Name: 인간 Papillomavirus의 소설 T-세포 Epitopes를 특성화하기 위해 인터페론-γ 효소 연결된 Immunospot 분석의 이용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 41 s
Description: 학습하세요 인간 유두종바이러스(HPV) 특이적 T세포 클론을 분리하고 성장시키는 방법을 배우세요. 인터페론-γ 분비 기반 분석으로 항원 특이적 T세포 빈도를 측정하고 에피토프 특이적 클론을 식별하여 면역학 연구와 백신 개발에 활용하세요.

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본 연구는 American Cancer Society Scholars Award (RSG-06-180-01-MBC) 및 NIH 보조금 (R01 CA143130 및 UL1RR029884)의 지원을 받아 수행되었습니다.

<ol><li>Nakagawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+favorable+clinical+trend+is+associated+with+CD8+T-cell+immune+responses+to+the+human+papillomavirus+type+16+e6+antigens+in+women+being+studied+for+abnormal+pap+smear+results%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Low.+Genit.+Tract+Dis%22%5BJournal%5D)">A favorable clinical trend is associated with CD8 T-cell immune responses to the human papillomavirus type 16 e6 antigens in women being studied for abnormal pap smear results.</a> J. Low. Genit. Tract Dis. 14, 124-129 (2010).</li>
<li>Walls, E., Crawford, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWalls%2C+E+%22Lymphocytes%3A+A+practical+approach%22">Lymphocytes: A practical approach</a>. Klaus, G. G. B. , IRL Press. 149-149 (1987).</li>
<li>Nakagawa, M., Kim, K. H., Moscicki, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+CD8+T-cell+epitopes+within+the+human+papillomavirus+type+16+%28HPV+16%29+E6+protein+among+young+women+whose+HPV+16+infection+has+become+undetectable%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Diagn.+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Patterns of CD8 T-cell epitopes within the human papillomavirus type 16 (HPV 16) E6 protein among young women whose HPV 16 infection has become undetectable.</a> Clin. Diagn. Lab Immunol. 12, 1003-1005 (2005).</li>
<li>Wang, X., Santin, A. D., Bellone, S., Gupta, S., Nakagawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+CD4+T-cell+epitope+described+from+one+of+the+cervical+cancer+patients+vaccinated+with+HPV+16+or+18+E7-pulsed+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol.+Immunother%22%5BJournal%5D)">A novel CD4 T-cell epitope described from one of the cervical cancer patients vaccinated with HPV 16 or 18 E7-pulsed dendritic cells.</a> Cancer Immunol. Immunother. 58, 301-308 (2009).</li>
<li>Larsson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+recombinant+vaccinia+virus+based+ELISPOT+assay+detects+high+frequencies+of+Pol-specific+CD8+T+cells+in+HIV-1-positive+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS%22%5BJournal%5D)">A recombinant vaccinia virus based ELISPOT assay detects high frequencies of Pol-specific CD8 T cells in HIV-1-positive individuals.</a> AIDS. 13, 767-777 (1999).</li>
<li>Nakagawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+T+lymphocyte+responses+to+E6+and+E7+proteins+of+human+papillomavirus+type+16%3A+relationship+to+cervical+intraepithelial+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic T lymphocyte responses to E6 and E7 proteins of human papillomavirus type 16: relationship to cervical intraepithelial neoplasia.</a> J. Infect. Dis. 175, 927-931 (1997).</li>
<li>Wang, X., Moscicki, A. B., Tsang, L., Brockman, A., Nakagawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+T+cells+specific+for+novel+human+papillomavirus+type+16+%28HPV16%29+E6+epitopes+in+women+whose+HPV16+infection+has+become+undetectable%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Vaccine+Immunol%22%5BJournal%5D)">Memory T cells specific for novel human papillomavirus type 16 (HPV16) E6 epitopes in women whose HPV16 infection has become undetectable.</a> Clin. Vaccine Immunol. 15, 937-945 (2008).</li>
<li>Evans, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+processing+defects+in+cervical+carcinomas+limit+the+presentation+of+a+CTL+epitope+from+human+papillomavirus+16+E6%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antigen processing defects in cervical carcinomas limit the presentation of a CTL epitope from human papillomavirus 16 E6.</a> J. Immunol. 167, 5420-5428 (2001).</li>
<li>Shi, Y., Smith, K. D., Kurilla, M. G., Lutz, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+CD8%2B+T+cells+recognize+EBV+antigen+but+poorly+kill+autologous+EBV-infected+B+lymphoblasts%3A+immunodominance+is+elicited+by+a+peptide+epitope+that+is+presented+at+low+levels+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic CD8+ T cells recognize EBV antigen but poorly kill autologous EBV-infected B lymphoblasts: immunodominance is elicited by a peptide epitope that is presented at low levels in vitro.</a> J. Immunol. 159, 1844-1852 (1997).</li>
<li>Varadarajan, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+single-cell+analysis+of+human+CD8%2B+T+cell+functions+reveals+discordance+for+cytokine+secretion+and+cytolysis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">A high-throughput single-cell analysis of human CD8+ T cell functions reveals discordance for cytokine secretion and cytolysis.</a> The Journal of Clinical Investigation. , (2011).</li>
<li>Nakagawa, M., Kim, K. H., Moscicki, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+methods+of+identifying+new+antigenic+epitopes+of+human+papillomavirus+type+16+E6+and+E7+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Diagn.+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Different methods of identifying new antigenic epitopes of human papillomavirus type 16 E6 and E7 proteins.</a> Clin. Diagn. Lab Immunol. 11, 889-896 (2004).</li>
<li>Nakagawa, M., Kim, K. H., Gillam, T. M., Moscicki, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA+class+I+binding+promiscuity+of+the+CD8+T-cell+epitopes+of+human+papillomavirus+type+16+E6+protein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">HLA class I binding promiscuity of the CD8 T-cell epitopes of human papillomavirus type 16 E6 protein.</a> J. Virol. 81, 1412-1423 (2007).</li>
<li>Brown, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+epitope+%22hotspots%22+on+the+HIV+Type+1+gp120+envelope+protein+overlap+with+tryptic+fragments+displayed+by+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+Res.+Hum.+Retroviruses%22%5BJournal%5D)">T cell epitope "hotspots" on the HIV Type 1 gp120 envelope protein overlap with tryptic fragments displayed by mass spectrometry.</a> AIDS Res. Hum. Retroviruses. 21, 165-170 (2005).</li>
<li>Masemola, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+and+promiscuous+CTL+epitopes+in+conserved+regions+of+Gag+targeted+by+individuals+with+early+subtype+C+HIV+type+1+infection+from+southern+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Novel and promiscuous CTL epitopes in conserved regions of Gag targeted by individuals with early subtype C HIV type 1 infection from southern Africa.</a> J. Immunol. 173, 4607-4617 (2004).</li>
<li>Walker, B. D., Korber, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+control+of+HIV%3A+the+obstacles+of+HLA+and+viral+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immune control of HIV: the obstacles of HLA and viral diversity.</a> Nat. Immunol. 2, 473-475 (2001).</li>
</ol>

