 번호, cardiomyocyte 세포 크기, 순환성 그때 측정할 수 있습니다. 배아 심장의 구조를 보여줍니다 sarcomeric 또 다른 예제는 그림에 표시됩니다. 2. 우리는 해부 배아 마음에 F59, 마이 오신의 항체를 사용 immunostaining 수행했습니다. 두꺼운 필라멘트의 줄무늬 밴드가 높은 배율 (그림 2) 6 계시 수 있지만 전체 배아 중심에 myofibril 네트워크는 명확하게, 낮은 배율에서 발표하실 수 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3510/3510fig1.jpg"> 그림 1. 핵과 나와!를 표시 mef2 (적색)과 β - catenin (녹색)의 Immunostainingzebrafish의 뇌실에서 cardiomyocytes의 아이 네스. 스케일 바 = 10μm <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3510/3510fig2.jpg"> 그림 2.하거나 낮은 배율 (A) 또는 높은 배율 (B)에 zebrafish 뇌실에서 두꺼운 필라멘트를 보여 마이 오신의 Immnostaining. 규모 막대 = 10μm

<ol><li>Shin, J. T., Fishman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+Zebrafish+to+human%3A+modular+medical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Genomics+Hum.+Genet%22%5BJournal%5D)">From Zebrafish to human: modular medical models.</a> Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 3, 311-340 (2002).</li>
<li>Beis, D., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cell+biology%3A+following+the+zebrafish+trend%5BTitle%5D)+AND+%22Trends.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo cell biology: following the zebrafish trend.</a> Trends. Cell. Biol. 16, 105-112 (2006).</li>
<li>Schoenebeck, J. J., Yelon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illuminating+cardiac+development%3A+Advances+in+imaging+add+new+dimensions+to+the+utility+of+zebrafish+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cell.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Illuminating cardiac development: Advances in imaging add new dimensions to the utility of zebrafish genetics.</a> Semin. Cell. Dev. Biol. 18, 27-35 (2007).</li>
<li>Nasevicius, A., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+targeted+gene+%27knockdown%27+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nat. Genet. 26, 216-220 (2000).</li>
<li>Dahme, T., Katus, H. A., Rottbauer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fishing+for+the+genetic+basis+of+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Fishing for the genetic basis of cardiovascular disease.</a> Dis. Model Mech. 2, 18-22 (2009).</li>
<li>Huang, W., Zhang, R., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibrillogenesis+in+the+developing+zebrafish+heart%3A+A+functional+study+of+tnnt2%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Myofibrillogenesis in the developing zebrafish heart: A functional study of tnnt2.</a> Dev. Biol. 331, 237-249 (2009).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%22">The Zebrafish Book</a>. , (2007).</li>
<li>Buckingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle%3A+the+regulation+of+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Genet.+Dev%22%5BJournal%5D)">Muscle: the regulation of myogenesis.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 4, 745-751 (1994).</li>
<li>Wheelock, M. J., Knudsen, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cadherins+and+associated+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Vivo%22%5BJournal%5D)">Cadherins and associated proteins.</a> Vivo. 5, 505-513 (1991).</li>
<li>Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+hypertrophy+involves+both+myocyte+hypertrophy+and+hyperplasia+in+anemic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cardiac hypertrophy involves both myocyte hypertrophy and hyperplasia in anemic zebrafish.</a> PLoS One. 4, e6596-e6596 (2009).</li>
<li>Auman, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+modulation+of+cardiac+form+through+regionally+confined+cell+shape+changes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional modulation of cardiac form through regionally confined cell shape changes.</a> PLoS Biol. 5, e53-e53 (2007).</li>
<li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+zebrafish+essential+and+regulatory+myosin+light+chains+reduces+cardiac+function+through+distinct+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Depletion of zebrafish essential and regulatory myosin light chains reduces cardiac function through distinct mechanisms.</a> Cardiovasc. Res. 79, 97-108 (2008).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

