Name: 인간 유방 선암과 Tamoxifen과 Neuroblastoma 셀의 7-deoxypancratistatin의 소설 합성 C-1 아날로그에 의한 Apoptotic 및 Autophagic 유도의 향상 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 44 s
Description: 학습하세요 JCTH-4와 Tamoxifen 병용 요법이 유방암 및 신경모세포종 세포에서 미토콘드리아를 표적으로 한 세포사멸과 자가소화를 유도하는 메커니즘을. 정상 섬유아세포에는 영향을 미치지 않는 선택적 항암 효과를 확인하세요.

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이 작품은 콜럼버스 장 9671 (윈저, 온타리오), 그리고 CIHR 프레더릭 들소와 데니스 엄마에게 수여 찰스 베스트 캐나다 대학원 장학금의 기사에 의해 지원되었습니다. 촬영된 현미경으로 그들의 도움 로버트 호지와 엘리자베스 Fidalgo 다 실바에게 감사합니다. 촬영된 현미경 비디오를 편집 케이티 Facecchia에 감사합니다. 우리는 또한이 원고의 비판적 검토를 위해 Sudipa 6월 Chatterjee와 필립 Tremblay 감사드립니다. 이 작품은 2010 년 암 상대로 자신의 연이은 승전 케빈 Couvillon의 메모리에 전념하고 있습니다.

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<li>Zhang, G., Gurtu, V., Kain, S. R., Yan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+of+apoptosis+using+a+fluorescent+conjugate+of+annexin+V%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Early detection of apoptosis using a fluorescent conjugate of annexin V.</a> Biotechniques. 23, 525-531 (1997).</li>
<li>Madesh, M., Hajnóczky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VDAC-dependent+permeabilization+of+the+outer+mitochondrial+membrane+by+superoxide+induces+rapid+and+massive+cytochrome+c+release%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">VDAC-dependent permeabilization of the outer mitochondrial membrane by superoxide induces rapid and massive cytochrome c release.</a> J. Cell Biol. 155, 1003-1015 (2001).</li>
<li>Simon, H. U., Haj-Yehia, A., Levi-Schaffer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+reactive+oxygen+species+%28ROS%29+in+apoptosis+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Role of reactive oxygen species (ROS) in apoptosis induction.</a> Apoptosis. 5, 415-418 (2000).</li>
<li>Batandier, C., Leverve, X., Fontaine, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opening+of+the+mitochondrial+permeability+transition+pore+induces+reactive+oxygen+species+production+at+the+level+of+the+respiratory+chain+complex+I%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Opening of the mitochondrial permeability transition pore induces reactive oxygen species production at the level of the respiratory chain complex I.</a> J Biol Chem. 279, 17197-17204 (2004).</li>
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</ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

PST 및 유사 화합물은 안티 - 암 속성에게 11-15,21을 가지고 보여왔다. 우리는 이전에이를 apoptogenic 요인 12,14의 릴리스에 의한 apoptosis를 유도 암세포에 선택적으로 mitochondria를 불안정하게하는 자연 PST를보고했습니다. 그것은 가능성이 높습니다 그 같은 메커니즘을 통해 JCTH-4 막으로, JCTH-4 (TMRM 염색법 (그림 5A)와 볼, 그리고 SH-SY5Y 세포 격리 mitochondria의 ROS의 생성을 증가로 MCF7 세포에서 MMP 붕괴의 원인 그림 5B), mitochondrial 부전을 나타내는. 따라서 JCTH-4에 의한 apoptosis의 유도가 암 세포의 mitochondrial 타겟팅을 통해 대부분의 경우입니다. 많은 차이가 JCTH-4에 의해 암 선택성의 기반으로 사용할 수 noncancerous 및 암 세포...