저자들은 공개할 사항이 없습니다.

전통적으로 면역학자들은 관심 대상인 T세포를 in vitro에서 자극하고, 한계 희석 실험을 수행하여 에피토프 특이적 T세포 클론을 분리함으로써 새로운 T세포 에피토프를 특성화하려 시도했습니다. 이후 T세포 클론은 크롬 방출 분석법을 사용하여 특성화되었습니다 8,9. 하지만 T세포의 빈도가 너무 낮아 분리할 수 없었거나, 특성화를 완료하기에 충분한 T세포 클론 세포를 확보하지 못해 많은 시도가 실패로 돌아갔습니다. 본 연구에서 설명하는 방법은 (1) 관심 T세포의 수가 충분한지 평가하고, (2) IFN-γ 분비를 기준으로 T세포를 선택하여 관심 T세포의 빈도를 높이며, (3) 자가 LCL을 T세포 클론 세포와 함께 파종하는 ELISPOT 분석법을 수행함으로써 적은 수의 T세포 클론 세포를 사용하여 이러한 한계점을 극복합니다. 그림 2 는 잠재적 T세포 에피토프가 존재하는 영역을 식별할 뿐만 아니라, 에피토프 특이적 T세포의 빈도를 평가하기 위해 수행된 ELISPO...

