Name: 세포내 세균성 병원균과 Zebrafish 태아의 감염 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-15T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 18 s
Description: 배우세요 투명한 zebrafish 태아에 형광 세균을 미세주사하여 선천성 면역세포와 병원균의 상호작용을 실시간 영상화하는 방법을. 이 기술은 면역학 연구자들이 감염 반응을 관찰하는 데 필수적입니다.

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저자 물고기 보호를위한 그림 4, Ulrike Nehrdich 및 데비 드 위트의 이미지 및 유용한 토론을 위해 다른 연구실 회원, 차오의 Cui에게 감사 층 드 Kort, 에스더의 웅크리다과 랄프 카르 발료주세요. 이 작품은 경제의 네덜란드 사역의 스마트 믹스 프로그램과 교육, 문화, 과학, 유럽위원회 일곱째 프레임 워크 프로젝트 ZF-건강 (보건-F4-2010-242048), 유럽 마리 퀴리의 교육부에 의해 지원됩니다 초기 교육 네트워크 FishForPharma (PITN-GA-2011-289209), 그리고 호주 NHMRC (637394)에 의해. 호주의 재생 의료 연구소는 빅토리아와 호주 정부의 주 정부의 보조금에 의해 지원됩니다.

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저자가 공개하는 게 없다.