고전 온 마운트 immunostaining 방법에 비해, 우리의 방법은 다음과 같은 장점이있다. 첫째, 훨씬 강한 형광 신호를 지속적으로 개선 침투력으로 인해 얻을 수 있습니다. 전체 마운트 immunostaining 방법에서 마음을 둘러싼 치밀한 피부 조직이 상당히 전신 높은 배경의 결과로, 많은 항체의 침투를 감소. 이 문제는 3 일 후 수정 (dpf)보다 오래된 배아에 특히 심각합니다. 반대로, 해부하는 마음은 훨씬 더 침투력을 렌더링, 몇 셀 레이어로 구성되어 있습니다. 둘째, 때문에 많은 개선 침투의 immunostaining의 전 과정은 일일에서 불과 몇 시간 줄일 수 있습니다. 우리는 성공적으로 일시간에서 같은 Actinin, Integin 링크된 키나제 (Ilk) 및 β - catenin 특정 항체 같은 항체 30 분 배양 시간을 단축했습니다. 셋째, 고해상도 이미지는 일관되게 그대로 마음에서 얻을 수 있습니다세포 / subcellular 정보를 공개합니다. 때문에 노른자 옆에있는 pericardiac SAC 안...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> tricaine </td><td> 연구 유기물 </td><td> 3007T </td></tr><tr><td> 포름 알데히드 </td><td> Polysciences </td><td> 04,018 </td></tr><tr><td> 인슐린 주사기 </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 329,461 </td></tr><tr><td> 트리톤 - X - 100 </td><td> 시그마 </td><td> T8532 </td></tr><tr><td> 안티 β - catenin 항체 </td><td> 시그마 </td><td> C7207 </td></tr><tr><td> 안티 Mef2c 항체 </td><td> 산타 크루즈 생명 공학 </td><td> SC313 </td></tr><tr><td> F59 </td><td> Zfin </td><td></td></tr><tr><td> 안티 α - actinin 항체 </td><td> 시그마 </td><td> A7811 </td></tr><tr><td> 안티 Ilk 항체 </td><td> 세포 신호 </td><td> # 3862 </td></tr><tr><td> 알렉사 형석 568 염소 안티 토끼 IgG </<html> TD&gt; <td> Invitrogen </td><td> A11011 </td></tr><tr><td> 알렉사 형석 488 염소 안티 마우스 IgG1 </td><td> Invitrogen </td><td> A21121 </td></tr><tr><td> 형광 장착 매체 </td><td> 벡터 </td><td> H - 1200 </td></tr><tr><td> ImmEdge 펜 </td><td> 벡터 </td><td> H - 4000 </td></tr><tr><td> 폴리 - L - lysin 코팅 슬라이드 </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td> 63410-01 </td></tr><tr><td> 현미경 덮개 유리 </td><td> 어부 </td><td> 12-543 - D </td></tr><tr><td> Concaved 현미경 슬라이드 </td><td> 어부 </td><td> 7-1305-8 </td></tr><tr><td> 해부 현미경 </td><td> Leica MZ95 </td><td></td></tr><tr><td> 복합 현미경 </td><td> 자이스 혈구 </td><td> Axioplan2 </td></tr><tr><td> ApoTome </td><td> 자이스 혈구 </td><td></td></tr></tbody></table> PBST : 1 X PBS 0.5 % 트리톤 X - 100 엔트 &quot;&gt; 25X Tricaine : 400 밀리그램 Tricaine 97.9 ML ddH 2 O 2.1 ML (1M 트리스 pH9) 7.0 산도를 조정

해부 zebrafish 배아 심장의 immunostaining

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart 

Zebrafish의 배아는 심장 개발과 유리 발생학 및 유전학 1,2으로 인해 인간의 심장 질환을 공부에 대한 생체내의 척추 모델의 인기가됩니다. 약 100-200 배아는 성인 물고기 한 쌍의에서 매주 쉽게 사용할 수 있습니다. 예 utero을 개발 투명 태아는 심장 결함에게 3 평가에 이상적합니다. 어떤 유전자의 표현은 morpholino 기술 또는 RNA 사출 사를 통해 조작하실 수 있습니다. 또한, 앞으로 유전자 스크린은 이미 cardiogenesis 5 가지 관점에 영향을 미칠 돌연변이의 목록을 생성합니다. 전체 마운트 immunostaining는 특정 조직 6 타겟 단백질의 표현 패턴을 나타내기 위해이 동물 모델에서 중요한 기술입니다. 그러나, 세포 또는 subcellular 구조를 확인할 수 있습니다 고해상도 이미지는 실제 locat으로 인해 주로 어려운되었습니다마음과 항체의 가난한 들어간 이온. 여기, 우리가 먼저 마음을 해부 다음 현미경 슬라이드의 표면에 얼룩 과정을 실시하여 이러한 병목 현상을 해결하기 위해 방법을 제시한다. 작은 마음이 샘플의 손실을 방지하기 위해 및 솔루션 처리를 촉진하기 위해, 우리는 immEdge 펜으로 그려진 현미경의 표면 슬라이드에 동그라미 안에 심장 샘플을 제한. 얼룩 후, 형광 신호를 직접 복합 현미경으로 볼 수 있습니다. 배아 물고기의 마음은 몇 가지 세포 레이어로 구성되어부터 새로운 방법, 항체에 대한 침투를 상당히 향상시킵니다. 그대로 마음의 고품질 이미지는 일 2 일 6 세 zebrafish 배아에 대해 훨씬 감소 행렬 시간 내에 얻을 수 있습니다. 우리의 방법은 잠재적으로 zebrafish이나 다른 작은 동물 중 하나에서 해부하는 다른 장기를 얼룩이 확장될 수 있습니다.