<table><tbody><tr><td>CD8 T 세포 분리 키트</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-156</td><td></td></tr><tr><td>Phytohemagglutinin</td><td>Remel, Thermo Fisher Scientific</td><td>R-30852801</td><td>2mg/vial</td></tr><tr><td>Yssel&amp;rsquo;s 배지</td><td>Gemini Bio Products</td><td>400-102</td><td>1% pooled human serum</td></tr><tr><td>96-웰 라운드 바텀 플레이트</td><td>BD Biosciences</td><td>08-772-17</td><td></td></tr><tr><td>재조합 인간 IL-2</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>202-IL-050</td><td>50&amp;#x03BC;g</td></tr><tr><td>24-웰 플레이트</td><td>Corning</td><td>07-200-84</td><td></td></tr><tr><td>인산 완충 식염수</td><td>Cellgro</td><td>MT-21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>1차 anti-IFN-&amp;#947; 단일클론 항체 (D1K)</td><td>Mabtech</td><td>3420-3-1000</td><td></td></tr><tr><td>비오틴 결합 anti-IFN-&amp;#947; 단일클론 항체 (7B-6)</td><td>Mabtech</td><td>3420-6-1000</td><td></td></tr><tr><td>Multiscreen HA ELISPOT 플레이트</td><td>EMD Millipore</td><td>MAHA S45 10</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl Sulphoxide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>100 ml 병</td></tr><tr><td>Pooled Serum, human</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S40510H</td><td>열불활성화</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Cellgro</td><td>MT-10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2287-100ml</td><td></td></tr><tr><td>Vectastain Elite ABC 키트</td><td>Vector Laboratories</td><td>NC9313719</td><td></td></tr><tr><td>안정화된 diaminobenzidine</td><td>Open Biosystems</td><td>MBI 1241</td><td></td></tr><tr><td>AID EliSpot 리더 클래식</td><td>Autoimmun Diagnostika GmbH</td><td>ELR06</td><td></td></tr></tbody></table>

인간 papillomavirus의 소설 t-세포 epitopes를 특성화하기 위해 인터페론-γ 효소 연결된 immunospot 분석의 이용

Use of Interferon-&gamma; Enzyme-linked Immunospot Assay to Characterize Novel T-cell Epitopes of Human Papillomavirus