이 문서에서 설명하는 감염 방식은 주로 호스트 타고난 면역 유전자 또는 세균성 독성 유전자 하나의 기능을 연구하는 데 사용됩니다. 정맥 마이크로 주입 방법 (프로토콜 5, 6.1)과 같은 공부를 가장 자주 사용됩니다. 사후 혈액 섬의 꼬리 정맥은 1 일 된 배아의 정맥 주사를위한 가장 편리한 위치입니다. 꼬리 정맥 나중 단계에서 침투하기가 더 어려워집니다로서 2-3 dpf에서 배아의 정맥 주사 사이트로 Cuvier의 덕트를 선호합니다. 모든 경우에 그것은 cfu의 계산을위한 도금 사출 inocula으로 선택되어야 박테리아의 일관성있는 번호로 배아를 주입하는 것이 중요합니다. 다음과 같은 측면 재현할 주사를 달성하기 위해 고려되어야합니다. 첫째, 이것은 고품질의 유리 microcapillary 주사 바늘을 가지고 필수적입니다. 바늘 끝이 너무 클 경우 주사가 발생하는 출혈을 위해 충분히 큰 바늘 구멍을 만들 것입니다주입된 박테리아가 혈액 순환의 돈은 절대 나오지 않습니다. 둘째, 박테리아는 혈액 순환에 직접 주입해야합니다. 바늘 끝은 난황 확장으로 분사 유체 확산 정맥 안쪽 아니면되지 않으면 배아는 실험에서 폐기되어야합니다. 셋째, M. 주입을위한 캐리어로 PVP40를 사용하여 marinum은 유리 바늘에 가라앉고에서 세균을 방지에 도움이 될 것입니다. PVP40 주사 기간에 걸쳐 더 재현할 inocula 그 결과 현탁액의 균질성 향상됩니다. PVP40 또한 S. 위해 사용될 수있다 큰 크기와 박테리아의 밝은 형광이 실험 중에 분사 inoculum 이상의 시각적 제어를 허용하기 때문에 typhimurium 주사하지만, 여기서는 덜 중요하다. 주사 연습을 위해 우리는 페놀 붉은 염료 (1 % V / V) 또는 1 μm의 다양한 색상 (Invitrogen)에서 사용 가능한 형광 분야의 사용을 권장합니다. 기술이 마스터되면, 그것은 약 30 minut 소요초밖에는 아가로 오스 플레이트에 배아를 정렬하고 세균성 사출 볼륨을 조정하는 데 필요한 시간을 포함하여 50-100 배아를 주입합니다. 혈액 섬 (프로토콜 5)로 또는 Cuvier (프로토콜 6.1)의 덕트로 정맥 주사가 가장 일반적으로 사용되고 있지만,이 비디오 문서에서 설명한 감염의 대안 노선 (프로토콜 6.2, 6.3 대식 세포 및 호중구 chemotaxis을 공부하는 데 유용 증명했습니다 및 6.4), 감쇠 박테리아 변종 (6.5 프로토콜)의 성장을 공부하고, 높은 처리량 어플 리케이션 (프로토콜 6.6) 4-8 대한 zebrafish 감염 모델을 적용할 수 있습니다. 설명 마이크로 사출 방법도 바이러스 18, 19, 곰팡이 포자 14, 20, protozoan의 기생충 (마리아 Forlenza, 개인 커뮤니케이션)의 주사에 대해 적용할 수 있습니다. 이 비디오 문서에서 설명하는 분사 절차에 유용한 첨가 zebr로 박테리아의 피하 주입에 대해 최근에 설명된 절차입니다금부어의 배아 21. 이 절차는 조직 표면에 효율적으로 빨아들이다 세균을 찾았으나되었다 neutrophils에 의한 세균의 phagocytosis를 공부하기 위해 적용되었다 macrophages과는 달리, 혈액 또는 외부로 유체가 노니는 신체 충치로 주입시 박테리아를 phagocytose 것이 거의 없었습니다. 피하 주사의 배아이 동영상에 대한 문서에서 설명한 꼬리 근육 주사 용과 비슷한 위치되지만, 바늘은 체절을 통해 박테리아를 주입하기 위해 단지 피부 아래에 삽입됩니다. 그것은 마이크로 사출은 본질적으로 감염의 인위적인 경로는 것을 고려하는 것이 중요합니다. 그러나, 초기 배아는 세균성 병원체에 대한 외부 노출에 매우 저항력이 있습니다. 실제로 태아가 세균 현탁액 목욕을하고 침지 assays는 우리 손에 22 재현할 수 없습니다. 일부 배아는 침수시 감염 될 수 있지만, 우리는 사망률 요금과 특급에 큰 변화를 관찰했습니다이러한 assays에서 개별 배아 간의 염증 마커 유전자의 이온. 이 문서에서 설명하는 마이크로 사출 방법은 재현성 감염을 달성하며 호스트 타고난 면역 세포와 세균의 상호 작용을 연구하는 데 특히 유용합니다. 각각의 배아에서 세균 감염을 계량하기위한 효율적인 접근법은 맞춤 전용 픽셀 부량 소프트웨어 17, 23에 감염된 태아의 형광 이미지를 분석하는 것입니다. 이 접근법은 감염된 태아의 도금 후 cfu 카운트의 결과와 잘 상관 관계를 보여왔다. 마찬가지로 태아 당 백혈구 수치의 상대적인 변화는 유전자 변형 백혈구의 형광단 기자 라인의 디지털 이미지 분석에 의해 계량되어,이 방법은 감염 24 호스트 leukopoietic 응답을 quantifying에 적용되는 것입니다. 호스트 타고난 면역 유전자의 기능을 설명하는 감염 모델을 결합하여 생체내에 효율적으로 조사 수morpholino를 최저로. Morpholinos 특정 RNAs을 타겟으로하고이 저널 10, 25의 다른 동영상 기사와 같이 1-세포 단계 zebrafish의 배아에 주입하면 유전자 제품의 표현을 줄이고 합성 안티 센스 oligonucleotides입니다. morpholino의 최저 연구에서는 비교되는 모든 배아 그룹이 세균 주사 이전 올바르게 개최되는 매우 중요합니다. 배아는 시간이 지남에 따라 점차 유능한되는 개발 면역 체계를 가지고 있기 때문에 이것은 특히 중요합니다. zebrafish 배아의 주요 타고난 면역 하위 집합, macrophages와 neutrophils를 구분하는 현재 사용할 수있는 여러 가지 유전자 변형 기자 라인이 있습니다. mpx 및 lyz의 발기인은 호중구 기자 노선 16, 26, 27을 생성하는 데 사용되었으며 csf1r (FMS)과 MPEG1 발기인은 대식 세포 기자에게 14, 28, 생산하는 데 사용되었다. 동안 csf1r (FMS)가 추가 xanthophores로 표현되며, MPEG1 표현이 macrophages에 독점적이다. 이 동영상을 문서에 나타난 바와 같이, 최근에 개발된 MPEG1 기자 라인 macrophages에 의해 영상 세균성 phagocytosis에 대한 매우 유용합니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 공급 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 페놀 레드 </td><td> 시그마 </td><td> P0290 </td></tr><tr><td> 글리세린 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> 228,210 </td></tr><tr><td> Difco 미들 7H10 한천 </td><td> Becton, Dickenson 및 회사 </td><td> 262,710 </td></tr><tr><td> BBL 미들 OADC 농축 </td><td> Becton, Dickenson 및 회사 </td><td> 211,886 </td></tr><tr><td> Difco 미들 7H9 국물 </td><td> Becton, Dickenson 및 회사 </td><td> 271,310 </td></tr><tr><td> BBL 미들 ADC 농축 </td><td> Becton, Dickenson 및 회사 </td><td> 211,887 </td></tr><tr><td> 십대 초반 80 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> P1754 </td></tr><tr><td> Polyvinylpyrrolidone (PVP40) </td><td> Calbiochem, 머크 KGaA </td><td> 529,504 </td></tr><tr><td> N &lt;/ em&gt;는-Phenylthiourea (PTU) </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> P7629 </td></tr><tr><td> 에틸 3 - aminobenzoate methanesulfonate 소금 (Tricaine) </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> A5040 </td></tr><tr><td> 메틸 셀룰로오스 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> M0387 </td></tr><tr><td> SeaPlaque 아가로 오스 (낮은 용융 점 아가로 오스) </td><td> Lonza 주식 회사 </td><td> 50,100 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1.0 μm의 빨강, 형광 (605분의 580)) </td><td> Invitrogen </td><td> F8821 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1.0 μm의, (515분의 505) 노랑 - 녹색 형광) </td><td> Invitrogen </td><td> F8823 </td></tr></tbody></table>