<table border="1"><tbody><tr><td> 자재 명칭 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> SH-SY5Y 세포주 </td><td> ATCC </td><td> CRL-2266 </td></tr><tr><td> Dulbecco의 수정일 이글스 중 F-12 햄 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 51448C </td></tr><tr><td> 태아 소 혈청 </td><td> Gibco BRL </td><td> 16000-044 </td></tr><tr><td> MCF7 세포주 </td><td> ATCC </td><td> HTB-22 </td></tr><tr><td> RPMI-1640 배지 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> R 0883 </td></tr><tr><td> 분명히 정상적인 인간 태아의 fibroblast 세포주 (NFF) </td><td> 의학 연구를위한 Coriell 연구소 </td><td> AG04431B </td></tr><tr><td> Dulbecco의 수정일 이글의 중간, 높음 포도당 매체 </td><td> 써모 과학 </td><td> SH30022.01 </td></tr><tr><td> Tamoxifen의 구연산 염 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> T9262 </td&gt; </tr><tr><td> 35mm 유리 바닥 문화 요리 </td><td> MatTek </td><td> P35G-014-C </td></tr><tr><td> Leica DMI6000 B 거꾸로 현미경 </td><td> Leica 마이크로 시스템즈 </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Hoechst 33342 염색 </td><td> 분자 프로브 </td><td> H3570 </td></tr><tr><td> Leica DM의 IRB는 형광 현미경을 거꾸로 </td><td> Leica 마이크로 시스템즈 </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Annexin V AlexaFluor-488 </td><td> Invitrogen </td><td> A13201 </td></tr><tr><td> Trypan 블루 용액 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> T8154-20ML </td></tr><tr><td> 혈구계 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 267,110 </td></tr><tr><td> 서부 표준시-1 시약 </td><td> 로슈 응용 과학 </td><td> 11644807001 </td></tr><tr><td> Wallac 빅터 3 1420 Multilabel 카운터 </td><td> PerkinElmer </td><td> 1420-011 </td></tr><tr><td> Tetramethylrhodamine 메틸 에스테르 (TMRM) </td><td> Gibco BRL </td><td> T-668 </td></tr><tr><td> 유리 조직 연삭기 </td><td> 피셔 과학 </td><td> K8885300-0002 </td></tr><tr><td> BioRad 단백질 분석 </td><td> 바이오 방사선 연구소 </td><td> 양식 500 0001Bottom </td></tr><tr><td> Amplex 레드 </td><td> Invitrogen </td><td> A12222 </td></tr><tr><td> 양고추냉이 퍼옥시데이즈 (HRP) </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> P8125 </td></tr><tr><td> SpectraMax 쌍둥이 자리 XPS </td><td> 분자 장치 </td><td> 3,126,666 </td></tr><tr><td> 안티 LC3 항체는 토끼의 사육 </td><td> Novus 체액 </td><td> NB100-2220 </td></tr><tr><td> 안티 마우스 HRP-복합 이차 항체 </td><td> Abcam </td><td> ab6728 </td></tr><tr><td> 안티 - 토끼 HRP-복합 이차 항체 </td><td> Abcam </td><td> ab6802 </td></tr><tr><td> Chemiluminescence 퍼옥시데이즈 기판 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> CPS160 </td></tr><tr><td> Monodansylcadaverine </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 30,432 </td></tr></tbody></table>

인간 유방 선암과 tamoxifen과 neuroblastoma 셀의 7-deoxypancratistatin의 소설 합성 c-1 아날로그에 의한 apoptotic 및 autophagic 유도의 향상

Enhancement of Apoptotic and Autophagic Induction by a Novel Synthetic C-1 Analogue of 7-deoxypancratistatin in Human Breast Adenocarcinoma and Neuroblastoma Cells with Tamoxifen