인간 유두종 바이러스(HPV)와 같이 국소 감염을 일으키는 병원체에 특이적인 희귀 T 세포를 분리하고 특성화하는 어려움을 극복하기 위한 프로토콜이 개발되었습니다. 포함된 단계는 피험자로부터 T 세포 에피토프(epitope)를 포함하는 HPV 단백질 영역을 식별하고, 인터페론-γ(IFN-γ) 분비를 기반으로 펩타이드 특이적 T 세포를 선택하며, T 세포 클론을 배양하고 특성화하는 것입니다(Fig. 1). 피험자 1은 최근 생검을 통해 고등급 편평 상피내 병변 진단을 받았으며, T 세포를 수집한 당일에 치료를 위해 루프 전기 절제술을 받은 환자였습니다1. 중첩 합성 펩타이드를 사용하여 수행한 IFN-γ 효소 결합 면역 스팟(ELISPOT) 분석을 통해 T 세포 에피토프를 포함하는 인간 유두종 바이러스 16형(HPV 16) E6 및 E7 단백질 내 영역이 식별되었습니다(Fig. 2). 이 분석 데이터는 T 세포 에피토프를 포함하는 영역을 식별하는 것뿐만 아니라, 에피토프 특이적 T 세포의 수를 추정하고 상용 자성 비드(CD8 T-cell isolation kit, Miltenyi Biotec, Auburn CA)를 사용하여 IFN-γ 분비를 기반으로 이들을 분리하는 데 사용되었습니다. 선택된 IFN-γ 분비 T 세포는 웰당 단일 T 세포의 성장을 지원하기 위해 조사된 피더 세포 혼합물이 있는 상태에서 희석하여 단독 배양하였습니다. 이러한 T 세포 클론은 필요한 T 세포 클론 세포 수를 최소화하기 위해, 식별된 영역을 커버하는 펩타이드 및 자가 Epstein-Barr 바이러스 변형 B-림프모구 세포(LCLs, Walls 및 Crawford가 설명한 방식대로 획득)2가 있는 상태에서 IFN-γ ELISPOT 분석을 사용하여 스크리닝되었습니다. ELISPOT 분석에서 일반적으로 사용되는 웰당 1 x 105 세포1,3 대신, 1 x 105 자가 LCLs가 있는 상태에서 1,000개의 T 세포 클론 세포를 사용함으로써 필요한 T 세포 클론 세포 수를 획기적으로 줄였습니다. 자가 LCLs는 T 세포 클론 세포에 펩타이드 항원을 제시할 뿐만 아니라, 웰 내의 높은 세포 밀도를 유지하여 에피토프 특이적 T 세포 클론 세포가 IFN-γ를 분비할 수 있도록 하였습니다. 이는 IFN-γ ELISPOT 분석의 성공적인 수행을 보장합니다. 마찬가지로, IFN-γ ELISPOT 분석은 CD8 T 세포 에피토프(HPV 16 E6 52-61 FAFRDLCIVY)의 최소 및 최적 아미노산 서열과 그 HLA class I 제한 요소(B58)를 특성화하는 데 활용되었습니다. 또한 HPV 16 E6 또는 E7 단백질을 발현하는 백시니아 바이러스에 감염된 자가 LCLs를 사용하여 IFN-γ ELISPOT 분석을 수행하였습니다. 결과는 E6 T 세포 에피토프가 내인성으로 처리되었음을 보여주었습니다. 다른 고위험 HPV 유형의 상동 T 세포 에피토프에 대한 교차 인식 또한 확인되었습니다. 이 방법은 CD4 T 세포 에피토프를 기술하는 데에도 사용될 수 있습니다4.

인유두종바이러스와 같이 국소 감염을 일으키는 병원체의 T세포 에피토프를 규명하는 것은 혈중 T세포 수가 제한적이기 때문에 매우 어렵습니다. 본 영상에서는 매우 적은 수의 세포로부터 희귀 T세포를 분리하고 특성을 분석하는 방법을 설명합니다.

인간 Papillomavirus의 소설 T-세포 Epitopes를 특성화하기 위해 인터페론-γ 효소 연결된 Immunospot 분석의 이용

인간 ...와 같은 병원체에 특이적인 희귀 T 세포를 분리하고 특성을 분석하는 데 따르는 어려움을 극복하기 위한 프로토콜이 개발되었습니다.