세포내 세균성 병원균과 zebrafish 태아의 감염

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

Zebrafish (Danio rerio) 배아는 점점 호스트 병원체 상호 작용 1 척추 타고난 면역 체계의 기능을 연구를위한 모델로 사용됩니다. 타고난 면역 체계의 주요 셀 유형, macrophages와 neutrophils은 사전 적응 면역 반응에 필요한 lymphocytes의 성숙에 embryogenesis의 첫 번째 일 동안 개발할 수 있습니다. 배아 다수를 획득 용이성은, 외부 개발, 배아 및 애벌레 단계의 광학 투명성으로 인해 그들의 접근은 유전자 도구, 유전자 변형 리포터 라인의 광범위한 돌연변이 자원과 콜렉션의 다양한 모든 zebrafish의 다양성에 추가 모델. 살모넬라 enterica serovar Typhimurium (S. typhimurium)와은 Mycobacterium marinum는 macrophages에 intracellularly 거주하고 자주 zebrafish 배아에서 호스트 병원체 상호 작용을 연구하는 데 사용됩니다. 이 두 가지의 감염 과정세균성 병원균은 비교하는 흥미로운 때문에 S. typhimurium 감염은 M. 반면, 급성 하나 일 이내에 치명적입니다 marinum 감염 만성이고 애벌레의 단계 2, 3까지 몇 군데하실 수 있습니다. 배아 (그림 1)로 박테리아의 마이크로 주입의 사이트는 감염이 급속도로 전신이 될 것이다 또는 초기화된 상태로 유지됩니다 여부를 결정합니다. 급속한 조직 감염에 의해 설정할 수 마이크로 주입 직접 사후 혈액 섬의 꼬리 정맥을 통해 혈액 순환에 또는 Cuvier, 트렁크 vasculature로 마음을 연결하는 난황에 대한 광범위한 유통 채널의 덕트를 통해 박테리아를. 한 dpf에서이 단계의 배아는 phagocytically 활성 macrophages을 가지고 있지만 neutrophils 아직 혈액 섬에 주입, 성숙하지 않은 경우 사용하는 것이 좋습니다. 배아도 기능적 (myeloperoxidase 생산) neutrophils를 개발 2-3 dpf,시 주사의 경우 Cuvier의 덕트는 t으로 선호그는 주사 사이트. 지역의 감염에 대한 골수양 세포의 이동 마이 그 레이션을 공부하려면, 박테리아는 꼬리 근육, 귀의 소포, 또는 hindbrain 뇌실 4-6로 주입 할 수 있습니다. 또한, notochord, 골수양 세포에 정상적으로 접근할 것 같습니다 구조, 지역 감염 7 매우 쉽습니다. 높은 처리량 어플 리케이션을위한 유용한 대안은 기름지게 8 후 첫 시간 이내에 배아의 노른자로 박테리아의 주사입니다. 형광 macrophages 또는 neutrophils과 형광 박테리아와 유전자 변형 zebrafish 라인을 결합하면 호스트 병원체 상호 작용의 멀티 컬러 이미징을위한 이상적인 환경을 만듭니다. 이 비디오 기사는 S로 zebrafish 배아의 정맥과 지역 감염에 대한 자세한 절차를 설명합니다 typhimurium 또는 M. marinum 박테리아와 타고난 면역 계통의 세포와 상호 작용의 후속 형광 이미징을위한.