유방암은 북미에서 여인 중에 가장 흔한 암 중 하나입니다. 이온화 방사선 등 많은 현재의 안티 - 암 치료, DNA 손상을 통해 apoptosis를 유도. 불행히도, 이러한 치료는 암세포가 아닌 선택이며, 정상 세포에서 유사한 독성을 생산하고 있습니다. 우리는 천연 복합 pancratistatin (PST)에 의해 암 세포에서 apoptosis의 선택적 유도를보고했습니다. 최근 소설 태평양 표준시 아날로그, 7 deoxypancratistatin (JCTH-4)의 C-아세 톡시 메틸 유도체는 드 노보 합성에 의해 생산과 몇 가지 암 세포 라인에 비교 선택적 apoptosis를 유도하는 활동을 전시했다. 최근 autophagy는 화학 요법에 대한 반응으로 프로 생존과 프로 사망 메커니즘 양쪽으로 malignancies에 연루되었습니다. Tamoxifen (TAM)는 결국에 수많은 암의 프로 생존 autophagy의 유도를 보여주었다. 본 연구에서는 혼자와 TAM와 함께 JCTH-4의 효능은 인간의 유방 cance에서 세포 죽음을 유도하는R (MCF7)과 neuroblastoma (SH-SY5Y) 전지 평가되었다. 혼자 JCTH-4 autophagy의 일부 유도와 apoptosis의 상당 유도를 일으킨 반면 혼자 TAM은 autophagy 유도하지만, 볼품없는 세포의 죽음. 흥미롭게도, 조합 치료 apoptotic과 autophagic 유도의 급격한 증가를 굴복. 우리는 촬영된 현미경을 사용하여 조합 치료 TAM 유발 autophagy를 겪고 MCF7 세포에서는 시간 의존 형태학의 변화, JCTH-4-유도된 apoptosis와 autophagy 및 가속 세포 죽음을 모니터링. 우리는이 암 세포의 mitochondrial 타겟팅을 사용하여 apoptosis / autophagy를 유도하기 위해 이러한 화합물을 증명하고있다. 중요한 것은 이러한 치료 noncancerous 인간 섬유아 세포의 생존에 영향을주지 않았다. 따라서 이러한 결과는 JCTH-4 TAM과 결합된이 유방암과 neuroblastoma 세포에 대한 안전하고 매우 강력한 항정 암 치료로 사용될 수 있음을 나타냅니다.

우리는 네이티브 pancratistatin 같은 비교 안티 - 암 활동과 pancratistatin의 소설 아날로그를 합성했습니다, 흥미롭게도, tamoxifen과 조합 치료 noncancerous 섬유아 세포에 대한 최소한의 효과와 대상 mitochondrial에 의한 apoptotic 및 autophagic 유도의 급격한 향상이 나왔고. 따라서, tamoxifen와 함께 JCTH-4는 안전한 안티 암 치료를 제공할 수 있습니다.

인간 유방 선암과 Tamoxifen과 Neuroblastoma 셀의 7-deoxypancratistatin의 소설 합성 C-1 아날로그에 의한 Apoptotic 및 Autophagic 유도의 향상

유방암은 북미 여성들에게 가장 흔하게 발생하는 암 중 하나입니다. 전리 방사선을 포함한 현재의 많은 항암 치료법들은 ...을 유도합니다.