이 절차의 전반적인 목표는 환자로부터 HPV 항원 특이적 T세포 클론을 분리, 배양 및 분석하는 것입니다. 먼저, CD8 T세포 라인을 구축하고 SBOT 분석을 수행하여 항원 특이적 T세포의 빈도를 추정합니다. 인터페론 감마 분비를 기반으로 항원 특이적 T세포 클론을 분리한 후, 고처리량 스크리닝 인터페론 감마 SBOT 분석을 수행하여 에피토프 특이적 T세포 클론을 식별합니다.최소 최적 펩타이드에 대한 T-세포 클론의 특성 분석을 계속합니다. 에피토프 서열은 에피토프가 내인성으로 처리되는지 여부 또한 결정합니다. HLA 제한 요소를 식별하고 다른 고위험군 HPV 유형에 대한 교차 반응성을 평가하십시오.궁극적인 목표는 환자로부터 유래한 항원 특이적 T 세포의 스크리닝 및 특성 분석을 통해 새롭고 임상적으로 유의미한 HPV T 세포 에피토프를 규명하는 것입니다. 항원 특이적 T 세포를 식별하기 위해 LY assay를 사용하는 것과 같은 기존 방법 대비 이 기술의 주요 장점은 성공 가능성이 훨씬 높다는 점입니다. 이 방법은 T 세포가 HPV의 어느 부분을 인식하는지와 같은 면역학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. T 세포 특이성에 관한 지식을 바탕으로 백신 및 면역 치료제를 개발할 수 있으므로, 이 기술의 영향은 자궁경부암의 치료 또는 진단으로 확장됩니다.이 방법은 CD8 T 세포 에피토프에 대한 통찰을 제공할 수 있으며, CD4 T 세포 에피토프와 같은 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다. 피험자 1로부터 확립된 CD8 T 세포주를 이용한 인터페론 감마(interferon gamma) SPO 분석 결과, HPV16 E6 46-70 영역에 T 세포 에피토프가 포함되어 있음이 확인되었습니다. 이러한 에피토프 특이적 T 세포들은 인터페론 감마 분비 여부를 기준으로 선택되었습니다. 조사된 동종 말초 혈액 단핵 세포, B 림프모구 세포 및 피토헤마글루티닌을 포함하는 feeder 세포 혼합물을 complete E cells 배지에서 준비하십시오.이제 피더 세포 혼합물 내에서 분리된 에피토프 특이적 T 세포를 연속 희석하여, 멀티채널 파이펫 플레이트를 사용하여 mL당 5개의 세포 농도로 준비합니다. 희석된 에피토프 특이적 T 세포 100 µL를 96웰 라운드 바텀 플레이트의 각 웰에 분주합니다. 37 °C, 5% CO2 조건에서 5일 동안 배양하며, 11일에서 14일 사이에 재조합 인간 인터루킨 2로 세포

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

특발성 질환에 적응 면역의 미생물 목표 식별은 효소 연결된 immunospot 분석을 사용하여 수행할 수 있습니다.

효소 링크된 Immunospot 분석 (ELISPOT) : 미생물 항원 반대 예뻐 - 1 세포 면역 반응의 부량

이 동영상은 거대세포바이러스(HCMV)의 중화를 측정하기 위해 고안된 면역형광 분석을 보여줍니다. 바이러스 특이적 항체는 바이러스와 혼합되어 인간 섬유아세포 세포와 함께 배양됩니다. 항체는 바이러스를 중화하여 숙주 세포를 감염시킬 수 없게 만드는 반면, 중화되지 않은 바이러스는 세포를 감염시킵니다. 배양 후, 중화 정도는 면역형광을 사용하여 바이러스에 감염된 세포를 정량화하여 결정됩니다.

인간 거대세포바이러스의 중화를 측정하기 위한 면역형광 방법

이 문서에서는 호스트와 두 개의 직교 방법의 조합을 사용 병원균의 단백질 사이의 높은 자신감 상호 작용 집합의 식별에 초점을 맞추고 효모 두 하이브리드 HT-GPCA이라는 포유 동물 세포에서 높은 처리량의 상호 작용 분석에 의해 따랐다.

호스트 병원체 단백질 - 단백질 상호 작용의 풍경의 특성을 비교 접근

이러한 단일 세포 수준에서 사이토 카인 생성을 감지하고 T 세포 반응의 양적 및 질적 인 특성을 제공하는 감마 인터페론 (IFN-γ) ELISPOT 등 기능적 분석법 비발 세대 수두 대상 포진 향한 세포 매개 성 면역 반응을 평가하기 위해 사용될 수있다 바이러스 (VZV).

제대혈 이식을 다음과 IFN-γ 평가하기 ELISPOT 분석을 수두 - 대상 포진 바이러스 - 특정 세포 성 면역의 개발

장기 배양 인터페론 γ 효소 - 결합 된 Immunospot 분석은 중앙 메모리 응답의 척도로서 사용하고 보호 항 미코 박테리아 백​​신 응답과 상관된다. 이 분석을 통해, 말초 혈액 단핵 세포는 마이코 박테리아 항원과 인터루킨 -2 14 일 동안 활성화, 분화 및 중앙 메모리 T 세포의 확장을 자극.