투명 zebrafish의 배아는 다음과 같은 시각화하는 유용한 모델 호스트와 타고난 면역 세포와 세포 세균성 병원체 간의 기능상 학습 상호 작용을 증명했습니다<em&gt; 살모넬라균 typhimurium</em&gt;과<em&gt;은 Mycobacterium marinum</em&gt;. 박테리아와 멀티 컬러 형광 이미징의 미세 주입은 zebrafish 배아 감염 모델의 응용에 관련된 필수적인 기술입니다.

세포내 세균성 병원균과 Zebrafish 태아의 감염

제브라피시(Danio rerio) 배아는 숙주-병원체 상호작용에서 척추동물의 선천 면역 체계 기능을 연구하기 위한 모델로 점점 더 많이 사용되고 있습니다.

이 실험 절차의 전반적인 목적은 제브라피시 배아에 형광 박테리아를 미세 주입하여 숙주 면역 세포와의 상호작용을 살아있는 상태에서 이미지화하는 것입니다. 이를 위해 먼저 박테리아 현탁액을 준비하여 주입 바늘에 충전합니다. 그다음, 배아의 발달 단계를 확인하고 주입 플레이트 위에 정렬합니다.그 다음, 국소적 또는 전신적 세균 감염을 유도하기 위해 선택한 경로로 세균 접종액을 주입합니다. 마지막으로, 배아를 마운팅하고 이미징을 수행합니다. 최종적으로, 형광 및 공초점 현미경을 통해 투명한 제브라피시 배아 숙주의 형광 표지된 식세포 내에 세균 병원체가 세포 내로 국소화된 결과를 얻을 수 있습니다.제브라피쉬 배아 모델은 숙주와 병원균 간의 상호작용을 생체 내 영상화하는 데 매우 강력한 도구이므로, 이 방법은 면역학 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 일반적으로 이 방법이 처음인 연구자는 전신 감염을 위해 제브라피쉬 배아의 혈액 순환계에, 또는 국소 감염을 유도하기 위해 특정 구획에 박테리아를 재현성 있게 미세 주입하는 과정에서 많은 연습이 필요하기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다. 유리 미세 모세관 바늘을 뽑아내고 팁을 45도 각도로 베벨링한 후, 일정한 혈액 순환 여부를 확인하여 수정 후 28시간이 경과한 제브라피쉬 배아를 준비합니다. 이때 눈의 색소 침착 시작, 곧게 펴진 꼬리, 그리고 눈의 바로 복측에 위치한 심장을 확인하십시오.배아를 마취시킨 후, 마이크로 로더 팁을 사용하여 미리 준비한 박테리아 접종물을 바늘에 충전합니다. 충전된 바늘을 스탠드에 연결된 마이크로 매니퓰레이터에 장착하고 실체 현미경 아래에 배치합니다. 주입 시간은 0.2초로, 보정 압력은 15 Hector Pascals로 설정합니다.사용하는 바늘에 맞는 적절한 주입량을 얻기 위해 주입 압력을 700에서 900 헥토파스칼(Hector Pascals) 사이로 조정하십시오. 주입 전, 바늘이 장착된 마이크로 매니퓰레이터를 적절한 위치에 설정하십시오. 마취된 배아를 평평한 1% agarose 주입 플레이트에 놓고 남은 난자수를 제거하십시오.다음으로, 헤어 루프 툴을 사용하여 각 주입 단계에 맞춰 배아들을 정렬합니다. 주입 과정 중에는 플레이트를 손으로 움직여 배아의 꼬리 부분이 바늘 끝을 향하도록 방향을 잡습니다. 바늘 끝을 생식비뇨기 개구부 근처의 배꼽 정맥 바로 위에 위치시킵니다.바늘 끝으로 주피층을 뚫고 원하는 용량의 형광 표지 박테리아를 주입합니다. 당사는 약 250 colony forming units 또는 CFUs의 salmonella typhimurium과 약 120 CFUs의 mycobacterium marum을 사용합니다. 주입이 올바르게 수행되었다면, 주입 직후 혈관 시스템의 부피가 팽창하는지 확인하여 주입된 박테리아 현탁액이 고들 정맥(coddle vein)을 통해 심장 방향으로 혈류를 따라 이동하는지 모니터링합니다.실험 중에 주입량이 동일하게 유지되는지 자주 확인하십시오. 실험 전반에 걸쳐 주입의 일관성을 확인하기 위한 대조군을 마련하기 위해, 세균 성장 배지 위의 멸균 PBS 한 방울에 세균 한 방울을 직접 주입하십시오. 약 30개의 배아에 주입할 때마다 이 방울을 도말하고 배양 후 세균 군락 수를 측정하십시오.주입 부피 내의 CFU를 결정하려면, 주입 직후 혈류 내에서 순환하는 개별 형광 styria 세포를 형광 실체 현미경으로 관찰하고, 적절하게 주입되지 않은 배아는 폐기하십시오. M marum 박테리아의 형광 응집체는 감염 후 2일까지 관찰되어야 하며 시간이 지남에 따라 더 크게 성장합니다. cuvier 관에 주입하려면, 수정 후 2~3일 된 마취된 배아를 정렬하십시오.