zebrafish 배아 심장의 immunostaining를 수행하는 빠른 방법이 설명되어 있습니다. 전체 마운트 immunostaining 접근 방식에 비해,이 방법은 크게 크게 감소 처리 시간 이내에 심장에 세포 / subcellular 구조를 공개 고해상도 이미지를 얻는 수있는 항체의 침투를 증가시킵니다.

해부 Zebrafish 배아 심장의 Immunostaining

제브라피시 배아는 유리한 발생학적 특성 덕분에 심장 발달 및 인간 심장 질환 연구를 위한 대중적인 인비보(in vivo) 척추동물 모델이 되었습니다...

이 절차의 전반적인 목적은 해부된 제브라피쉬 배아 심장에 면역 염색을 수행하여 세포 또는 세포 내 구조를 고해상도로 확인하는 것입니다. 먼저 가습 챔버에서 면역 염색용 슬라이드를 준비합니다. 그다음, 마취된 제브라피쉬 배아에서 심장을 해부하고, 특정 항체를 사용하여 배아 심장에 면역 염색을 수행합니다.그런 다음, 돔(dome)이 장착된 현미경으로 물고기 심장의 이미지를 기록합니다. 마지막으로, 투과력이 크게 향상되어 면역형광 현미경을 사용하여 제브라피쉬 배아 심장의 세포 또는 세포 내 구조를 관찰합니다. 기존의 홈 마운트(home mount) 면역 염색과 같은 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 표준 제브라피쉬 심장의 고품질 이미지를 얻을 수 있다는 것입니다. 가습 챔버를 준비하고 시료를 빛으로부터 보호하기 위해, 알루미늄 호일로 챔버와 빈 팁 박스의 덮개를 감싸 사용하십시오.챔버 바닥에 젖은 페이퍼 타월을 여러 겹 쌓아 시료가 건조되는 것을 방지하고, 그 위에 슬라이드 거치대로 사용할 작은 마이크로플레이트를 놓습니다. 이미지 펜을 사용하여 현미경 슬라이드 표면에 약 5 by 5 mm 크기의 원 또는 선을 그려 웰을 만듭니다. 슬라이드를 건조시킵니다.슬라이드를 가습 챔버에 넣고 각 웰에 formaldehyde 50 µL를 추가합니다. 배아 심장을 해부하기 위해, 물고기의 모든 신체 움직임은 멈추되 정상적인 심장 박동은 유지될 때까지 0.4% tricaine이 포함된 E3 egg water에서 물고기 배아를 마취합니다. 약 1분 정도 소요됩니다.배아를 오목 슬라이드 글라스로 옮깁니다. 암시야 또는 DIC와 같은 편광 조명을 사용하는 해부 현미경의 스테이지 위에 오목 슬라이드 글라스를 배치합니다. 심장이 명확하게 보이도록 현미경의 조명을 조절합니다.다음으로, 두 개의 인슐린 주사기를 75% ethanol로 세척합니다. 그 후 건조시키고, 현미경의 배율을 높여 심장에 초점을 맞춥니다. 다음으로, 바늘 팁 하나를 난황에 삽입하여 배아를 물리적으로 고정하는데, 이때 경계면이 머리와 가깝게 위치하도록 합니다.그런 다음 심장 부위 근처에 다른 바늘을 삽입하고 심장을 빠르게 꺼냅니다. 심장이 배아로부터 완전히 분리되지 않은 경우, 심장과 난황 사이의 남은 연결 조직을 절단합니다. 저배율에서 심장을 관찰합니다.1 µL 부피로 설정한 10 µL 파이펫을 사용합니다. 파이펫 팁을 이용하여 심장 샘플을 빨아들이거나 살짝 터치

immunostaining-of-dissected-zebrafish-embryonic-heart

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여러 발달 단계에있는 zebrafish 심장의 해부 및 격리에 대한 명확하고 표준화된 방법 설명되어 있습니다. 주석과 부량 기법도 설명합니다.