본 실험 절차의 전반적인 목적은 천연 화합물인 pancreat statin의 합성 유사체인 J CTH four를 단독 또는 tamoxifen과 병용 처리했을 때, 인간 유방암 및 신경모세포종 세포에서 유도되는 선택적 독성과 세포 사멸 기전을 평가하는 것입니다. 이를 위해 먼저 mc seven 유방암 세포, SHSY five Y 신경모세포종 세포 및 정상 태아 섬유아세포(NFF)를 배양합니다. 다음 단계로 J CTH four와 Tamoxifen을 단독 또는 병용 처리하여 세포 독성을 평가합니다.이러한 약물로 세포를 처리하고, 세포 사멸(apoptosis) 및 자가포식(autophagy)의 특징인 시간 의존적 형태 변화를 관찰함으로써 이를 확인합니다. 다음으로, 이 암세포에서 분리한 미토콘드리아의 미토콘드리아 막 전위와 활성 산소종 생성을 모니터링하여 세포 사멸 및 자가포식 유도 기전을 조사합니다. 최종적으로 타임랩스 사진 촬영과 다양한 생화학적 분석을 통해 JCT four가 인간 유방암 및 신경모세포종 세포에서 세포 사멸과 자가포식을 유도하며, 이러한 효과가 타모キシ펜(tamoxifen)의 첨가에 의해 극적으로 강화됨을 입증합니다.중요한 점은 이러한 처리가 비암성 인간 섬유아세포의 생존에는 영향을 미치지 않는다는 것이며, 이는 J CTH four와 tamoxifen의 병용 요법이 유방암 및 신경모세포종 세포에 대해 안전하고 매우 강력한 항암 치료제로 사용될 수 있음을 나타냅니다. 이 기술의 함의는 잠재적인 항암 화합물에 의해 유도된 암세포 사멸의 효능과 방식을 모니터링할 수 있기 때문에, 암을 위한 병용 요법의 전임상 평가 및 개발로 확장됩니다. 이 방법론은 J CT four 및 tamoxifen에 의해 유방암 및 신경모세포종 세포에서 유도되는 세포 독성 메커니즘에 대한 통찰을 제공할 뿐만 아니라, 다른 항암 시스템 및 다른 잠재적 항암 화합물에도 적용될 수 있습니다.우리는 j ct H four와 Tamoxifen이 암세포를 사멸시키는 데 있어 시너지 효과를 내는 것을 관찰했을 때 처음으로 이 방법의 아이디어를 얻었습니다. 일반적으로 Tamoxifen은 오토파지를 활성화하며, J cts four는 암세포의 세포 사멸(apoptosis)을 유도합니다. 따라서 우리는 세포 사멸 또는 오토파지가 진행 중인 암세포의 형태학적 변화를 관찰하고자 했습니다.MC seven 인간 유방 선암 세포를 RPMI 1640 배지에서 배

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연구

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여기에서는 항암 치료제에 반응하는 단일 세포를 종단으로 추적하는 장기 타임 랩스 현미경 검사 방법을 설명합니다.

유리를 통해 보면 : 시간 ​​경과 현미경 및 단일 세포의 종 추적 항암 치료를 공부하기

이 절차는 아스피린-푸마르산염 전구약물의 항-NFκB 및 항암 줄기세포 활성을 합성하고 특성화하는 방법을 보여줍니다.

NFκB 활동과 유방암 줄기 세포를 금지합니다 합성 및 아스피린 - 푸마 레이트의 전구 약물의 특성

이 프로토콜의 목표는 LC3 면역형광 및 LC3 도트 정량화를 통해 췌장암 및 췌장 전초 세포의 자가포식 수준을 결정하는 것입니다.

LC3 면역형광법을 사용하여 두 가지 다른 췌장 세포 모델에서 자가포식 수준 평가

본 프로토콜은 MCF-7 세포 증식 및 이동을 억제하는 살리드로사이드의 약리학적 작용 및 기전을 평가하기 위한 포괄적인 전략을 설명합니다.

MCF-7 세포 증식 및 이동 억제에서 Salidroside의 약리학적 작용 및 분자 메커니즘 탐구

방법 중 하나를 사용하여 인간의 치과 펄프의 줄기 세포 (hDPSCs)의 분리 및 특성...

인간 치과 펄프의 줄기 세포의 분리, 특성화 및 비교 차별화 두 가지 방법을 사용하여 영구 치아에서 파생

학습하세요 JCTH-4와 Tamoxifen 병용 요법이 유방암 및 신경모세포종 세포에서 미토콘드리아를 표적으로 한 세포사멸과 자가소화를 유도하는 메커니즘을. 정상 섬유아세포에는 영향을 미치지 않는 선택적 항암 효과를 확인하세요.

인간 유방 선암과 Tamoxifen과 Neuroblastoma 셀의 7-deoxypancratistatin의 소설 합성 C-1 아날로그에 의한 Apoptotic 및 Autophagic 유도의 향상

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