배아의 등쪽에서 45도 각도로 가돌 정맥(coddle vein) 주사를 하려면, 바늘을 큐비에관(duct of cuvier)의 시작 지점에 삽입하십시오. 후뇌 뇌실 주사 위치의 경우, 큐비에관이 난황낭 위로 넓어지기 시작하는 지점의 바로 등쪽에 삽입합니다. 수정 후 32시간이 된 배아의 등쪽이 바늘 끝을 향하게 하여 마취시키십시오.꼬리 근육에 주입하기 위해 신경 헬륨에 닿지 않도록 전방 위치에서 후뇌 뇌실로 바늘을 삽입하십시오. 마취된 수정 후 1~2일 된 배아의 꼬리가 바늘 끝을 향하도록 배치하고, 바늘을 약 65도 각도로 유지한 상태에서 이낭 주입을 위해 생식공 상단의 근육에 주입하십시오. 마취된 수정 후 2~3일 된 배아의 꼬리가 바늘을 향하도록 배치하십시오.수정 후 1~2일 된 배아의 신경삭(node cord)에 주입하기 위해, 65도 각도로 낮은 압력을 가하며 주입하십시오. 배아의 꼬리가 바늘 반대 방향을 향하게 합니다. 바늘을 꼬리 근육 조직을 통해 신경삭으로 삽입하십시오.16~1000 세포 단계 배아의 난황 주입을 위해, 바늘을 chorion 관통시켜 난황 중심부까지 찔러 넣어 주입합니다. trica가 포함된 egg water로 채워진 1% augurous 층의 페트리 접시에 감염된 배아를 넣어 마취시킵니다. 헤어 루프 도구를 사용하여 형광 실체 현미경 하에서 이미징에 적합한 위치로 배아를 정렬합니다.주입 직후 혈류 속을 순환하는 개별 형광 t-sym 세포를 관찰할 수 있습니다. 측면도 외에 다른 각도의 관찰이 필요한 경우, 배아를 1.5% methyl cellulose에 고정하고 헤어 루프 툴을 사용하여 배아를 원하는 위치로 조정한 후, 도립 공초점 현미경을 사용하여 감염 상태를 이미징하십시오.유리 바닥 접시에 저융점 aeros를 한 방울 떨어뜨립니다. 마취된 배아를 소량의 egg water와 함께 aeros 방울 속에 넣고, 헤어 루프 툴을 사용하여 배아의 위치를 잡습니다. aeros를 굳힌 후, trica가 포함된 egg water에 aeros 방울을 잠기게 합니다.이제 샘플은 공초점 이미징 준비가 되었습니다. 수정 후 1일 된 배아의 혈액섬(blood island)에 Salmonella typhimurium 또는 Mycobacterium marum 박테리아를 주입합니다. 이는 대식세포에 의한 급격한 식세포 작용을 유도합니다. 상대적으로 크고 밝은 형광의 DS.Red 표지 Styrian 박테리아의 확산은 감염 2시간 후 스테레오 형광 및 공초점 이미징을 통해 직접 관찰할 수 있습니다. 감염 후 이미징 결과, 많은 박테리아가 형광 표지된 대식세포에 의해 식세포 작용되었음을 확인할 수 있습니다.야생형 styria를 250 CFU 용량으로 주입하면 강력한 전염증 반응이 유도되며 하루 이내에 치사합니다. 반면, erum을 정맥 주사하면 지속성 감염이 발생하며, 감염된 대식세포가 결핵의 특징인 육아종의 초기 단계로 간주되는 조밀한 응집체를 형성합니다. 감염 5일 후 transgenic EG one EGFP 라인에서 이러한 육아종 유사 응집체를 공초점 이미지로 촬영하면 m cherry로 표지된 M num 박테리아의 세포 내 성장을 확인할 수 있습니다.녹색 형광 대식세포가 있는 상태에서, 수정 후 32시간째에 대식세포가 없는 구획인 후뇌 뇌실로 박테리아를 주입할 수 있습니다. 이 구획에 M cherry로 표지된 M marum 박테리아 20~100 M을 주입하면, 여기에서 보는 바와 같이 대식세포가 빠르게 침투하여 박테리아를 식세포 작용으로 섭취하게 됩니다. 형질전환 M-P-X-E-G-F-P를 사용하여 이청낭에 약 20 CFU의 Styria를 주입하면, 감염 3시간 후에 호중구가 유인됩니다. 이러한 반응은 PBS 대조군 주입에서는 관찰되지 않는 반면, 백혈구 침투에 저항성이 있는 것으로 보이는 척삭은 다른 조직에 주입되었을 때 강하게 약화되는 erum 돌연변이체의 성장이 허용되는 구획입니다.2240 CFU의 erum 박테리아를 요크에 주입하면, 수일에 걸쳐 배아 조직으로 퍼져 나가며 기존의 정맥 주사 방식으로 관찰된 것과 유사한 육아종성 응집체를 형성합니다. 이 절차를 수행할 때, 배아의 면역 체계가 발달 과정에서 점차 성숙해지므로 제브라피시 배아의 발달 단계를 정확하게 설정하는 것이 매우 중요하다는 점을 유념해야 합니다.이 절차에 이어, 배아의 선천성 면역 체계가 병원성 감염에 어떻게 반응하는지와 같은 추가적인 의문에 답하기 위해 전사체 프로파일링 및 면역조직화학법과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