소에 이펙터 및 메모리 T 세포 반응을 평가하기위한 장기 배양 인터페론-γ 효소 링크 된 Immunospot 분석의 응용 프로그램

여기에서는 상피내 감마 델타 T 세포의 분석을 위해 인간 상경부 내 림프구를 얻기 위한 분리 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 자성 비드 또는 세포 분류에 의해 자궁경부 감마 델타 T 세포의 정제를 위해 확장될 수 있습니다.

인간의 자궁 경부 감마 델타 T 세포의 분리 및 유세포 분석

여기 우리는 개발 및 유효성 검사는 단일 분자 배열 디지털 ELISA 분석 결과의 인간의 샘플에서 모든 IFN-α의 매우 민감한 탐지를 가능 하 게 설명 하는 프로토콜을 제시.

개발 및 검증 磁 단일 분자의 배열 디지털 효소 연결 된 Immunosorbent 분석 결과 인간 인터페론-α에 대 한

기니 돼지 PBMCs에 대 한 인터페론-감마 ELISpot 분석 결과 개발 전염병 연구이 관련성이 높은 모델 T 세포 응답의 특성을 수 있습니다. 우리는 DNA 백신의 피부 전달과와 관련 된 T 세포 응답을 측정 하는 분석 결과 적용 했습니다.

예방 접종 후 기니 돼지 모델에서 측정 T 세포 응답에 최적화 된 인터페론-감마 ELISpot 분석 결과

B형 간염 바이러스(HBV)유래 펩타이드 매트릭스에 기초하여, HBV 특이적 CD4 T 세포 반응은 HBV 특이적 CD4 T 세포 에피토프의 식별과 병행하여 평가될 수 있었다.

펩타이드 매트릭스에 근거한 HLA-DR-제한 CD4 T 세포 에피토프의 HBV 특정 CD4 T 세포 반응 및 식별의 분석

이 원고는 유세포 분석기를 사용하여 종양 세포 유래 세포밖 소포 (EVs)의 생체 내 면역원성을 평가하는 방법을 설명합니다. 치료를 받는 종양으로부터 유래된 EVs-유도된 면역원성 세포 사멸은 종양 면역감시에 특히 관련있는 것으로 보인다. 이 프로토콜은 옥살리플라틴-유도된 면역자극성 종양 EVs의 평가를 예시하지만, 다양한 설정에 적응될 수 있다.

생체 내 비장 T 세포의 유세포 분석기에 의한 종양 유래 세포밖 소포의 면역원성 스크리닝

여기서는 항원 표시 바이러스 유사 입자(VLP)에서 중화 에피토프를 검출하는 프로토콜을 제시한다. 인간 면역결핍 바이러스(HIV)-유래 VLP의 면역 침전은 단백질 G-컨쥬게이트 자기 비드에 결합된 봉투 당단백질 특이적 단일 클론 항체를 사용하여 수행된다. 포획된 VLP는 이후 바이러스 성 코어 단백질 개그 특이적 항체를 사용하는 SDS-PAGE 및 서양 블롯 분석을 받게 된다.

포획 분석기를 사용하여 바이러스와 같은 입자(VLP) 기반 백신에 표시되는 항원에서 중화에 민감한 에피토프 검출

학습하세요 인간 유두종바이러스(HPV) 특이적 T세포 클론을 분리하고 성장시키는 방법을 배우세요. 인터페론-γ 분비 기반 분석으로 항원 특이적 T세포 빈도를 측정하고 에피토프 특이적 클론을 식별하여 면역학 연구와 백신 개발에 활용하세요.

인간 Papillomavirus의 소설 T-세포 Epitopes를 특성화하기 위해 인터페론-γ 효소 연결된 Immunospot 분석의 이용

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