애벌레의 심장 해부, 소년과 성인 Zebrafish, Danio rerio</em

Zebrafish는 척추 동물에서 심장 중생의 메커니즘을 연구하기위한 귀중한 모델을 나타냅니다. 여기서는 cryoinjury를 사용하는 성인 zebrafish에있는 심장 경색의 유도를위한 프로토콜을 제시한다. 포유류의 infarcts에서 관찰하는 것과 비슷한 심실 벽의 20 % 이내 거대한 세포 죽음이 방법은 결과를.

성인 Zebrafish에서 심근 경색의 유도는 Cryoinjury 사용

이 비디오는 심장 발달, 성숙 및 노화를 연구하기 위해 여러 발달 단계에서 제브라피시로부터 심장을 분리하는 기술을 설명합니다.

심장 박리: 제브라피시 심장 발달을 관찰하는 방법

제브라 피쉬의 심장 개발하는 동안 심장 유전자 발현 프로파일을 분석하기 위해, 총 RNA는 고립 된 마음에서 추출해야합니다. 여기서 우리는 심장 별의 mRNA를 얻기 위해 제브라 피쉬 배아에서 빠른 설명서를 해부하여 기능 / 구타 마음을 수집하기위한 프로토콜을 제시한다.

전사 분석을위한 대규모 Zebrafish의 배아 심장의 해부

심혈관 연구를 위한 제브라피쉬의 사용은 성인 심장에 대한 연구로 확장되고 있습니다. 이러한 응용 분야의 경우, 심장 조직을 빠르고 간단하게 분리하는 것이 사후 변화를 피하고 적절한 수의 샘플을 얻는 데 중요합니다. 여기에서는 성체 제브라피시 심장을 빠르고 재현 가능한 방법으로 해부할 수 있습니다.

높은 처리량 응용 프로그램에 대한 성인 Zebrafish의 마음의 복구

선천성 심장 결함으로 이어지는 돌연변이는 발달 중 심장 구조에 대한 생체 내 조사의 이점을 얻지만, 마우스 배아 심장에 대한 고해상도 구조 연구는 기술적으로 어렵습니다. 여기에서는 발달 중인 마우스 심장의 심근세포 특이적 구조를 평가하기 위한 강력한 면역형광 및 이미지 분석 방법을 제시합니다.

배아 마우스 마음에 면역 형광을 이용하여 심근 개발 분석

이 프로토콜은 초기 단계 제브라피시 배아의 저온 절에 대한 순차적 면역 형광 및 면역 히스토화학을 입증하여 특정 세포 집단에서 정확한 동국화 분석을 가능하게합니다.

냉동 제브라피시 배아의 순차적 면역형광 및 면역성화학

여기에서, 우리는 zebrafish 배아 및 애벌레의 전체 준비에 있는 단백질의 형광 항체 중재한 검출을 위한 프로토콜을 제시합니다.

제브라피시 배아와 애벌레의 전체 마운트 면역항암화학

이 프로토콜은 면역 형광 분석기를 사용하여 제브라피시 배아의 해부 된 심장에서 PM2.5-유도 된 DNA 손상을 감지합니다.

면역 형광을 사용하여 제브라피시 배아 심장에서 PM2.5-유도 된 DNA 손상을 감지합니다.

우리는 빛 시트 형광 현미경 검사법과 생체 내 제브라피시 심장을 연구하는 최적화 된 도구를 설명합니다. 특히, 우리는 밝은 심장 형질 전환선을 제안하고 발달과 심장 결함을 피하는 새로운 부드러운 임베드 및 고정 기술을 제시합니다. 심장 이미징에 적응된 가능한 데이터 수집 및 분석 파이프라인도 제공됩니다.

얼룩말 물고기 배아에서 빠른 심장 역학의 빛 시트 현미경 검사

이 연구는 개별 제브라피시 배아 심장에서 전 세계 DNA 메틸화를 정량화하기 위한 민감한 면역형광 기반 영상 방법을 확립합니다. 이 방법은 제한된 조직 물질의 문제를 극복하고 비아황산염 변환의 필요성을 우회합니다.

제브라피시 유충 심장에서 전 지구적 DNA 메틸화 검출

배우세요 제브라피쉬 배아 심장의 해부 면역염색법으로 고해상도 세포 구조를 관찰하는 방법을. 이 기술은 항체 침투력을 높여 전통적인 전체 마운트 염색보다 처리 시간을 단축하고 선명한 이미지를 제공합니다.

해부 Zebrafish 배아 심장의 Immunostaining

더 많은 동영상 탐색