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출처: Zhang, X., et al. 생체 재료 관련 황색포도상구 균 감염의 생체 내 시각화 및 생체 내 분석을 위한 제브라피쉬 배아 모델. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 황색포도상구균을 주입한 제브라피쉬 배아의 형광 이미징을 보여주며, 감염 진행 및 박테리아 분포를 정량화하여 생체 내 숙주-병원체 상호 작용에 대한 생체 재료 마이크로스피어의 영향을 평가할 수 있습니다.

 제브라피쉬 배아에서 생체 재료 관련 세균 감염의 형광 이미징

출처: Zhang, X. et. al., 생체 재료 관련 황색포도상구균 감염의 생체 내 시각화 및 생체 내 분석을 위한 제브라피쉬 배아 모델. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 이식된 생체 재료와 관련된 감염을 연구하기 위한 제브라피쉬 배아 모델을 보여줍니다. 폴리스티렌 마이크로스피어를 황 색포도상구균에 주입하면 박테리아 생존이 향상되어 이식된 재료의 감염 촉진 역할이 확인됩니다.

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출처: Shi, J. 외, 식물 병원체의 분비 효과자로부터 RNA 침묵 억제 물질의 스크리닝 및 식별. J. Vis. 경험 (2020)이 영상은 아 세 토시린곤으로 병원성 유전자 발현을 유도한 후 세척과 재현탁을 통해 항생제를 제거하여 식물 조직에 유전자 전달을 위한 형질전환 준비 현탁액을 생성하는 과정을 시연합니다.

제브라피시 배아의 꼬리정맥에 박테리아를 미세주입하는 방법

출처: Bernut, A. 외, 얼룩말피시 배아에서 Mycobacterium absrumus 의 발병기전 해독 및 영상 분석. J . Vis. Exp. (2015).이 영상은 감염된 제브라피시 배아에서 Mycobacterium abscessus 를 분리하고 정량화하는 프로토콜을 시연합니다. 이 절차는 배아 안락사, 조직 용해, 균질화를 통해 박테리아를 방출한 후, 원심분리 및 계면활성제 완충제 내 재현탁을 포함합니다. 마지막으로, 박테리아 현탁액을 연속적으로 희석하여 항생제 보조 한천에 도판한 후 배양하여 집락 형성과 정량화를 가능하게 합니다.

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출처: Flores, E. 외 제브라피시 유충의 식중성 감염 매개체로 원생동물 파라메시움 카우다툼을 이용하기. J. Vis. 경험 (2019년).이 영상은 형광성 대장균에 감염된 파라미시아를 먹여 제브라피시 유충에서 식중성 박테리아 장 감염 모델을 구축하는 방법을 시연합니다.

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