Chromosomics : 수치과 구조 변경의 탐지는 모두 24 인간의 염색체로 동시에 소설 OctoChrome 생선 분석을 사용

Octa Chrome Fish 분석법은 단일 슬라이드상의 한 번의 하이브리드화를 통해 24쌍의 모든 인간 염색체를 동시에 검사합니다. 먼저, 특정 8구역 슬라이드에 중기 분산 표본을 준비하십시오. 그다음, 샘플 슬라이드를 자동 스캔하여 모든 중기 세포의 위치를 쉽게 파악하고 향후 모든 세포 이미지를 재평가할 수 있도록 합니다.

다음 단계로, 8구 슬라이드를 Octa chrome 장치 위에 배치하고 프로브를 하이브리드화합니다. 얻어진 결과는 RO 장치상의 염색체 조합 배열에 따라 각 구획에서 세 가지 서로 다른 색으로 염색된 전체 염색체를 보여줄 수 있습니다. 저는 1990년대 초반 인간 집단 연구에 FISH를 적용하기 시작했을 때 이 RO FISH 방법에 대한 아이디어를 처음 얻었습니다.

그 후 1994년 연례 AACR 학회에서 세포를 배치하기 위한 8개 정사각형 슬라이드를 이용한 3색 염색 아이디어를 소개했습니다. 기존의 고전적인 염색체 밴딩이나 현대적인 스펙트럴 프로토타이핑과 같은 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 더 많은 수의 세포에서 24쌍의 모든 인간 염색체를 쉽게 분석할 수 있다는 점입니다. 대조군으로서 부유 상태로 고정된 중기 세포 준비물로 시작하여, 슬라이드 위에 세포를 피펫으로 떨어뜨려 적절한 밀도인지 확인합니다.

이제 8개의 정사각형 OC 크롬에 담근 후, 순수 에탄올에 2분 동안 슬라이드 시킵니다. 세포 도말이 서로 간섭하는 것을 방지하기 위해, 템플릿 슬라이드의 정사각형 칸에 교대로 5 µL의 세포 현탁액을 분주합니다. 인접한 쌍을 점적하기 전에 샘플을 공기 중에서 건조시킵니다.

슬라이드의 각 절반 중심부에 0.2 µg/mL DAPI 염색액 20 µL를 도포하고 커버슬립을 덮습니다. 그런 다음, 샘플 슬라이드를 자동 스캔하여 중기 세포의 위치를 파악합니다. 모든 중기 세포의 위치를 쉽게 찾고 향후 모든 세포 이미지를 재평가할 수 있도록 metaverse 소프트웨어를 사용하십시오.

스캐닝 결과를 수동으로 확인하고 메타페이스(metaphase)가 아닌 아티팩트를 제거하십시오. 먼저, 2X SSC 버퍼에서 DPI 염색약을 제거한 다음, 일련의 에탄올 세척 과정을 통해 시료를 탈수하십시오. 슬라이드를 공기 중에서 건조시킨 후, 37 °C 핫플레이트 위에 5분 동안 놓아두십시오.

이제 chroma 프로브, 멀티 프로브 하이브리다이제이션 챔버 및 하이브리다이제이션 버퍼를 라벨 면이 아래로 향하게 하여 37 °C 항온수조에서 평형화합니다. OC chrome 장치를 37 °C 핫플레이트 위에 올립니다. 8개의 각 영역에 예열된 하이브리다이제이션 용액 2 µL를 첨가합니다.

템플릿을 조심스럽게 뒤집어 방향을 맞춥니다. OC 크롬 장치 위로 밀어 넣습니다. 템플릿 슬라이드가 Octa Chrome 장치와 정렬되었는지 확인하십시오.

그 다음 슬라이드를 하이브리드화 용액 방울 위로 조심스럽게 내리고, OC 크롬 장치의 각 돌출된 영역 가장자리까지 하이브리드화 용액이 퍼지도록 부드럽고 균일하게 압력을 가합니다. 유리 슬라이드의 불투명한 끝부분을 들어 올려 슬라이드가 OC 크롬 장치 아래에 오도록 뒤집습니다. 이를 37 °C 핫플레이트에 10분 동안 둡니다.

그 후 75 °C 핫플레이트로 옮겨 5분간 둡니다. 하이브리드화 단계를 위해 시료를 변성시키려면 chroma probe 멀티 프로브 하이브리드화 챔버로 옮깁니다. 덮개를 닫고 챔버를 37 °C 항온수조에 띄워 하룻밤 동안 둡니다.

장치에서 슬라이드를 조심스럽게 꺼내어 72 °C의 0.4 excess SC에서 2분 동안 세척합니다. 두 번째 세척은 상온에서 30초 동안 수행합니다. 이어서 슬라이드 각 절반의 중앙에 20 µL의 DPI를 첨가하고 커버슬립을 덮습니다.

형광 현미경으로 관찰하기 전, 시료를 실온의 암소에서 10분 동안 배양합니다. Octa chrome fish 어세이는 단일 슬라이드 상의 단일 하이브리드화를 통해 24개의 모든 인간 염색체를 동시에 검사할 수 있게 합니다. 각 사각형에는 서로 다른 색상의 형광 물질로 직접 표지된 세 가지 서로 다른 전체 염색체 페인팅 프로브가 포함되어 있습니다.

Octa CHRO 시스템의 두 번째 사각형에 있는 정상 중기 세포를 4배율로 관찰하면, 8번, 21번 및 12번 염색체가 각각 빨간색, 녹색 및 파란색으로 염색된 것을 확인할 수 있습니다. 이들은 각 필터를 사용하여 개별적으로 시각화하거나, DAPI Fitzy, Texas Red 삼색 필터를 통해 동시에 시각화할 수 있습니다. 이러한 염색체 접근법은 백혈병 특이적 염색체 전위 및 이배체성이 있는 비정상 세포를 검출하는 데 유용합니다.

예를 들어, T 8 21은 급성 골수성 백혈병에서 흔히 발생하는 염색체 전위입니다. 21번 염색체가 3개 존재하는 21번 삼염색체성은 백혈병 발생 후 나타나는 일반적인 이배체성입니다. 이 기술은 분자 세포유전학 및 분자 역학 분야의 과학자들이 백혈병과 림프종에서 검출되는 가장 일반적인 염색체 재배열을 탐구하고, 임상 환자나 독성 화학 물질에 노출된 집단 내 모든 인간 염색체 사이의 선택적 배수성을 조사할 수 있는 길을 열어주었습니다.

이 영상을 시청하신 후, 여러분은 Octo Chrome Fish 분석법을 통해 하나의 슬라이드 내 단일 하이브리드화로 24개의 모든 인간 염색체를 동시에 검사하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 그리고 저희는 이를 염색체라고 정의합니다.